Name: localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech
Uploaded: 2008-04-17T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

Biz knock-ve zaman atlamalı filmleri büyüyen duyusal projeksiyonlar sağlamak için gen için yapıları üreten yardımlarından dolayı Dr. Michael Baker teşekkür etmek istiyorum. Biz Virginia Vandelinder pnömatik silah deneyleri ile teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Parçacıklar dsRNA moleküller, DNA plazmid ya da boyalar gibi farklı reaktifler, ile kaplı olabilir. Parçacıkların tipi ve çapı, reaktif ve hedef doku hücrelerinin derinliği göre seçilir: Daha büyük parçacıklar daha fazla nüfuz, ancak doku bazı hasarlara neden olabilir. 1. DsRNA kaplı partiküller hazırlanması <ol><li> Buz üzerinde% 100 izopropanol yerleştirin. </li><li> 100 ml bağlayıcı tampon; yeniden süspanse 5 mg altın parçacıkları (ortalama çapı 1.6 mm...

<ol>
	<li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+of+the+receptor+tyrosine+phosphatase+HmLAR2+in+a+single+cell+of+an+intact+leech+embryo+leads+to+growth-cone+collapse.">RNAi of the receptor tyrosine phosphatase HmLAR2 in a single cell of an intact leech embryo leads to growth-cone collapse.</a> Current Biology. 10, 1071-1074 (2000).</li><li>Baker, M. W., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Hirudo+medicinalis+DNA+Promoters+for+Targeted+Gene+Expression.">Characterization of Hirudo medicinalis DNA Promoters for Targeted Gene Expression.</a> Journal of Neuroscience Methods. 156, 145-153 (2006).</li><li>Gan, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+expression+of+a+leech+netrin+suggests+roles+in+the+formation+of+longitudinal+nerve+tracts+and+in+regional+innervation+of+peripheral+targets.">Cellular expression of a leech netrin suggests roles in the formation of longitudinal nerve tracts and in regional innervation of peripheral targets.</a> Journal of Neurobiology. 40, 103-115 (1999).</li><li>Juven-Gershon, T., Cheng, S., Kadonaga, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+a+super+core+promoter+that+enhances+gene+expression.">Rational design of a super core promoter that enhances gene expression.</a> Nature Methods. 3, 917-922 (2006).</li><li>Rinberg, D., Simonnet, C., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pneumatic+capillary+gun+for+ballistic+delivery+of+microparticles.">Pneumatic capillary gun for ballistic delivery of microparticles.</a> Applied Physics Letters. 87, 014103 (2005).</li><li>Shefi, O., Simonnet, C., Baker, M. W., Glass, J. R., Macagno, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microtargeted+gene+silencing+and+ectopic+expression+in+live+embryos+using+biolistic+delivery+with+a+pneumatic+capillary+gun.">Microtargeted gene silencing and ectopic expression in live embryos using biolistic delivery with a pneumatic capillary gun.</a> Journal of Neuroscience. 26, 6119-6123 (2006).</li></ol>

Bu gösteri, knock-canlı sülük embriyo lokalize hacmi küçük altın parçacıkları hücre içine teslim ve genler yıkmak için pnömatik kılcal silah kullandı. Hedef bölge genellikle çapı ~ 0 ile 50 mm arasında ayarlanabilir ortalama penetrasyon derinliği etrafında ~ 15 mm, 150 mm ve parçacıklar bulundu. Parçacıklar akson rehberlik faktör Netrin dsRNA molekülleri ile kaplı iken, açıkça sadece partikülleri içeren hücreler meydana gelen netrin ifade görünür knock-down neden oldu. Parçacıklar onların çekirdek...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>gold particles</td>
<td>Other</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>S1600ri</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>binding buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Seashell Technology, LLC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>silicone rubber </td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

localized rnai and ectopic gene expression in the medicinal leech

Bu video, canlı doku içine reaktiflerin doğru Biyolistik teslimat için pnömatik kılcal silah kullanımı göstermektedir. Biz, iç kontroller gibi tedavi edilmezse segmentleri bırakarak, sülük embriyoların seçilen segmentlerde karıştırmayı gen ekspresyonu yordamı kullanın. Pnömatik kılcal silah geliştirmenin erken aşamalarında numune açmadan hücre iç katmanları ulaşmak için kullanılabilir. Maddelerin canlı dokulara lokalize giriş için bir yöntem olarak, tabanca ile Biyolistik teslimat, birçok avantajı vardır: hızlı, temas ve tahribatsız. Buna ek olarak, tek bir kılcal silah farklı maddelerin bağımsız teslimat için kullanılabilir. Teslim bölge ~ 50-150 mikron lateral boyutları var ve 0 ile 50 mm arasında ayarlanabilir ortalama penetrasyon derinliği, yaklaşık ~ 15 mikron üzerinde uzanır. Bu teslim ekstrasellüler enjeksiyonları ile mikroenjeksiyon ve sistemik demonte veya genetik yaklaşımlar yoluyla yıkmak tek hücre arasındaki ara seçilmiş bir yere hücrelerin sınırlı sayıda hedef olma avantajına sahiptir. Aşağı vurma ya da doğal olarak bazı merkez nöronları ve ventral vücut duvarı ifade edilir akson rehberlik molekül Netrin, ama dorsal etki alanı ifade çalıyor, biz ve vücut duvarı içine dsRNA veya plazmid DNA molekülleri teslim merkezi ganglionlar. Tabanca içine kaplı partiküller yükleme (i) belirli bir tayini için deney düzeneği hazırlama (hızlanan basınç ayarlama), (ii) kaplama dsRNA ya da DNA molekülleri ile parçacıklar, (iii): Bu işlem aşağıdaki adımları içerir bir tahlil, (iv) iki reaktifler (parçacık teslim, (v) hedef dokuya (vücut duvar veya ganglionlar) kaplı parçacıkların teslim hayvanların hazırlanması, ve (vi) embriyoların işleme immün, immünhistokimya ve nöronal 2 ila 3 gün sonra teslim genellikle sonuçları görselleştirmek için) etiketleme. Parçacıkları netrin dsRNA ile kaplanmış, açıkça sadece tanecikleri (genellikle 1-2 hücre başına parçacıklar) içeren hücrelerde meydana netrin ifade görünür knock-down neden oldu. Parçacıklar onların çekirdekleri durdu nöronal hücrelerin plazmid kodlama EGFP indüklenen floresan ile kaplanmıştır.

Watch this Scientific Journal Video about Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech at JoVE.com

Localized RNAi and Ectopic Gene Expression in the Medicinal Leech

Bu video, biz, bir roman minyatür gen tabancası ile canlı doku içine doğru bir Biyolistik reaktifler teslim için bir yordam gösterir. Ventral vücut duvarı ve tek segmentleri ganglionlar dsRNA molekülleri sunarak sülük embriyolar akson rehberlik molekül Netrin ifade aşağı vurma.

Lokalize RNAi ve Tıbbi Sülük Ektopik Gen İfadesi

In this video, we show the use of a pneumatic capillary gun for the accurate biolistic delivery of reagents into live tissue. We use the procedure to ...

Research

JoVE Journal

Biology

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Hazırlık Elektroporasyon murin Kemik İliği itibaren İlköğretim Hematopoetik Hücre Kültürleri

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Spinal Cord Electrophysiology

Omurilik Elektrofizyoloji

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Yüksek Verimli Primer Hücre Transfect Gen Verici MXcell Elektroporasyon Sistemi

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

Bitkisel Dokular Gen İfade Araştırmalar Robotik ve Dinamik Görüntü Analizi

Gene expression in plant tissues is typically studied by destructive extraction of compounds from plant tissues for in vitro analyses. The methods ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

Gen İfadesi Çalışmaları basitleştirin Otomatik Hücre Sayıcı kullanma: Namalwa Hücreler IL-4 Bağımlı Gen İfadesi siRNA demonte

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles

Parafin ve Dondurulmuş Bölüm Drosophila Yetişkin Kaslar

The molecular characterization of muscular dystrophies and myopathies in humans has revealed the complexity of muscle disease and genetic analysis of ...

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

In vitro Reconstitution of the Active T. castaneum Telomerase

Active T. in vitro Sulandırma castaneum Telomeraz

Efforts to isolate the catalytic subunit of telomerase, TERT, in sufficient quantities for structural studies, have been met with limited success for more ...

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi Mediated Gene Knockdown and Transgenesis by Microinjection in the Necromenic Nematode Pristionchus pacificus

RNAi Necromenic nematodu Mikroenjeksiyon Gen demonte ve Transgenesis aracılığı ile Pristionchus pacificus</em

Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Ününüz Aşağıdaki Tek Hücre Düzeyinde Küresel RNA Sentezi Analizi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Measurement of Metabolic Rate in Drosophila using Respirometry

Metabolik Oranı Ölçümü<em&gt; Drosophila</em&gt; Respirometrik kullanarak

Metabolic disorders are a frequent problem affecting human health. Therefore, understanding the mechanisms that regulate metabolism is a crucial ...