Name: single cell electroporation in vivo within the intact developing brain
Uploaded: 2008-07-11T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain at JoVE.com

Los autores agradecen a Sharmin Hossain para el crecimiento de películas de lapso de tiempo la captura de inmaduros neurona y Dunfield Derek para las imágenes de microscopía electrónica de SCE consejos micromicropipette.

Instalación del equipo: <ol><li> Los equipos eléctricos requeridos para esta técnica son un estimulador, un osciloscopio y un soporte para micropipeta equipado con un hilo de plata que se inserta en la micropipeta. Por lo general el uso de un axón instrumentos Axoporator 800A estimulador, sin embargo otros estimuladores comunes, tales como los instrumentos de hierba SD9 estimuladores también son adecuados para una sola célula de electroporación. El estimulador se conecta a la headstage, que conecta con el electr...

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	<li>Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+single-cell+electroporation+for+transfer+of+DNA+and+macromolecules.">In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules.</a> Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).</li><li>Dunfield, D., Haas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+electroporation.">Single cell electroporation.</a> Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .</li><li>Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+in+Xenopus+tadpoles+in+vivo--from+single+cells+to+the+entire+brain.">Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo--from single cells to the entire brain.</a> Differentiation. 70, 148-154 (2002).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo.">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29, 583-591 (2001).</li></ol>

Una sola célula de electroporación (SCE) es una poderosa herramienta para determinar la función del gen y la realización de la manipulación genética dirigida. La transparencia de los renacuajos albinos y la accesibilidad del cerebro hacen que este sistema modelo ideal para la visualización de crecimiento neuronal y eventos intracelulares en un organismo vivo. SCE permite la visualización del crecimiento de una sola neurona, y para llevar a cabo por células autónomas manipulaciones dentro de un cerebro de otra manera inalterada. Si...

single cell electroporation in vivo within the intact developing brain

Una sola célula de electroporación (SCE) es una técnica especializada que permite la entrega de ADN u otras macromoléculas en las células individuales en el tejido intacto, incluso en los preparativos vivo. La ventaja de esta técnica es que la manipulación experimental se puede realizar en las células individuales, dejando el tejido circundante sin alterar, por lo tanto distinguir células autónomas efectos de los resultantes de los tratamientos globales. Cuando se combina con avanzadas técnicas de imagen en vivo, SCE de marcadores fluorescentes permite la visualización directa de la morfología celular, el crecimiento celular, y eventos intracelulares en escalas de tiempo que van desde segundos a días. Si bien esta técnica se utiliza en una variedad de preparaciones en vivo y ex vivo, hemos optimizado esta técnica para su uso en los renacuajos Xenopus laevis. En este artículo de vídeo, se detalla el procedimiento para la SCE de un colorante fluorescente o de ADN plásmido en las neuronas en el cerebro intacto de los albinos renacuajos Xenopus. También se discuten los métodos para optimizar el rendimiento, y mostrar ejemplos de vida de dos fotones de imágenes de fluorescencia de las neuronas marcados con fluorescencia por SCE.

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Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Una sola célula de electroporación (SCE) es una técnica especializada que permite la entrega de ADN u otras macromoléculas en las células individuales en el tejido intacto, incluso en los preparativos vivo. Aquí detallamos el procedimiento para la SCE de un colorante fluorescente o de ADN plásmido en las neuronas en el cerebro intacto de los renacuajos Xenopus laevis.

La electroporación in vivo sola célula en el cerebro intacto desarrollo

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electroporation of Mycobacteria

Electroporación de micobacterias

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

Investigación

Biología

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

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La electroporación in vivo en el útero y el ex de la expresión génica en células de ratón ganglionares retinianas

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

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Mesoscópica fluorescencia Tomografía por En vivo Imágenes de desarrollo Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Una sola célula grabaciones de succión de los conos del ratón

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

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Imágenes in vivo de larvas de Drosophila intactos a nivel sub-celular Resolución

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

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En electroporación in vivo de Morpholinos en la retina de pez cebra adultos

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

En electroporación in vivo de Morpholinos en la regeneración de adultos de pez cebra Aleta de cola

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Imagen confocal de Soltero mitocondriales superóxido Parpadea en corazón intacto o<em&gt; En Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Evaluación de calcio en Sparks intactas las fibras musculares esqueléticas

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

En Vivo microinyección y electroporación del mouse Testis

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...