Name: localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech
Uploaded: 2008-04-17T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить д-р Майкл Бейкер за помощь в создании конструкций для генной нокаут в себе и для обеспечения покадровой фильмы растущей сенсорных проекций. Мы также хотели бы поблагодарить Вирджиния Vandelinder для оказания технической помощи с экспериментами пневматического пистолета.

Частицы могут быть покрыты различными реагентами, например, молекулы дсРНК, ДНК плазмиды или красители. Тип и диаметр частиц выбираются в зависимости от реагентов и глубину клетки-мишени в ткани: крупные частицы проникают дальше, но может вызвать некоторые повреждения тканей. <p class="jo...

<ol>
	<li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+of+the+receptor+tyrosine+phosphatase+HmLAR2+in+a+single+cell+of+an+intact+leech+embryo+leads+to+growth-cone+collapse.">RNAi of the receptor tyrosine phosphatase HmLAR2 in a single cell of an intact leech embryo leads to growth-cone collapse.</a> Current Biology. 10, 1071-1074 (2000).</li><li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Hirudo+medicinalis+DNA+Promoters+for+Targeted+Gene+Expression.">Characterization of Hirudo medicinalis DNA Promoters for Targeted Gene Expression.</a> Journal of Neuroscience Methods. 156, 145-153 (2006).</li><li>Gan, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+expression+of+a+leech+netrin+suggests+roles+in+the+formation+of+longitudinal+nerve+tracts+and+in+regional+innervation+of+peripheral+targets.">Cellular expression of a leech netrin suggests roles in the formation of longitudinal nerve tracts and in regional innervation of peripheral targets.</a> Journal of Neurobiology. 40, 103-115 (1999).</li><li>Juven-Gershon, T., Cheng, S., Kadonaga, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+super+core+promoter+that+enhances+gene+expression.">Rational design of a super core promoter that enhances gene expression.</a> Nature Methods. 3, 917-922 (2006).</li><li>Rinberg, D., Simonnet, C., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumatic+capillary+gun+for+ballistic+delivery+of+microparticles.">Pneumatic capillary gun for ballistic delivery of microparticles.</a> Applied Physics Letters. 87, 014103 (2005).</li><li>Shefi, O., Simonnet, C., Baker, M. W., Glass, J. R., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtargeted+gene+silencing+and+ectopic+expression+in+live+embryos+using+biolistic+delivery+with+a+pneumatic+capillary+gun.">Microtargeted gene silencing and ectopic expression in live embryos using biolistic delivery with a pneumatic capillary gun.</a> Journal of Neuroscience. 26, 6119-6123 (2006).</li></ol>

В этой демонстрации мы использовали пневматический пистолет капиллярные для доставки золота частиц по ячейкам в небольших локализованных объема живых эмбрионов пиявки стучать в и нокдауна генов. Целевом регионе как правило, имеют диаметр ~ 150 мкм и частицы были обнаружены ~ 15 мкм примерно средняя...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gold particles</td>
<td>Other</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>S1600ri</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>binding buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>silicone rubber </td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech

В этом видео мы покажем, использование пневматических капиллярных пистолет для точного biolistic доставки реагентов в живые ткани. Мы используем процедуру возмущают шаблоны экспрессии генов в отдельных сегментах пиявки эмбрионов, оставив необработанными сегментов внутреннего контроля. Пневматический пистолет капиллярной могут быть использованы для достижения внутренних слоев клеток на ранних стадиях развития, не открывая образца. В качестве метода локализованных введения веществ в живых тканях, biolistic поставки с пушкой имеет ряд преимуществ: он быстрый, бесконтактный и неразрушающий. Кроме того, одной капиллярной оружие может быть использовано для самостоятельной доставки различных веществ. Доставка регионе может иметь поперечные размеры ~ 50-150 мкм и распространяется на ~ 15 мкм вокруг средняя глубина проникновения, которая регулируется в пределах от 0 до 50 мкм. Эта поставка имеет преимущество в том, способна привлечь внимание ограниченное количество ячеек в выбранном месте промежуточное между одной клетки сбить путем микроинъекции и системных нокдаун через внеклеточную инъекции или с помощью генетических методов. Для сбивания или стучать в экспрессии молекулы аксон руководством Netrin, которая, естественно, выраженные некоторыми центральными нейронами и в брюшной стенке тела, но не спинной области, мы поставляем молекулы дсРНК или плазмид-ДНК в стенке тела и центральных ганглиев. Эта процедура включает в себя следующие этапы: (я) подготовки экспериментальной установки для конкретного анализа (регулировка ускорения давления), (II) покрытия частиц с молекулами дсРНК или ДНК, (III) погрузка покрытых частиц в пушку, до двух реагентов в одном анализе, (IV) подготовке животных для доставки частиц, (V) доставка покрытых частиц в ткани-мишени (стенки тела или ганглии) и (VI) обработки эмбрионов (иммунной, иммуногистохимии и нейронных маркировки) для визуализации результатов, как правило, от 2 до 3 дней после поставки. Когда частицы были покрыты netrin дсРНК, они вызвали отчетливо видны нокдауна от netrin выражение, которое произошло только в клетках, содержащих частицы (как правило, 1-2 частиц на клетку). Частицы покрытые плазмиды, кодирующей EGFP индуцированной флуоресценции в нервных клетках, когда они остановились в их ядер.

Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

В этом видео мы покажем процедуру точной biolistic доставки реагентов в живые ткани романа миниатюрный пистолет гена. Мы сбить выражение молекулы Netrin руководством аксонов в пиявка эмбрионов путем предоставления молекулы дсРНК в вентральной стенкой тела и ганглиях одного сегмента.

Локализованные RNAi и эктопической экспрессии гена в медицинской пиявки

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Подготовка первичных гемопоэтических клеточных культур из костного мозга мышей для Электропорация

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Spinal Cord Electrophysiology

Спинной мозг электрофизиологии

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Использование генной Pulser MXcell Электропорация системы для трансфекции первичных элементов с высоким КПД

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

Робототехника и динамического анализа изображения для исследования экспрессии генов в тканях растений

Gene expression in plant tissues is typically studied by destructive extraction of compounds from plant tissues for in vitro analyses. The methods ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Использование автоматизированных счетчиков сотовый для упрощения исследования экспрессии генов: миРНК Нокдаун ИЛ-4 зависимости экспрессии генов в клетках Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Парафин и замороженные Разделы Drosophila Мышцы взрослых

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

В пробирке восстановление активность Т. castaneum Теломераза

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi опосредованного Нокдаун гена и трансгенез по Микроинъекция в Necromenic нематода Pristionchus расШсиз</em

Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Анализ глобальной РНК синтеза на уровне одной клетки следующем Гипоксия

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Измерение скорости обмена веществ в<em&gt; Дрозофилы</em&gt; С помощью респирометрии

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...