Name: single cell electroporation in vivo within the intact developing brain
Uploaded: 2008-07-11T18:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain at JoVE.com

Författarna tackar Sharmin Hossain för tidsförlopp film fånga tillväxten av en omogen neuron och Derek Dunfield för elektronmikroskopi bilder av SCE micromicropipette tips.

Utrustning set-up: <ol><li> Den elektriska utrustning som krävs för denna teknik är en stimulator, ett oscilloskop och en mikropipett hållare försedd med en silvertråd för att föras in i mikropipetten. Vi använder vanligtvis en Axon instrument Axoporator 800A stimulator, men andra vanliga stimulatorer som Grass instrument SD9 stimulatorer lämpar sig också för encelliga elektroporation. Stimulatorn är ansluten till headstage som gränssnitt med silvertråd elektroden placeras innanför glaset mikropipett in...

<ol>
	<li>Bestman, J. E., Ewald, R. C., Chiu, S. L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+single-cell+electroporation+for+transfer+of+DNA+and+macromolecules.">In vivo single-cell electroporation for transfer of DNA and macromolecules.</a> Nature Protocols. 1, 1267-1272 (2006).</li><li>Dunfield, D., Haas, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+electroporation.">Single cell electroporation.</a> Encyclopedia of Neuroscience (4th Ed.). , .</li><li>Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+in+Xenopus+tadpoles+in+vivo--from+single+cells+to+the+entire+brain.">Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo--from single cells to the entire brain.</a> Differentiation. 70, 148-154 (2002).</li><li>Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+electroporation+for+gene+transfer+in+vivo.">Single-cell electroporation for gene transfer in vivo.</a> Neuron. 29, 583-591 (2001).</li></ol>

Encelliga elektroporation (SCE) är ett kraftfullt verktyg för att bestämma geners funktion och att utföra riktade genmanipulation. Öppenheten i albino grodyngel och tillgängligheten i hjärnan gör denna modell systemet idealiskt för att visualisera neuronala tillväxt och intracellulära händelser inom en levande organism. SCE tillåter visualisering av tillväxten av en enda neuron, och för att utföra cell-autonoma manipulationer inom en annars oförändrad hjärna. Även om denna video artikeln demonstrerar förfarandet för en...

single cell electroporation in vivo within the intact developing brain

Encelliga elektroporation (SCE) är en specialiserad teknik för leverans av DNA eller andra makromolekyler i enskilda celler i intakta vävnader, inklusive in vivo förberedelser. Den klara fördelen med denna teknik är att experimentella manipulationer kan utföras på enskilda celler medan den omgivande vävnaden oförändrad, vilket skiljer cell-autonoma effekter från dem som följer av den globala behandlingar. I kombination med avancerad in vivo avbildningstekniker, tillstånd SCE av fluorescerande markörer direkt visualisering av cellulära morfologi, celltillväxt, och intracellulära händelser under tidsskalor alltifrån sekunder till dagar. Även denna teknik används i olika in vivo och ex förberedelser vivo, har vi optimerat denna teknik för användning i Xenopus laevis grodyngel. I denna video artikeln detalj vi förfarandet för SCE av en fluorescerande färg eller plasmid-DNA till nervceller i den intakta hjärnan i albino Xenopus grodyngel. Vi diskuterar också metoder för att optimera avkastning och visar exempel av levande två-photon fluorescens avbildning av nervceller fluorescerande av SCE.

Watch this Scientific Journal Video about Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain at JoVE.com

Single Cell Electroporation in vivo within the Intact Developing Brain

Encelliga elektroporation (SCE) är en specialiserad teknik som möjliggör leverans av DNA eller andra makromolekyler i enskilda celler i intakta vävnader, inklusive in vivo förberedelser. Här har vi detalj förfarandet för SCE av en fluorescerande färg eller plasmid-DNA till nervceller i den intakta hjärnan i Xenopus laevis grodyngel.

Single Cell elektroporation in vivo i den intakta växande hjärnan

Single-cell electroporation (SCE) is a specialized technique allowing the delivery of DNA or other macromolecules into individual cells within intact ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electroporation of Mycobacteria

Elektroporation av mykobakterier

High efficiency transformation is a major limitation in the study of mycobacteria. The genus Mycobacterium can be difficult to transform; this is mainly ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero och ex vivo elektroporation för genuttryck i Mus Retinal ganglion celler

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoscopic Fluorescence Tomography for In-vivo Imaging of Developing Drosophila

Mesoskopisk Fluorescens Tomografi för In-vivo Imaging för att utveckla Drosophila</em

Visualizing  developing organ formation as well as progession and treatment of disease often  heavily relies on the ability to optically interrogate ...

Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors

Encelliga Sug Inspelningar från fotoreceptorer Mus Cone

Rod and cone photoreceptors in the retina are responsible for light detection. In darkness, cyclic nucleotide-gated (CNG) channels in the outer segment ...

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging of Intact Drosophila Larvae at Sub-cellular Resolution

In vivo Imaging av intakt Drosophila Larver på sub-cellulära upplösning

Recent improvements in optical imaging, genetically encoded fluorophores and genetic tools allowing efficient establishment of desired transgenic animal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

In vivo Elektroporering av Morpholinos i Regenerating Adult Zebrafish stjärtfenan

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal avbildning av Single Mitochondrial Superoxid Blinkar i intakt hjärta eller<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

I Intakta Skeletal Muscle Fibers Bedömning av Kalcium Sparks

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In Vivo Microinjection and Electroporation of Mouse Testis

In vivo mikroinjektion och elektroporation av Mus Testikel

This video and article contribution gives a comprehensive description of microinjection and electroporation of mouse testis in vivo. This particular ...