Name: probing for mitochondrial complex activity in human embryonic stem cells
Uploaded: 2008-06-17T17:21:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells at JoVE.com

<p> Teitell प्रयोगशाला में मानव भ्रूण स्टेम सेल के अध्ययन वर्तमान में पुनर्योजी चिकित्सा के लिए कैलिफोर्निया इंस्टीट्यूट (सीआईआरएम) बीज अनुदान RS1 00,313 द्वारा समर्थित हैं. हम इन और अतिरिक्त अध्ययन में सलाह और अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए डा. कार्ला (UCLA) Koehler और Koehler प्रयोगशाला के सदस्यों धन्यवाद. </p>

<p class="jove_title"> Mitochondrial परिसर के लिए उच्च संकल्प साफ मूल निवासी जेल Electophoresis (hrCNE) में जेल गतिविधि Assays </p><p class="jove_content"> मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESCs) ˠ विकिरणित या mitomycin सी का इलाज माउस भ्रूणीय (MEFs) fibroblasts, तो मानक स्थितियों का उपयोग MEF वातानु...

<ol>
	<li>Wittig, I., Braun, H. -. P., Sch&#747;gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blue+native+PAGE.">Blue native PAGE.</a> <em style='font-style: italic'>Nature Protocols</em>. <b>1</b>, 418-428 (2006).</li><li>Wittig, I., Karas, M., Sch&#747;gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+Resolution+Clear+Native+Electrophoresis+for+In-gel+Functional+Assays+and+Fluorescence+Studies+of+Membrane+Protein+Complexes.++6.">High Resolution Clear Native Electrophoresis for In-gel Functional Assays and Fluorescence Studies of Membrane Protein Complexes.  6.</a> <em style='font-style: italic'>Molecular &amp; Cellular Proteomics</em>. <b>6</b>, 1215-1225 (2007).</li><li>Wittig, I., Carrozzo, R., Santorelli, F. M., Sch&#747;gger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+assays+in+high-resolution+clear+native+gels+to+quantify+mitochondrial+complexes+in+human+biopsies+and+cell+lines.">Functional assays in high-resolution clear native gels to quantify mitochondrial complexes in human biopsies and cell lines.</a> <em style='font-style: italic'>Electrophoresis</em>. <b>28</b>, 3811-3820 (2007).</li><li>Castle, J. D., Coligan, J. E., Dunn, B. M., Speicher, D. W., Wingfield, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+Organelles+from+Mammalian+Cells.">Purification of Organelles from Mammalian Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Current Protocols in Protein Science</em>. <b>4.2</b>, 4.2.1-4.2.57 (2007).</li></ol>

<p> इस वीडियो में, हम मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं, उच्च संकल्प स्पष्ट देशी जेल वैद्युतकणसंचलन (hrCNE) द्वारा उनकी जुदाई, और बाद में जेल उत्प्रेरक गतिविधि assays द्वारा विश्लेषण से mitochondrial प्रोटीन परिसरों की निकासी का वर्णन क?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>0.5M EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP120-1</td>
<td>adjust pH to 8.0 with NaOH </td>
</tr>
<tr>
<td>1M NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S3014-500MG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1M Sodium succinate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>S413-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.1M Sodium phosphate buffer pH 7.2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP332-1 and BP329-1</td>
<td>Mix 68.4 ml of 1M Na2HPO4 and 31.6 ml of 1M NaH2PO4 to prepare 0.1M sodium phosphate buffer with pH 7.2 at 25 C </td>
</tr>
<tr>
<td>1M Tricine, pH 7.0 (adjusted with NaOH)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMD</td>
<td>9010</td>
<td>store at 4 C </td>
</tr>
<tr>
<td>1M imidazole/HCl, pH 7.0</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>I-2399</td>
<td>store at 4 C</td>
</tr>
<tr>
<td>1M Tris-HCl, pH 7.4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>BP153-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>20% (wt/vol) dodecyl-b-D-maltoside (DDM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>44205-500MG</td>
<td>Dissolved in water. Store 1 ml aliquots at &#x2013;20 C.</td>
</tr>
<tr>
<td>10% (wt/vol) digitonin (>50% purity, used without recrystallization)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>37008-1G</td>
<td>Dissolved in water. Store 0.1&#x2013;1 ml aliquots at &#x2013;20 C. Should be warmed up to 95 C before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>2M 6-aminohexanoic acid</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka</td>
<td>07260-100G</td>
<td>store at 4 C</td>
</tr>
<tr>
<td>10x Ponceau S/glycerol stock solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-3504 and G6279-1L</td>
<td>0.1% Ponceau S, 50% glycerol, (wt/vol) in water.</td>
</tr>
<tr>
<td>10% w/v sodium deoxycholate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fluka </td>
<td>30970-25G</td>
<td>Dissolved in water. Must be protected from light. Adjust pH to 7.0 with HCl, filter and store at room temperature.</td>
</tr>
<tr>
<td>250 mM phenazine methasulfate (PMS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TCI America</td>
<td>P0083</td>
<td>Dissolved in DMSO and aliquoted. Store at &#x2013;20 C.</td>
</tr>
<tr>
<td>Nitro-blue tetrazolium (NBT)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Amresco </td>
<td>0329-1G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3,3&#x2019;-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TCI America </td>
<td>D0078</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pb(NO3)2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>L62-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MgSO4</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>BP213-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris base </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>BP152-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>G45-212</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adenosine 5&#x2019;-triphosphate disodium salt (ATP)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>A2383-5G</td>
<td>Grade I, minimum 99%</td>
</tr>
<tr>
<td>beta-nicotineamide adenine dinucleotide (NADH) reduced form </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>N-8129</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cytochrome c From horse heart</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>C2506-250MG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sucrose </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific </td>
<td>BP220-212</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100x protease inhibitor cocktail</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma </td>
<td>P8340</td>
<td>Store at &#x2013; 20 C.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>D128-500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypan blue Stain 0.4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>15250-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10x Trypsin (0.5%)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>15400-054</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin Inhibitor </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco </td>
<td>17075-029</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

probing for mitochondrial complex activity in human embryonic stem cells

<p class="jove_content">Mitochondria cytoplasmic organelles कि सेलुलर चयापचय और homeostasis में एक प्राथमिक भूमिका है, सेल संकेतन नेटवर्क के विनियमन, और क्रमादेशित कोशिका मृत्यु. Mitochondria उत्पादन एटीपी, cytoplasmic redox राज्य और सीए 2 + संतुलन को विनियमित, फैटी एसिड catabolize, heme, nucleotides, स्टेरॉयड हार्मोन, अमीनो एसिड synthesize, और प्रोटीन में लोहे सल्फर समूहों को इकट्ठा में मदद. Mitochondria भी गर्मी के उत्पादन में एक आवश्यक भूमिका है. Mitochondrial जीनोम के उत्परिवर्तन मानव विकार के कई प्रकार के कारण. mtDNA परिवर्तन के संचय उम्र बढ़ने के साथ संबद्ध है और कैंसर के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका का संदेह है. सभी प्रकार की कोशिकाओं में उनके vitally महत्वपूर्ण भूमिका के कारण, mitochondria के समारोह में भी स्टेम सेल के लिए महत्वपूर्ण होना चाहिए. प्रमुख अग्रिम स्टेम सेल व्यवहार्यता, प्रसार, और भेदभाव की क्षमता के बारे में हमारी समझ में बनाया गया है. लेकिन स्टेम कोशिकाओं के कार्यात्मक गतिविधि, विशेष रूप से अपनी ऊर्जा की स्थिति में, अभी तक नहीं विस्तार में था अध्ययन किया गया. लगभग मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESCs) और उनके विभेदित अग्रदूत संतान के mitochondrial गुणों के बारे में कुछ नहीं जाना जाता है. एक को समझने और hESC समारोह और विकास क्षमता में mitochondria की भूमिका का मूल्यांकन करने के लिए सीधे mitochondrial श्वसन परिसरों के गतिविधि को मापने है. यहाँ, हम उच्च संकल्प स्पष्ट देशी जेल और जेल पांच hESCs की सांस श्रृंखला परिसरों का विश्लेषण करने के लिए एक विधि के रूप में गतिविधि के दृश्य में वैद्युतकणसंचलन बाद का वर्णन.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells at JoVE.com

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

<p class="jove_content">इस वीडियो में, हम आपको बताएंगे कि कैसे मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों जेल गतिविधि assays में उपयोग विश्लेषण किया जा सकता है.</p>

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं में Mitochondrial परिसर गतिविधि के लिए जांच

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (ते) के प्रचार - प्रसार

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से chromatin immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग के लिए मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की इन विट्रो लेबल में

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

संस्कृति और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के रखरखाव

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Karyotyping के लिए मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के गुणसूत्र फैलाओ तैयारी

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं को ठंड और विगलन

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

वीडियो मानव भ्रूण स्टेम सेल कॉलोनी विकास के विश्लेषण बायोइनफॉरमैटिक्स

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Oligodendrocyte व्यापारियों में भेदभाव

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

टेराटोमा संरचना द्वारा मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की किस्मत मानचित्रण

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...