Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
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1. Embryo und Plazenta Entfernung Dissektion <ol><li> Um zu beginnen, müssen Embryonen zunächst von schwangeren Muttertiere isoliert werden. </li><li> Die Tiere sind gemäß den vereinbarten Verfahren eingeschläfert - in unserem Fall werden wir eine tödliche Dosis des Anästhetikums Isofluran verwenden </li><li> Zuerst sprühen den Bauch mit Ethanol und machen einen kleinen Schnitt mit einer Schere. </li><li> Losreißen die Haut mit beiden Händen auf den Bauch aufzudecken und aufgeschnitten das Bauchfell. </li><li...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

Die experimentellen Verfahren in diesem Protokoll beschrieben wird für die Isolierung und die Visualisierung von Plazentagewebe und hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen zu ermöglichen. Für einen umfassenden Überblick über erwartete zellulären Ertrag und Anzahl der HSZ in Plazenta und anderen fetalen blutbildenden Organe während der fetalen Entwicklung verweisen wir auf Gekas, et al. 2005. Für die Lokalisierung der Entwicklung von Blutstammzellen und anderen hämatopoetischen Zellen in der Plazenta verweisen wir auf Rhodos, e...

Material-Liste: 100 mM Glucose 10 mM NaN3 15-ml konische Röhrchen (BD) 16-G, 18-G, 20-G, 22-G und 25-G-Nadeln (BD) 30% Saccharose-Lösung 35mm Petrischalen (BD) 4% Paraformaldehyd 50 - m-Zelle Filter (Celltrics) 5-ml-Spritzen (BD) Alkaline Phosphatase Substrate Kit I (Vector Red, Vector) Alkaline Phosphatase Substrate Kit III (Vector Blue, Vector) Antibiotika (Penicillin / Streptomycin, P / S)-Lösung Collagenase Typ I (Sigma) Cryomold Einweg-Vinyl Specimen-Formen (10mm x 10mm x 5 mm, Tissue-Tek) Cytokeratin Primäre Antikörper (DakoCytomation) Dissektionszangen, Edelstahl oder Titan, Nummer 5 oder 55 Drierite Fetal Bovine Serum (FBS) Fisherbrand Plastic Objektträger Mailer (Fisher) Glucose-Oxidase 1000u/ml Levamisol (Vector) Montage Medien auf wässriger Basis Eindeckmedium (VectamountTM AQ) Normalem Pferdeserum (Vector) Optimal Cutting Temperature (OCT, Tissue-Tek) Peroxidasesubstrat Kit DAB (Vector) Phosphate Buffered Saline (PBS) mit Calcium / Magnesium (w Ca2 + / Mg2 +) Phosphate Buffered Saline (PBS) ohne Calcium / Magnesium (w / o Ca2 + / Mg2 +) Plastic Slide Box (hält 100 Dias) Kunststoffschlauch (Nalgene 180 PVC Ungiftig autoklavierbar) Polypropylen Round-Bottom Test Tube, 5 ml (12x75 mm, BD Falcon) Proteinase K 20mg/ml Lösung (Amresco) Research Products International Corp Super-Pap Pen HT * Slide Marker (2,5 mm, Fisher) Tissue-Kultur behandelt U-förmig (Rundboden) 96-gut-oder 24-Well-Platten (BD Falcon) Tween20, SigmaUltra (Sigma) Tyramid Amplification Kit (Invitrogen) Vectastain ABC Alkaline Phosphatase Standard Kit (Vector) Vectastain ABC Standard Elite Kit (Vector)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

Hämatopoetischen Stammzellen (HSZ) haben die Fähigkeit, sich selbst zu erneuern und generieren alle Zelltypen des Blutes Linien über die gesamte Lebensdauer eines Individuums. Alle HSCs entstehen während der embryonalen Entwicklung, nach denen ihre Pool-Größe durch sich selbst erneuernden Zellteilungen wird beibehalten. Die Ermittlung der anatomischen Ursprung der HSC und die kritische Entwicklungsschritte regulieren den Prozess der HSC Entwicklung wurde kompliziert, wie viele anatomische Sites während der fetalen Hämatopoese beteiligt. Kürzlich haben wir festgestellt, die Plazenta als wichtiger blutbildenden Organ, in dem HSC generiert und erweitert in einmaliger Mikroumgebung Nischen (Gekas, et al 2005, Rhodes, et al 2008). Folglich ist die Plazenta eine wichtige Quelle für Blutstammzellen bei ihrer Entstehung und erste Expansion. In diesem Artikel zeigen wir Dissektion Techniken zur Isolierung von murinen Plazenta von E10.5 und E12.5 Embryonen, entsprechend der Entwicklungsstadien der Einleitung von HSK und die Spitze in der Größe der HSC-Pool in der Plazenta, bzw.. Darüber hinaus präsentieren wir ein optimiertes Protokoll für die enzymatische und mechanische Dissoziation von Plazentagewebe in den Single-Zell-Suspension für den Einsatz in der Durchflusszytometrie oder funktionellen Assays. Wir haben festgestellt, dass die Verwendung von Kollagenase für Einzel-Zell-Suspension der Plazenta auskömmlichen Renditen von HSK gibt. Ein wichtiger Einflussfaktor HSC Ertrag aus der Plazenta ist der Grad der mechanischen Dissoziation vor, und die Dauer der, enzymatische Behandlung. Wir bieten auch ein Protokoll für die Herstellung von festen gefrorenen Plazentagewebe Abschnitte für die Visualisierung der Entwicklung von Blutstammzellen durch Immunhistochemie in ihrer genauen zellulären Nischen. Als hämatopoetischen spezifische Antigene nicht während der Herstellung der in Paraffin eingebetteten Abschnitte erhalten sind, verwenden wir routinemäßig fixiert Gefrierschnitten für die Lokalisierung der Plazenta HSCs und Vorläuferzellen.

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Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Wir haben die Plazenta als wichtiger blutbildenden Organ während der Entwicklung identifiziert. Wir fanden, dass hämatopoetische Stammzellen (HSZ) sind beide generiert und erweitert in der Plazenta in einzigartige Mikroumgebung Nischen. Hier beschreiben wir experimentelle Techniken zur Isolierung und Visualisierung von HSZ in der Maus Plazenta erforderlich.

Isolierung und Analyse von hämatopoetischen Stammzellen aus der Plazenta

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

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A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

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Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

Isolierung und Transplantation von hämatopoetischen Stammzellen (HSZ)

Forschung

Biologie

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Ableitung von hämatopoetischen Stammzellen aus embryonalen Stammzellen der Maus

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Isolierung von Anfang hämatopoetischen Stammzellen aus Murine Dottersack und AGM

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolierung von Retinal Stammzellen aus der Maus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentivirale-vermittelte Knockdown Während Ex Vivo Erythropoese von humanen hämatopoetischen Stammzellen

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Phänotypische Analyse und Isolierung von murinen hämatopoetischen Stammzellen und Lineage-festgelegte Vorläuferzellen

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion und Analyse von epithelialen zu mesenchymalen Transition

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolation und Kultur der Dental epithelialen Stammzellen aus dem erwachsenen Maus Schneidezahn

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

Retrovirale Infektion von murinen embryonalen Stammzellen abgeleitete Embryoidkörper Zellen für die Analyse von hämatopoetischen Differenzierung

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

Identifizierung von Schlüsselfaktoren Regelselbsterneuerung und Differenzierung in EML hämatopoetischen Vorläuferzellen durch RNA-Sequenzierungsanalyse

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...