Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
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1。胚の除去と胎盤切開<ol><li>開始するには、胚が最初に妊娠した母獣から分離する必要があります。 </li><li>動物は、承認された手順に従って安楽死させる - 私たちのケースで我々は、イソフルラン麻酔薬の致死量を使用するつもりです</li><li>最初に、エタノールで腹をスプレーし、ハサミで小さな切開を行います。 </li><li>腹部を明らかにし、腹膜を切り開くために両手で皮膚を離れて引き...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

このプロトコールに記載される実験手順は、胎盤組織と造血幹細胞や前駆細胞の分離と可視化が可能になります。胎児の発育を通して胎盤や他の胎児の造血臓器における造血幹細胞の予想される細胞の収量と数に関する包括的な概要については、我々はスゲカスらを参照してください。 2005年。胎盤で造血幹細胞および他の造血細胞の開発のローカライズのために我々はローズ、らを参照してください。 2008

材料のリスト ： 100mMのグルコース 10mMのNaN3 15 mlコニカルチューブ（BD） 16 G、18 G、20 G、22 G、25 G針（BD） 30％のショ糖液 35ミリメートルのペトリ皿（BD） 4％パラホルムアルデヒド 50 - mのセルのフィルタ（Celltrics） 5 mlのシリンジ（BD） アルカリホスファターゼ基質キットI（ベクトル赤、ベクトル） アルカリフォスファターゼ基質キットIII（ベクトル青、ベクトル） 抗生物質（ペニシリン/ストレプトマイシン、P / S）ソリューション コラゲナーゼI型（シグマ） Cryomold使い捨てビニール片金型（10mm x 10mmの× 5mmの、組織- Tek社） サイトケラチン一次抗体（DakoCytomation） 解剖ピンセット、ステンレス鋼やチタン、5番または55 DRIERITE ウシ胎児血清（FBS） Fisherbrandプラスチック顕微鏡スライドメーラー（フィッシャー） グルコースオキシダーゼ1000u/ml レバミゾール（ベクター） マウントメディア、水性ベースのマウンティングメディウム（VectamountTM AQ） 正常ウマ血清（ベクトル） 最適な切削温度（OCT、ティッシュ- Tek社） ペルオキシダーゼ基質キットDAB（ベクトル） リン酸塩は、カルシウム/マグネシウム（WのCa2 + / Mg2 +を）と緩衝生理食塩水（PBS） リン酸塩は、カルシウム/マグネシウム（W / OのCa2 + / Mg2 +は）なしで緩衝生理食塩水（PBS） プラスチック製のスライドボックス（100スライドを保持する） プラスチックチューブ（Nalgene 180 PVC無毒オートクレーブ可能） ポリプロピレン丸底試験管5 mlの（12x75ミリメートル、BDファルコン） プロテイナーゼK 20mg/ml溶液（Amresco） 研究プロダクツインターナショナルコーポレーションスーパーパップペンHT *スライドマーカー（2,5 mmの、フィッシャー） 組織培養U字型（丸底）治療を96ウェルまたは24ウェルプレート（BDファルコン） Tween20を、SigmaUltra（シグマ） チラミド増幅キット（Invitrogen社） ベクタステインABCアルカリホスファターゼスタンダードキット（ベクター） ベクタステインABC標準エリートキット（ベクター）

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

造血幹細胞（HSC）は、自己更新し、個々の生涯を通して血液系統のすべての細胞型を生成する機能を持っている。すべての造血幹細胞は、それらのプールサイズは自己複製細胞分裂によって維持され、その後、胚発生時に出現する。多くの解剖学的部位が胎児の造血中に参加するとHSCの開発の過程を調節する造血幹細胞との重要な発達のイベントの解剖学的起源を特定することはややこしくなっている。最近、我々は造血幹細胞がユニークな微環境のニッチ（スゲカス、ら、2005、ロードス、ら2008）で生成し、展開されている主要な造血器官として胎盤を同定した。その結果、胎盤は、彼らの出現と初期の展開時の造血幹細胞の重要な源です。 この記事では、我々はそれぞれ、造血幹細胞および胎盤におけるHSCプールの大きさのピークの開始の発達段階に対応するE10.5からマウス胎盤の分離およびE12.5胚の解剖の技術を、示す。さらに、我々はフローサイトメトリーまたは機能アッセイで使用するための単一細胞懸濁液中に胎盤組織の酵素的および機械的解離のために最適化されたプロトコルを提示する。我々は、胎盤の単細胞懸濁液のためのコラゲナーゼの使用は、造血幹細胞の十分な収量を示すことを発見した。胎盤からHSC収量に影響を与える重要な要因は、前に機械的解離の度合い、及び酵素処理、の期間です。 我々はまた彼らの正確な細胞のニッチにおける免疫組織化学によって開発造血幹細胞の可視化のための固定凍結胎盤組織切片の調製のためのプロトコルを提供しています。造血特異的な抗原はパラフィン包埋切片の準備中に保持されていないとして、我々は日常的に胎盤造血幹細胞および前駆細胞をローカライズするための固定凍結切片を使用してください。

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Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

我々は、開発中の主要な造血器官として胎盤を同定した。我々はその造血幹細胞（HSC）が生成され、ユニークな微環境のニッチの胎盤で展開されている両方とも発見。ここで、我々はマウス胎盤における造血幹細胞の分離と可視化に必要な実験手法を説明します。

プラセンタから造血幹細胞の単離と解析

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

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A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

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Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

造血幹細胞の分離と移植（造血幹細胞）

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

マウス胚性幹細胞から造血幹細胞の導出

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

マウス卵黄嚢とAGMから早期の造血幹細胞の分離

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

マウスの眼から網膜幹細胞の単離

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

レンチウイルスを介したノックダウン中生体外で</emヒト造血幹細胞の>赤血球

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

マウス造血幹細胞およびリネージュコミット前駆細胞の表現型の解析と分離

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

間葉転換を誘導し、上皮の分析

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

成体マウス切歯から歯科上皮幹細胞の単離および培養

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

マウス胚のレトロウイルス感染は、造血分化の解析のための細胞由来の胚様体幹細胞

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

RNAシーケンシング解析によりEML造血前駆細胞における自己再生および分化を調節する重要な要因の同定

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...