Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

1. إزالة الجنين والمشيمة تشريح <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتبدأ ، يجب أن تكون معزولة أول أجنة الحوامل من السدود. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يصرح باستخدامها في الحيوانات وفقا للإجراءات المعتمدة -- في حالتنا نحن نذهب إلى استخدام جرعة قاتلة من مخدر ...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

والإجراءات التجريبية وصفها في هذا البروتوكول يسمح للعزلة والتصور من نسيج المشيمة والخلايا الجذعية المكونة للدم والسلف. للحصول على ملخص شامل عن العائد المتوقع الخليوي وعدد من HSCs في المشيمة وغيرها من الأجهزة المكونة للدم الجنين خلال مراحل تطوره الجنين نشير إلى جيكاس ، وآخرون. 200...

قائمة المواد : 100mM الجلوكوز 10MM NaN3 15 مل أنابيب مخروطية دينار بحريني () 16 - G ، G - 18 ، G - 20 ، 22 و 25 G - G - الإبر (دينار بحريني) محلول السكروز 30 ٪ 35mm أطباق بتري (دينار بحريني) 4 ٪ لامتصاص العرق 50 -- خلية م المرشحات (Celltrics) 5 مل المحاقن (دينار بحريني) الفوسفاتيز القلوية الركيزة كيت الأول (ناقلات الأحمر ، المتجهات) الفوسفاتيز القلوية الركيزة كيت الثالث (ناقلات الأزرق ، المتجهات) المضادات الحيوية (البنسلين / الستربتوميسين ، P / S) حل كولاجيناز النوع الأول (سيجما) Cryomold العينة الفينيل يعاد قوالب (10MM X 10MM × 5 ملم ، والأنسجة تيك) Cytokeratin جسم الابتدائية (DakoCytomation) ملقط تشريح ، الفولاذ المقاوم للصدأ أو التيتانيوم ، وعدد 5 أو 55 Drierite الجنين مصل البقر (FBS) Fisherbrand مجهر الشرائح البلاستيكية ميلر (فيشر) أوكسيديز الجلوكوز 1000u/ml Levamisole (ناقلات) تصاعد وسائل الإعلام ، على أساس مائي متوسطة التركيب (VectamountTM AQ) الحصان العادي المصل (ناقلات) درجة الحرارة المثلى للقطع (أكتوبر ، الأنسجة تيك) البيروكسيداز الركيزة كيت DAB (ناقلات) التخزين المؤقت المالحة الفوسفات (PBS) مع الكالسيوم / المغنيسيوم (ث + CA2 / Mg2 +) التخزين المؤقت المالحة الفوسفات (PBS) دون الكالسيوم / المغنيسيوم (ث / س + CA2 / Mg2 +) صندوق من البلاستيك الشريحة (100 يحمل شرائح) أنابيب البلاستيك (PVC Nalgene 180 Autoclavable غير سامة) البولي بروبلين أنبوب اختبار جولة القاع ، 5 مل (12x75 ملم ، BD فالكون) بروتين K 20mg/ml محلول (Amresco) المنتجات البحوث الدولية عنق الرحم سوبر كورب القلم HT علامات الشرائح * (2،5 مم ، فيشر) الأنسجة ثقافة يعامل على شكل حرف يو (ذهابا والسفلي) لوحات 96 - جيدا أو جيدا 24 دينار بحريني (فالكون) Tween20 ، SigmaUltra (سيجما) Tyramide كيت التضخيم (Invitrogen) Vectastain ABC القلوية الفوسفاتيز قياسي كيت (ناقلات) Vectastain ABC قياسي النخبة كيت (ناقلات)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) لديها القدرة على تجديد الذات وتوليد كل أنواع الخلايا من الدم في جميع أنحاء الأنساب عمر الفرد. جميع HSCs تظهر خلال نمو الجنين ، وبعد ذلك يتم الاحتفاظ حجمها تجمع بواسطة الذاتي تجديد الانقسامات الخلوية. تحديد المنشأ التشريحي للHSCs والأحداث الحاسمة التنموية التي تنظم عملية التنمية HSC تعقدت كمواقع تشريحية كثيرة خلال المشاركة تكون الدم في الجنين. مؤخرا ، حددنا المشيمة ، بوصفها الجهاز الرئيسي للدم حيث يتم إنشاء HSCs وتوسعت في محاريب microenvironmental فريد (جيكاس ، وآخرون 2005 ، ورودس ، وآخرون 2008). وبالتالي فإن المشيمة مصدر مهم من خلال ظهور HSCs وتوسعها الأولية. في هذه المقالة ، نعرض أساليب تشريح للعزلة المشيمة من الفئران وE10.5 E12.5 الأجنة ، المقابلة لمراحل تطور بدء HSCs والذروة في حجم تجمع HSC في المشيمة ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، فإننا نقدم بروتوكول الأمثل لتفارق الأنزيمية والميكانيكية للأنسجة المشيمة وحيدة الخلية في تعليق لاستخدامها في التدفق الخلوي أو المقايسات الفنية. لقد وجدنا أن استخدام كولاجيناز عن وحيدة الخلية تعليق المشيمة يعطي غلة كافية من HSCs. عامل مهم يؤثر HSC العائد من المشيمة هي درجة التفكك الميكانيكية قبل ، ومدتها ، ومعالجة القرنية. ونحن نقدم أيضا على بروتوكول لإعداد الثابتة المجمدة أقسام النسيج المشيمي لوضع التصور HSCs بواسطة المناعية الخلوية في مطلبهم دقيقة. كما لا يتم الاحتفاظ مستضدات محددة للدم أثناء إعداد الأبواب جزءا لا يتجزأ من البارافين ، ونحن نستخدم بشكل روتيني المجمدة أقسام ثابتة لتوطين HSCs المشيمة والأسلاف.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

حددنا المشيمة ، بوصفها الجهاز الرئيسي للدم خلال التنمية. وجدنا أن كلا إنشاء خلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) ، وتوسعت في المشيمة في محاريب microenvironmental فريدة من نوعها. هنا ، نحن تصف التقنيات التجريبية المطلوبة للعزلة وتصور HSCs في المشيمة الماوس.

العزلة وتحليل الخلايا الجذعية المكونة للدم من المشيمة

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

العزلة وزرع الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs)

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

اشتقاق خلايا الجذعية المكونة للدم من الفئران خلايا الجذعية الجنينية

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

عزل الخلايا الجذعية المكونة للدم في وقت مبكر من الكيس المحي الفئران وAGM

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

عزل الخلايا الجذعية من شبكية العين بالعين ماوس

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral بوساطة خلال ضربة قاضية السابقين فيفو تكون الكريات الحمر في الإنسان خلايا الجذعية المكونة للدم

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

المظهري التحليل وعزل الخلايا الجذعية المكونة للدم الفئران والأسلاف النسب، الملتزم

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

العزلة وثقافة الأسنان طلائي الخلايا الجذعية من الكبار ماوس القاطعة

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

عدوى فيروسات الفئران الجنينية الجذعية المستمدة خلية خلايا الجسم مضغي لتحليل التمايز لدم

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

تحديد العوامل الرئيسية تنظيم-تجديد الذات والتمايز في الخلايا المكونة للدم EML السلائف بواسطة تحليل الحمض النووي الريبي التسلسل

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...