Name: single cell electroporation in vivo within the intact developing brain
Uploaded: 2008-07-11T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain at JoVE.com

Die Autoren danken Sharmin Hossain für die Zeitraffer-Film Wachstumschancen eines unreifen Neuronen und Derek Dunfield für die elektronenmikroskopischen Bildern von SCE micromicropipette Tipps.

Gerätesatz-up: <ol><li> Die elektrische Ausrüstung für diese Technik erforderlich sind, ein Stimulator, ein Oszilloskop und einer Mikropipette Halter mit einem Silberdraht in die Mikropipette eingefügt ausgestattet. Wir verwenden in der Regel einem Axon Instrumente Axoporator 800A Stimulator, aber auch andere gemeinsame Stimulatoren wie Grass Instrumente SD9 Stimulatoren sind auch für Single-Cell-Elektroporation geeignet. Der Stimulator ist es, die headstage, die mit dem Silberdraht-Elektrode im Inneren der Glasmi...

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	<li>Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+single-cell+electroporation+for+transfer+of+DNA+and+macromolecules.">In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules.</a> Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).</li><li>Dunfield, D., Haas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+electroporation.">Single cell electroporation.</a> Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .</li><li>Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+in+Xenopus+tadpoles+in+vivo--from+single+cells+to+the+entire+brain.">Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo--from single cells to the entire brain.</a> Differentiation. 70, 148-154 (2002).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo.">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29, 583-591 (2001).</li></ol>

Einzel-Zell-Elektroporation (SCE) ist ein leistungsfähiges Werkzeug zur Bestimmung der Genfunktion und Durchführung von gezielten genetischen Manipulation. Die Transparenz des Albino-Kaulquappe und die Zugänglichkeit des Gehirns lässt sich dieses Modell, das ideal für die Visualisierung von neuronalen Wachstums-und intrazelluläre Ereignisse innerhalb eines lebenden Organismus geeignet. SCE ermöglicht die Visualisierung des Wachstums eines einzelnen Neurons, und Zell-autonome Manipulationen innerhalb eines ansonsten unveränderten Geh...

single cell electroporation in vivo within the intact developing brain

Einzel-Zell-Elektroporation (SCE) ist eine spezialisierte Technik ermöglicht die Bereitstellung von DNA oder andere Makromoleküle in einzelne Zellen innerhalb intakten Gewebe, auch in vivo Präparate. Der entscheidende Vorteil dieser Technik ist, dass experimentelle Manipulationen an einzelnen Zellen durchgeführt werden, während die umgebenden Gewebe unverändert, so unterscheiden Zell-autonome Effekte aus, die sich aus globalen Behandlungen. Wenn mit fortgeschrittenen In-vivo-Bildgebung kombiniert, ermöglicht SCE von fluoreszierenden Markern direkte Visualisierung der zellulären Morphologie, Zellwachstum, und intrazelluläre Ereignisse, auf Zeitskalen von Sekunden bis zu Tagen. Während diese Technik in einer Vielzahl von in vivo und ex vivo Präparaten verwendet wird, haben wir diese Technik für den Einsatz in Xenopus laevis Kaulquappen optimiert. In diesem Video-Beitrag, Detail, das wir das Verfahren für die SCE von einem fluoreszierenden Farbstoff-oder Plasmid-DNA in die Neuronen im intakten Gehirn des Albino Xenopus Kaulquappen. Wir diskutieren auch Methoden, um die Ausbeute zu optimieren, und zeigen Beispiele von Live-Zwei-Photonen-Fluoreszenz-Imaging von Neuronen Fluoreszenz von SCE gekennzeichnet.

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Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Einzel-Zell-Elektroporation (SCE) ist eine spezialisierte Technik, die Abgabe von DNA oder andere Makromoleküle in einzelne Zellen innerhalb intakten Gewebe, auch in vivo Präparate. Hier haben wir ausführlich das Verfahren für die SCE von einem fluoreszierenden Farbstoff-oder Plasmid-DNA in die Neuronen im intakten Gehirn des Xenopus laevis Kaulquappen.

Single Cell Elektroporation in vivo innerhalb der intakten sich entwickelnde Gehirn

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electroporation of Mycobacteria

Elektroporation von Mykobakterien

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Forschung

Biologie

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero und ex vivo Elektroporation für die Genexpression in Maus retinalen Ganglienzellen

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluoreszenz-Tomographie für In-vivo Imaging der Entwicklungsländer Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Einzel-Zell-Saug-Recordings aus Maus Zapfen-Photorezeptoren

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In-vivo-Imaging von Intact Drosophila-Larven auf subzellulärer Auflösung

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in die Adult Zebrafisch Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In-vivo-Elektroporation von Morpholinos in das Regenerations Adult Zebrafisch Leitwerk

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Die konfokale Bildgebung von Einzel Mitochondrial Super Blinkt Intact Herz oder<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Bewertung von Calcium in Sparks Intact Skelettmuskelfasern

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In-vivo-Mikroinjektion und Elektroporation von Maus-Hoden

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...