Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

1. העובר הסרת לנתיחה השליה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להתחיל, עוברים תחילה יש לבודד סכרים בהריון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעלי חיים מומתים על פי הנהלים שאושרו - במקרה שלנו אנחנו הולכים להשתמש מנה קטלנית של חומר הרדמה isoflurane </li><li style=";text-align:ri...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

הפרוצדורות המתוארות פרוטוקול זה יאפשר בידוד הדמיה של רקמות השליה גזע hematopoietic ו ובתאים. לסיכום מקיף על תשואה מספר הסלולר צפוי של HSCs בשליה ושאר איברים hematopoietic העובר לאורך התפתחות העובר אנו מתייחסים Gekas, et al. 2005. עבור לוקליזציה של HSCs בפיתוח תאים hematopoietic אחרים השליה אנו מתייחסים רודוס...

רשימת חומרים: 100mm גלוקוז 10mm NaN3 15 מ&quot;ל חרוטי צינורות (BD) 16-G, 18-G, 20-G, G ו-22-25-G מחטים (BD) סוכרוז 30% הפתרון צלחות פטרי 35mm (BD) 4% Paraformaldehyde 50 - מ &#39;מסננים תא (Celltrics) 5 מ&quot;ל מזרקים (BD) אלקליין תשתית phosphatase קיט אני (וקטור האדום, וקטור) אלקליין תשתית phosphatase Kit III (וקטור כחול, וקטור) פתרון לאנטיביוטיקה (פניצילין / סטרפטומיצין, P / S) Collagenase סוג אני (Sigma) Cryomold פנויה הדגימה ויניל תבניות (10mm x 10mm x 5 מ&quot;מ, רקמות-Tek) Cytokeratin נוגדן ראשוני (DakoCytomation) מלקחיים Dissection, פלדה אל חלד או טיטניום, מספר 5 או 55 Drierite עוברית שור סרום (FBS) מיקרוסקופ Fisherbrand פלסטיק שקופיות מיילר (פישר) גלוקוז אוקסידאז 1000u/ml Levamisole (וקטור) הרכבה התקשורת, מימיות מבוססי הרכבה בינונית (VectamountTM א.ק.) סרום סוס רגיל (וקטור) חיתוך טמפרטורה אופטימלית (אוקטובר, רקמות-Tek) התשתית peroxidase ערכת DAB (וקטור) בופר פוספט (PBS) עם סידן / מגנזיום (w Ca2 + / Mg2 +) בופר פוספט (PBS) ללא סידן / מגנזיום (w / o Ca2 + / Mg2 +) Slide קופסת פלסטיק (מחזיקה 100 שקופיות) צינורות פלסטיק (PVC Nalgene 180 אינו רעיל Autoclavable) פוליפרופילן Round-Bottom מבחנה, 5 מ&quot;ל (12x75 מ&quot;מ, BD פלקון) Proteinase K 20mg/ml פתרון (Amresco) מחקר בינלאומי מוצרים קורפ סופר פאפ פן HT * סמנים שקופיות (2,5 מ&quot;מ, פישר) רקמות תרבות שטופלו בצורת U (מסביב למטה) צלחות 96-24-טוב או טוב (BD פלקון) Tween20, SigmaUltra (Sigma) קיט הגברה Tyramide (Invitrogen) Vectastain ABC phosphatase אלקליין רגילה Kit (וקטור) Vectastain ABC רגיל עלית Kit (וקטור)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

בתאי גזע hematopoietic (HSCs) יש את היכולת העצמית לחדש וליצור כל סוגי תאים של שושלות דם במהלך חייו של הפרט. HSCs כל לצוץ במהלך ההתפתחות העוברית, שלאחריו גודל הבריכה שלהם מתוחזק על ידי עצמית חידוש חלוקות תא. זיהוי המקור האנטומי של HSCs והאירועים התפתחותי קריטי בוויסות תהליך של התפתחות HSC כבר מסובך כמו באתרים אנטומיים רבים להשתתף במהלך hematopoiesis העובר. לאחרונה זיהינו את השליה כגוף hematopoietic העיקריים שבהם HSCs נוצרות והורחב נישות microenvironmental ייחודי (Gekas, et al 2005, רודוס, et al 2008). כתוצאה מכך, השליה מהווה מקור חשוב של HSCs במהלך הופעתה שלהם והרחבת הראשונית. במאמר זה, אנו מראים טכניקות לנתיחה עבור בידוד של השליה Murine מ E10.5 ו E12.5 עוברים, התואמת את שלבי ההתפתחות של תחילת HSCs ואת שיא בגודל של הבריכה HSC את השליה, בהתאמה. בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול אופטימיזציה עבור ניתוק האנזימטית מכנית של רקמת השליה לתוך ההשעיה תא יחיד לשימוש cytometry זרימה או מבחני תפקודית. מצאנו כי השימוש collagenase להשעיה תא בודד של השליה נותן תשואות מספיק HSCs. גורם חשוב המשפיע תשואה HSC מן השליה היא מידת הניתוק מכני לפני, ומשך טיפול אנזימטי. אנו מספקים גם פרוטוקול להכנת קבוע קפוא סעיפים רקמת השליה להדמיה של פיתוח HSCs ידי אימונוהיסטוכימיה בתוך נישות הסלולר המדויק שלהם. כמו אנטיגנים ספציפיים hematopoietic אינם נשמרים במהלך הכנת סעיפים פרפין מוטבע, אנו משתמשים באופן שגרתי חלקים קפואים קבוע localizing HSCs השליה אבות.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

זיהינו את השליה כגוף hematopoietic העיקריים במהלך ההתפתחות. מצאנו כי בתאי גזע hematopoietic (HSCs) הן שנוצר הרחיב בשליה בתוך נישות microenvironmental ייחודי. כאן אנו מתארים ניסיוני בטכניקות נדרש בידוד להדמיה של HSCs את השליה העכבר.

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

בידוד והשתלות של בתאי גזע hematopoietic (HSCs)

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

בידוד מוקדם בתאי גזע hematopoietic מ Murine חלמון Sac ו AGM

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral בתיווך מציאה במהלך Ex Vivo Erythropoiesis של אדם בתאי גזע hematopoietic

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

ניתוח בידוד פנוטיפי של Murine בתאי גזע hematopoietic ו-Lineage מחויבים אבות

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

בידוד והתרבות של תאי גזע השיניים אפיתל ממבוגרי העכבר הארקטיק

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

זיהום retroviral של Murine גזע עוברי תאי Embryoid גוף תא נגזר לניתוח של בידול המטופואטיות

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

זיהוי של גורמי מפתח עם הרגולציה עצמית התחדשות והתמיינות בתאי EML המטופואטיות מבשר על ידי ניתוח RNA-רצף

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...