Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
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1. भ्रूण हटाने और अपरा विच्छेदन <ol><li> शुरू करने के लिए, भ्रूण पहली बार गर्भवती बांधों से अलग होना चाहिए. </li><li> पशु अनुमोदित प्रक्रियाओं के अनुसार euthanized हैं - हमारे मामले में हम संवेदनाहारी isoflurane का एक घातक खुराक...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

प्रयोगात्मक इस प्रोटोकॉल में वर्णित प्रक्रियाओं अलगाव और अपरा ऊतक और hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के दृश्य के लिए अनुमति देगा. उम्मीद सेलुलर उपज और भ्रूण के विकास के दौरान अपरा और अन्य भ्रूण hematopoietic अंग...

माल सूची: 100mm ग्लूकोज 10mm NaN3 15 मिलीलीटर चोटीदार ट्यूबों (बी) 16-G, 18 जी, 20 - जी, 22 जी और 25 जी सुइयों (बी) 30% Sucrose समाधान 35 मिमी पेट्री व्यंजन (बी) 4% Paraformaldehyde 50 - मीटर सेल फिल्टर (Celltrics) 5 मिलीलीटर सीरिंज (बी) Alkaline फॉस्फेट सब्सट्रेट किट मैं (वेक्टर लाल, वेक्टर) Alkaline फॉस्फेट सब्सट्रेट किट III (वेक्टर ब्लू, वेक्टर) एंटीबायोटिक समाधान (पेनिसिलीन / स्ट्रेप्टोमाइसिन, पी / एस) Collagenase प्रकार मैं (सिग्मा) Cryomold डिस्पोजेबल Vinyl नमूना Molds (10mm x 10mm x 5 मिमी, ऊतक टेक) Cytokeratin प्राथमिक एंटीबॉडी (DakoCytomation) विच्छेदन संदंश, स्टेनलेस स्टील या टाइटेनियम, नंबर 5 या 55 Drierite भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) Fisherbrand प्लास्टिक माइक्रोस्कोप स्लाइड मेलर (फिशर) शर्करा oxidase 1000u/ml Levamisole (वेक्टर) बढ़ते मीडिया, जलीय आधारित बढ़ते मध्यम (VectamountTM AQ) सामान्य हार्स सीरम (वेक्टर) इष्टतम काटना तापमान (अक्तूबर, ऊतक टेक) Peroxidase सब्सट्रेट किट थपका (वेक्टर) फास्फेट / कैल्शियम मैगनीशियम (w सीए 2 + / + Mg2) के साथ खारा (पीबीएस) buffered फास्फेट कैल्शियम / मैग्नीशियम (w / ओ सीए 2 + / Mg2 +) के बिना खारा (पीबीएस) buffered प्लास्टिक स्लाइड बॉक्स (100 स्लाइड्स रखती) प्लास्टिक टयूबिंग (Nalgene 180 पीवीसी Autoclavable गैर विषैले) Polypropylene राउंड नीचे टेस्ट ट्यूब, 5 मिलीलीटर (12x75 मिमी, बी.डी. फाल्कन) Proteinase कश्मीर 20mg/ml समाधान (Amresco) अनुसंधान इंटरनेशनल कॉर्प सुपर पैप पेन HT * स्लाइड मार्करों (2,5 मिमी, फिशर) 96 अच्छी तरह से या 24 में अच्छी तरह से ऊतक संस्कृति U-आकार (दौर नीचे) इलाज प्लेट (बी.डी. फाल्कन) Tween20 SigmaUltra, (सिग्मा) Tyramide प्रवर्धन किट (Invitrogen) Vectastain एबीसी alkaline फॉस्फेट मानक किट (वेक्टर) Vectastain एबीसी मानक कुलीन किट (वेक्टर)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

Hematopoietic स्टेम सेल (HSCs) आत्म नवीनीकृत और एक व्यक्ति की जीवन भर खून प्रजातियों के सभी प्रकार की कोशिकाओं को उत्पन्न करने की क्षमता है. सभी HSCs भ्रूण विकास के दौरान उभरने, जो अपने पूल के आकार के बाद स्वयं renewing सेल डिवीजनों के द्वारा बनाए रखा है. HSCs और महत्वपूर्ण विकासात्मक घटनाओं HSC विकास की प्रक्रिया को विनियमित करने के संरचनात्मक मूल की पहचान के रूप में कई संरचनात्मक साइटों भ्रूण hematopoiesis के दौरान भाग लेने के जटिल है. हाल ही में, हम एक प्रमुख hematopoietic अंग जहां HSCs उत्पन्न होते हैं और अद्वितीय microenvironmental niches में विस्तार (Gekas, एट अल, 2005 रोड्स, एट अल 2008) के रूप में नाल की पहचान की. नतीजतन, अपरा उनके उद्भव और प्रारंभिक विस्तार के दौरान एक HSCs की एक महत्वपूर्ण स्रोत है. इस अनुच्छेद में, हम E10.5 और E12.5 भ्रूण, HSCs की दीक्षा और नाल में HSC पूल के आकार में चोटी के विकास के चरणों के लिए इसी, क्रमशः से murine नाल के अलगाव के लिए विच्छेदन तकनीक दिखा. इसके अलावा, हम वर्तमान प्रवाह cytometry या कार्यात्मक assays में उपयोग के लिए एकल कक्ष निलंबन में placental ऊतक के enzymatic और यांत्रिक हदबंदी के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल. हमने पाया है कि नाल के एकल कक्ष निलंबन के लिए collagenase के उपयोग HSCs की पर्याप्त पैदावार देता है. एक महत्वपूर्ण कारक नाल से HSC उपज को प्रभावित यांत्रिक हदबंदी से पहले की डिग्री है, और, enzymatic उपचार अवधि है. हम भी अपने सटीक सेलुलर niches में immunohistochemistry से HSCs के विकास के दृश्य के लिए निर्धारित जमी अपरा ऊतक वर्गों की तैयारी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं. के रूप में hematopoietic विशिष्ट प्रतिजनों आयल एम्बेडेड वर्गों की तैयारी के दौरान संरक्षित नहीं हैं, हम नियमित अपरा HSCs और progenitors स्थानीयकृत के लिए तय जमी वर्गों का उपयोग करें.

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Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

हम विकास के दौरान एक प्रमुख hematopoietic अंग के रूप में नाल की पहचान की है. हमने पाया है कि hematopoietic स्टेम सेल (HSCs) दोनों उत्पन्न कर रहे हैं और अद्वितीय microenvironmental niches में नाल में विस्तार. यहाँ, हम प्रयोगात्मक अलगाव और माउस नाल में HSCs के दृश्य के लिए आवश्यक तकनीक का वर्णन.

अलगाव और अपरा से hematopoietic स्टेम सेल का विश्लेषण

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

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Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

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The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

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Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

वयस्क माउस छेनी से चिकित्सकीय उपकला स्टेम कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

Murine भ्रूण की रेट्रोवायरल संक्रमण Hematopoietic भेदभाव के विश्लेषण के लिए सेल व्युत्पन्न embryoid शरीर की कोशिकाओं को स्टेम

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

शाही सेना अनुक्रमण विश्लेषण द्वारा EML Hematopoietic अग्रदूत साबित कोशिकाओं में आत्म नवीकरण और भेदभाव विनियमन मुख्य कारक की पहचान

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...