Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
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1。去除胚胎和胎盘夹层<ol><li>首先，胚胎必须先隔离怀孕水坝。 </li><li>动物安乐死按照批准的程序 - 在我们的例子中，我们将使用致死剂量的麻醉药异氟醚</li><li>首先，喷用乙醇腹部和一把剪刀做一个小切口。 </li><li>用双手撕离皮肤，发现腹部切开腹膜。 </li><li>用血管钳，拿起子宫角和收集他们用剪刀在每个末端。放置在培养皿用PBS置于冰上填补了子宫角。此外，请记住用PBS隔离胎盘前几次?...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

在本议定书中所描述的实验程序将允许胎盘组织造血干细胞和祖细胞的分离和可视化。对于预计在胎盘和其他胎儿造血器官的造血干细胞产量和胎儿发育的整个全面的总结，我们指的格卡斯，等。 2005年。对于发展中的造血干细胞和胎盘中的其他造血细胞的本地化，我们是指罗得岛等。 2008年。

材料清单 ： 100mm的葡萄糖 10mm的叠氮化钠 15 ml锥形管（BD） 16 - G，18 - G，20 - G，22 - G和25 - G的针头（BD） 30％的蔗糖溶液 35毫米培养皿光盘（BD） 4％多聚甲醛 50 - M细胞过滤器（Celltrics） 5毫升注射器（BD） 碱性磷酸酶底物试剂盒我（向量红，矢量） 碱性磷酸酶底物包III（矢量蓝，矢量） 抗生素（青霉素/链霉素，P / S）的解决方案 I型胶原酶（Sigma公司） Cryomold一次性乙烯标本模具（采用10mm x 10mm x 5毫米，组织TEK） 主细胞角蛋白抗体（DakoCytomation） 解剖钳，不锈钢或钛，编号为5或55 Drierite 胎牛血清（FBS） Fisherbrand塑料显微镜幻灯片梅勒（费舍尔） 葡萄糖氧化酶1000u/ml 左旋咪唑（矢量） 安装媒体，水性安装中（VectamountTM AQ） 马的正常血清（矢量） 最佳切削温度（华侨城，组织康） 民建联过氧化物酶底物试剂盒（矢量） 磷酸盐缓冲液（PBS钙/镁（瓦特的Ca2 + / Mg2 +的）） 磷酸盐缓冲液（PBS无钙/镁（W / O的Ca2 + / Mg2 +的）） 塑料滑动盒（可容纳100张幻灯片） 塑料管材（180 NALGENE聚氯乙烯非毒性高压灭菌） 聚丙烯圆底试管中，5毫升（12x75毫米，BD​​猎鹰） 蛋白酶K 20mg/ml解决方案（AMRESCO） 研究产品国际公司超巴氏笔HT *幻灯片标记（2,5毫米，费舍尔） 组织培养处理的U形（圆底）96孔或24孔板（BD猎鹰） Tween20，SigmaUltra（Sigma公司） 酪胺扩增试剂盒（Invitrogen公司） Vectastain ABC碱性磷酸酶标准工具包（矢量） Vectastain ABC标准精英套件（矢量）

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

造血干细胞（HSCs）有能力自我更新，并生成整个一个人的一生血液谱系的所有类型的细胞。所有的造血干细胞出现在胚胎发育期间，后池的大小是保持自我更新的细胞分裂。已确定的造血干细胞和调节HSC的发展过程中的关键发育事件的解剖来源复杂，很多解剖部位参与在胎儿造血。最近，我们发现胎盘作为一个主要的造血器官的造血干细胞是生成和独特的微环境龛扩大（格卡斯，等2005年，罗德等2008）。因此，胎盘是造血干细胞在它们的出现和最初的扩张的重要来源。 在这篇文章中，我们解剖小鼠胎盘从E10.5和E12.5的胚胎，分别对应启动造血干细胞，并在胎盘的HSC的池的大小高峰期的发育阶段，隔离技术。此外，我们目前的胎盘组织中的酶和机械解离成单细胞停止使用流式细胞仪或功能分析的优化协议。我们已经发现，胎盘单细胞悬浮液胶原酶的使用提供了足够的造血干细胞的产量。从胎盘影响HSC的收益率的一个重要因素是机械分离的程度之前，和持续时间，酶处理。 我们还提供了编制固定冷冻胎盘组织切片的可视化开发造血干细胞免疫组织化学在其精确的细胞龛的协议。由于造血特异性抗原是不是保存在石蜡包埋切片做准备，我们经常使用固定的冰冻切片本地化胎盘造血干细胞和祖细胞。

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Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

我们已经确定了在开发过程中作为一个主要的造血器官，胎盘。我们发现，造血干细胞（HSCs）都产生和扩大，在胎盘中的独特的微环境龛。在这里，我们描述了在小鼠胎盘中的造血干细胞的分离和可视化所需的实验技术。

从胎盘中的造血干细胞的分离和分析

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

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A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

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Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

分离和造血干细胞移植（造血干细胞）

科研

生物学

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

从小鼠胚胎干细胞的造血干细胞的推导

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

小鼠卵黄囊和AGM早期造血干细胞的分离

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

从鼠眼视网膜干细胞的分离

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

慢病毒介导的击倒在体外</em人造血干细胞>红细胞

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

表型分析和分离小鼠造血干细胞和传承的承诺祖

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

诱导上皮和分析间质转化

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

从成年小鼠切牙牙源性上皮干细胞的分离和培养

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

小鼠胚胎的逆转录病毒感染干细胞衍生胚体细胞造血分化的分析

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

在EML造血前体细胞调节自我更新和分化的关键因素，通过RNA测序分析鉴定

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...