Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
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1. 배아 제거 및 placental 해부 <ol><li> 시작하려면, 배아 먼저 임신 댐에서 격리해야합니다. </li><li> 동물이 승인 절차에 따라 euthanized 있습니다 - 우리 사건에서 우리는 마취 isoflurane의 치사량을 사용하는거야 </li><li> 첫째, 에탄올과 복부를 스프레이하고 가위로 작은 절개를합니다. </li><li> 복부를 발견하고 복막을 열고 잘라 양손으로 피부를 떠날. </li><li> 포셉로 자궁 뿔을 선택하고 각 말초 끝에 가...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

이 프로토콜에서 설명하는 실험 절차는 placental 조직 및 조혈 줄기 및 전구 세포의 분리 및 시각화를위한 수 있습니다. 태아 발달에 걸쳐 태반 및 기타 태아 조혈 장기에 HSCs의 예상 세포 수율과 전화 번호에 대한 포괄적인 요약을 위해 우리는 Gekas, 외를 참조하십시오. 2005. 태반의 개발 HSCs 및 기타 조혈 세포의 지방화에 대한 우리 로즈, 외를 참조하십시오. 2008.

자료 목록 : 100mM 포도당 10mM NaN3 15 ML 원뿔 튜브 (BD) 16 G, 18 G, 20 G, 22 - G 25 - G의 바늘 (BD) 30 % 자당 솔루션 35mm 배양 접시 (BD) 4 % Paraformaldehyde 50 - m 전지 필터 (Celltrics) 5 ML의 주사기 (BD) 알카라인 인산 가수 분해 효소 기판 키트 I (벡터 빨강, 벡터) 알카라인 인산 가수 분해 효소 기판 키트 III (벡터 블루, 벡터) 항생제 (페니실린 / 스트렙토 마이신, P / S) 솔루션 Collagenase 유형 I (시그마) Cryomold 일회용 비닐 스피스먼 금형 (10mm X 10mm X 5mm, 조직 테크) Cytokeratin 차 항체 (DakoCytomation) 해부의 포셉, 스테인레스 스틸이나 티타늄, 숫자 5 55 Drierite 태아 소 혈청 (FBS) Fisherbrand 플라스틱 현미경 슬라이드 메일러 (피셔) 포도당 산화 효소의 1000u/ml Levamisole (벡터) 마운트 미디어 수성 기반 장착 중간 (VectamountTM AQ) 일반 호스 세럼 (벡터) 최적의 절삭 온도 (OCT, 조직 테크) 퍼옥시데이즈 기판 키트 DAB (벡터) 인산은 칼슘 / 마그네슘 (W Ca2 + / Mg2 +)와 살린 (PBS)를 버퍼 인산은 칼슘 / 마그네슘 (W / O Ca2 + / Mg2 +)없이 살린 (PBS)를 버퍼 플라스틱 슬라이드 박스 (100 슬라이드를 보유) 플라스틱 관 (Nalgene 180 PVC 무독성 Autoclavable) 폴리 프로필렌 라운드 - 히프 테스트 튜브, 5 ML (12x75 mm, BD 팰컨) Proteinase K 20mg/ml 솔루션 (Amresco) 연구 제품 국제 코프 슈퍼 아빠 펜 HT * 슬라이드 마커 (2,5 mm, 피셔) 조직 문화 U 형 (원형 - 하단) 처리 96 자 또는 24 - 잘 접시 (BD 팰컨) Tween20, SigmaUltra (시그마) Tyramide 증폭 키트 (Invitrogen) Vectastain ABC 알카라인 인산 가수 분해 효소 표준 키트 (벡터) Vectastain ABC 표준 엘리트 키트 (벡터)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

조혈 줄기 세포 (HSCs)는 자기 갱신과 개인의 일생 동안 혈액 lineages 모든 세포 유형을 생성하는 기능이 있습니다. 모든 HSCs는 수영장 크기가 셀프 갱신 세포 분열에 의해 유지되는 후, 배아 발달 동안 등장. 많은 해부 학적 사이트가 태아의 조혈 동안 참여로 HSC 발전의 과정을 규제 HSCs하고 중요한 발달 사건의 해부 출처를 확인하는 것은 복잡하고 있습니다. 최근, 우리는 HSCs가 (Gekas, 외 2005, 로즈, 외 2008) 생성과 독특한 microenvironmental 틈새에 확장하는 중요한 조혈 기관으로 태반을 확인. 따라서 태반들이 출현 및 초기 확장 중에 HSCs의 중요한 원천입니다. 이 문서에서는, 우리는 E10.5 각각 HSCs의 개시와 태반에서 HSC 수영장의 크기에 최대의 발달 단계에 해당 E12.5 태아, 태반에서 murine의 격리에 대한 해부 기술을 보여줍니다. 또한, 우리는 유동세포계측법 또는 기능 assays에 사용하기 위해 단일 ​​세포 현탁액에 placental 조직의 효소 및 기계적 분리에 대한 최적화된 프로토콜을 제시한다. 우리는 태반의 단일 세포에 대한 사용 중지 collagenase의 사용 HSCs의 충분한 수율을 제공 것으로 나타났습니다. 태반에서 HSC 수율에 영향을 미치는 중요한 요소는 사전에 기계적 분리의 정도, 그리고 효소 치료의 기간입니다. 우리는 또한 정확한 세포 틈새에 immunohistochemistry으로 HSCs을 개발의 시각화를위한 고정 냉동 placental 조직 섹션의 준비를 위해 프로토콜을 제공합니다. 조혈 특정 항원이 파라핀 임베디드 섹션의 준비 기간 동안 보존되지 않습니다, 우리는 정기적으로 placental HSCs과 progenitors을 번역을위한 고정 냉동 섹션을 사용합니다.

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Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

우리는 개발하는 동안 중요한 조혈 기관으로 태반을 확인했습니다. 우리는 조혈 줄기 세포 (HSCs)이 생성되는 독특한 microenvironmental 틈새의 태반에서 확장 둘 발견했습니다. 여기, 우리는 마우스 태반에 HSCs의 격리 및 시각화에 필요한 실험 기법을 설명합니다.

태반에서 조혈 줄기 세포의 분리 및 분석

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

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A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

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Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

분리 및 조혈 줄기 세포의 이식 (HSCs)

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생물학

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Murine 난황과 AGM에서 조기 조혈 줄기 세포의 분리

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

마우스 아이의 망막 줄기 세포의 분리

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral - 중재 최저 동안 예 VIVO</em인간 조혈 줄기 세포의> 적혈구 조혈

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Murine 조혈 줄기 세포와 리니지 - 헌신 Progenitors의 Phenotypic 분석 및 절연

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

간엽 전환을 유도하고 상피의 분석

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

성인 마우스 앞니의 치아 상피 줄기 세포의 분리 및 문화

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

쥐과 배아의 레트로 바이러스 감염은 조혈 분화 분석을위한 세포 유래 배아 바디 줄기 세포

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

RNA 시퀀싱 분석하여 EML 조혈 전구체 세포의자가 재생 (self-renewal)과 분화를 조절하는 중요한 요소의 식별

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...