Name: localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech
Uploaded: 2008-04-17T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

我々は、ノックインと成長している感覚突起のタイムラプスムービーを提供するための遺伝子のために構造を生成する際に彼の助けのために博士はマイケルベイカーに感謝したいと思います。我々はまた、空気銃の実験と技術支援のためにバージニアVandelinderに感謝します。

粒子は、dsRNA分子、DNAプラスミドや染料などの異なる試薬で被覆することができます。粒子の種類と直径が試薬と組織における標的細胞の深さに応じて選択される：より大きな粒子がさらに浸透するが、組織に何らかの損傷を与える可能性があります。 1。 dsRNAを被覆粒子の​​調製<ol><li>氷の上で100％イソプロパノールを置きます。 </li><li> 100ミリリットル結合バッフ?...

<ol>
	<li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+of+the+receptor+tyrosine+phosphatase+HmLAR2+in+a+single+cell+of+an+intact+leech+embryo+leads+to+growth-cone+collapse.">RNAi of the receptor tyrosine phosphatase HmLAR2 in a single cell of an intact leech embryo leads to growth-cone collapse.</a> Current Biology. 10, 1071-1074 (2000).</li><li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Hirudo+medicinalis+DNA+Promoters+for+Targeted+Gene+Expression.">Characterization of Hirudo medicinalis DNA Promoters for Targeted Gene Expression.</a> Journal of Neuroscience Methods. 156, 145-153 (2006).</li><li>Gan, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+expression+of+a+leech+netrin+suggests+roles+in+the+formation+of+longitudinal+nerve+tracts+and+in+regional+innervation+of+peripheral+targets.">Cellular expression of a leech netrin suggests roles in the formation of longitudinal nerve tracts and in regional innervation of peripheral targets.</a> Journal of Neurobiology. 40, 103-115 (1999).</li><li>Juven-Gershon, T., Cheng, S., Kadonaga, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+super+core+promoter+that+enhances+gene+expression.">Rational design of a super core promoter that enhances gene expression.</a> Nature Methods. 3, 917-922 (2006).</li><li>Rinberg, D., Simonnet, C., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumatic+capillary+gun+for+ballistic+delivery+of+microparticles.">Pneumatic capillary gun for ballistic delivery of microparticles.</a> Applied Physics Letters. 87, 014103 (2005).</li><li>Shefi, O., Simonnet, C., Baker, M. W., Glass, J. R., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtargeted+gene+silencing+and+ectopic+expression+in+live+embryos+using+biolistic+delivery+with+a+pneumatic+capillary+gun.">Microtargeted gene silencing and ectopic expression in live embryos using biolistic delivery with a pneumatic capillary gun.</a> Journal of Neuroscience. 26, 6119-6123 (2006).</li></ol>

このデモでは、ノックインにライブリーチ胚の小さなローカライズされた体積のセルに金粒子を提供し、遺伝子をノックダウンする空気圧キャピラリー銃を使用。対象地域は、一般的に約150μmおよび粒子の直径は、0から50μmの間で調整可能だったの平均浸透深さ約〜15μmを、発見されたていた。粒子は軸索ガイダンス因子ネトリンのdsRNA分子でコーティングされたとき、彼らは明らかにだけ粒子を含む細胞で...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gold particles</td>
<td>Other</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>S1600ri</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>binding buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>silicone rubber </td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech

このビデオでは、我々は生きている組織への試薬の正確な微粒子銃配信のための空気圧キャピラリー銃の使用を示しています。我々は内部コントロールとして未処理のセグメントを残して、ヒル胚の選択されたセグメントに摂動の遺伝子発現パターンにプロシージャを使用します。 空気圧キャピラリー銃は、試料を開くことなく、開発の初期段階での細胞の内部の層に到達するために使用することができます。生体組織への物質のローカライズを導入する方法として、銃による遺伝子銃送達は、いくつかの利点があります：それは、高速、非接触および非破壊です。さらに、シングルキャピラリー銃は、異なる物質の独立した配信のために使用することができます。配達地域は、〜50から150ミクロンの横方向の寸法を持っていると、0〜50μmの間で調節可能である平均浸透深さ、周囲に15〜上程度を拡張できます。この配信は単一の細胞外注射を介して、または遺伝学的アプローチによるマイクロインジェクションし、全身のノックダウンによるノックダウンの間に中間の選択した場所にあるセルの限られた数を対象とすることができるという利点があります。 背側ドメインではないノックダウンまたは自然にある中央のニューロンによって、腹側体壁に表現されている軸索ガイダンス分子ネトリン、の式でノッキングの場合は、しかし、我々は、体壁にdsRNA又はプラスミド- DNAの分子を提供し、中枢神経節。 、（i）の特定のアッセイのための実験装置（加速圧力を調整する）の準備、（ⅱ）塗装ガンに被覆された粒子をロードするdsRNA又はDNAの分子と粒子、（III）：この手順は、次の手順が含まれます最大1アッセイ、（IV）の2つの試薬に（粒子の配信、（v）を標的組織（体壁または神経節）に被覆粒子の​​配信のために動物を準備し、そして（vi）の胚を処理して免疫染色、免疫組織化学と神経ラベリング）は2〜3日配達後、通常、結果を可視化する。 粒子がネトリンdsRNAをでコーティングされたとき、彼らは明らかに粒子のみを（通常は、細胞あたり1-2粒）を含む細胞内で発生したネトリン発現のノックダウン見える原因。粒子は、彼らが核で停止した神経細胞におけるプラスミドのエンコーディングEGFP誘起蛍光でコーティング。

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Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

このビデオでは、我々は新たな小型遺伝子銃を持つ生きている組織への試薬の正確な微粒子銃配信のための手順を示しています。我々は、単一セグメントの腹側体壁と神経節にdsRNAの分子を提供することで、ヒル胚における軸索ガイダンス分子ネトリンの発現をノックダウンされています。

ローカライズされたRNAiと創薬リーチにおける外来遺伝子の発現が

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Research

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Biology

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