Name: isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta
Uploaded: 2008-06-24T16:25:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

1. Embriyo kaldırma ve plasental diseksiyonu <ol><li> Başlamak için, embriyolarının ilk hamile barajlardan izole edilmelidir. </li><li> Hayvanlar onaylanmış prosedürlere göre ötenazi bizim durumumuzda ölümcül dozda anestezi izofluran kullanmak için gidiyoruz </li><li> İlk olarak, etanol ile karın sprey ve bir makas ile küçük bir kesi yapmak. </li><li> Karın ortaya çıkarmak ve periton açık kesmek için iki elinizle deri koparmak. </li><li> Forseps ile uterin boynuz pick up ve onları her distal s...

<ol>
	<li>Gekas, C., Dieterlen-Lievre, F., Orkin, S. H., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+placenta+is+a+niche+for+hematopoietic+stem+cells.">The placenta is a niche for hematopoietic stem cells.</a> Dev Cell. 8, 365-375 (2005).</li><li>Rhodes, K. E., Gekas, C., Wang, Y., Lux, C. T., Francis, C. S., Chan, D. N., Conway, S., Orkin, S. H., Yoder, M. C., Mikkola, H. K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Emergence+of+Hematopoietic+Stem+Cells+Is+Initiated+in+the+Placental+Vasculature+in+the+Absence+of+Circulation.">The Emergence of Hematopoietic Stem Cells Is Initiated in the Placental Vasculature in the Absence of Circulation.</a> Cell Stem Cell. 2, 252-263 (2008).</li></ol>

Bu protokol açıklanan deneysel prosedürleri plasental doku ve hematopoietik kök ve progenitör hücrelerin izolasyonu ve görüntüleme için izin verir. Fetal gelişim boyunca plasenta ve diğer fetal hematopoetik organlar HKH&#39;lerin beklenen hücresel verim ve sayısı hakkında kapsamlı bir özeti için Gekas, ark bakın. 2005. Plasenta gelişmekte HKH&#39;lerin ve diğer hematopoetik hücreler lokalizasyonu için Rodos ve ark bakın. 2008.

Malzeme Listesi: 100 mM Glukoz 10mM NaN3 15 ml konik tüpler (BD) 16-G, 18-G, 20-G, 22-G ve 25 G iğneler (BD) % 30 Sakkaroz Çözüm 35mm Petriler (BD) 4% Paraformaldehit 50 - m hücre filtreleri (Celltrics) 5 ml şırınga (BD) Alkalin Fosfataz Yüzey Takımı (Vektör Kırmızı, Vektör) Alkalin Fosfataz Yüzey Takımı III (Vektör Mavi, Vektör) Antibiyotik (Penisilin / Streptomisin, P / S) çözümü Kollajenaz tip I (Sigma) Cryomold Disposable Vinil Numune Kalıpları (10mm x 10mm x 5 mm, Doku-Tek) Sitokeratin İlköğretim Antikor (DakoCytomation) Diseksiyon forseps, paslanmaz çelik veya titanyum, sayı 5 veya 55 Drierite Fetal sığır serumu (FBS) Fisherbrand Plastik Mikroskop Slayt Mailer (Balıkçı) Glikoz oksidaz 1000u/ml Levamisole (Vector) Montaj medya, Sulu tabanlı Montaj Orta (VectamountTM AQ) Normal At Serumu (Vektör) Optimal Kesme Sıcaklığı (OCT, Doku-Tek) Peroksidaz Yüzey Takımı DAB (Vektör) Fosfat Tamponlu Salin (PBS) Kalsiyum / Magnezyum (w Ca2 + / Mg2 +) Fosfat Tamponlu Salin (PBS), Kalsiyum / Magnezyum (w / o Ca2 + / Mg2 +) olmadan Plastik Slayt Kutusu (100 slaytlar tutan) Plastik Boru (Nalgene 180 PVC Sigara toksik Otoklavlanabilir) Polipropilen Yuvarlak Tabanlı Tüp, 5 ml (12x75 mm, BD Falcon) Proteinaz K 20mg/ml Çözüm (Amresco) Araştırma Ürünler International Corp Süper Pap Kalem HT * Slayt işaretlerini (2,5 mm, Fisher) Doku kültürü U-şekilli (yuvarlak alt) tedavi 96-iyi ya da 24 kuyu levhalar (BD Falcon) Tween20, SigmaUltra (Sigma) Tyramide Amplifikasyon Kit (Invitrogen) Vectastain ABC Alkalin Fosfataz Standart Kiti (Vector) Vectastain ABC Standart Elite Kiti (Vector)

isolation and analysis of hematopoietic stem cells from the placenta

Hematopoetik kök hücreler (HKH&#39;lerin), kendi kendini yenileme ve bireyin ömrü boyunca kan soyların bütün hücre tipleri oluşturmak yeteneğine sahip. Tüm HKH&#39;lerin kendi havuzu boyutu kendini sürekli yenileyen hücre bölünmeleri tarafından yapılmaktadır, bundan sonra, embriyonik gelişim sırasında ortaya çıkar. HSC gelişme sürecini düzenleyen HKH&#39;lerin ve kritik gelişimsel olayların anatomik kökenli belirlenmesi, birçok anatomik siteler fetal hematopoez sırasında katılmak olarak karmaşık olmuştur. Son zamanlarda, büyük hematopoetik bir organ olarak HKH&#39;lerin (Gekas, ve ark 2005, Rodos, ve ark 2008) ve eşsiz microenvironmental nişler genişletilmiş plasenta belirledi. Sonuç olarak, plasenta, bunların ortaya çıkması ve ilk genişleme sırasında HKH&#39;lerin önemli bir kaynak. Bu makalede, biz E10.5 ve sırasıyla HKH&#39;lerin başlatılması ve plasenta HSC havuzu boyutu zirve gelişim evreleri ile ilgili E12.5 embriyolar, fare plasentanın izolasyonu için diseksiyon teknikleri gösteriyor. Buna ek olarak, flow sitometri veya fonksiyonel testleri kullanmak için tek hücre süspansiyonu içine plasental doku enzimatik ve mekanik ayrılma için optimize edilmiş bir protokol mevcut. Plasentanın tek hücre süspansiyonu için kollajenaz kullanımı HKH&#39;lerin yeterli verimi verdiğini bulduk. Plasenta HSC verimi etkileyen önemli bir faktör, önceden mekanik ayrılma derecesi, ve enzimatik tedavi süresi. Biz de onların hassas hücresel nişler içinde immünohistokimya HKH&#39;lerin gelişmekte olan görselleştirme için sabit-dondurulmuş plasental doku kesitlerinde hazırlanması için bir protokol sağlar. Hematopoetik spesifik antijenler parafin bölümlerinin hazırlanması sırasında korunur olarak, rutin plasental HKH&#39;lerin ve atalarıdır lokalize için sabit dondurulmuş bölümleri kullanabilirsiniz.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta at JoVE.com

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

Biz, gelişimi sırasında büyük bir hematopoetik organ olarak plasenta tespit ettik. Biz, hematopoietik kök hücreler (HKH&#39;lerin) üretilen ve benzersiz microenvironmental nişler içinde plasenta genişletilmiş iki bulundu. Burada, fare plasenta HKH&#39;lerin izolasyonu ve görselleştirme için gerekli deneysel teknikler açıklanmaktadır.

Plasenta Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu ve Analizi

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

A Hierarchical Stem-Cell System: Blood Cell Formation

SCIENTISTS IN ACTION

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells (HSCs)

Isolation and Transplantation of Hematopoietic Stem Cells HSCs

İzolasyon ve Hematopoetik Kök Hücre Transplantasyonu (HKH&#39;lerin)

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation of Early Hematopoietic Stem Cells from Murine Yolk Sac and AGM

Murin Yolk Sac ve AGM Erken Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu

In the mouse embryo, early hematopoiesis occurs simultaneously in multiple organs, which includes the yolk sac and aorta-gonad-mesonephros region. These ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral-mediated Knockdown During Ex Vivo Erythropoiesis of Human Hematopoietic Stem Cells

Lentiviral aracılı demonte sırasında Ex vivo İnsan Hematopoetik Kök Hücre Eritropoiesis

Erythropoiesis is a commonly used model system to study cell differentiation. During erythropoiesis, pluripotent adult human hematopoietic stem cells ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Mürin Hematopoetik Kök Hücreler ve Lineage-kararlı progenitörlerin Fenotipik Analizi ve İzolasyon

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Retroviral Infection of Murine Embryonic Stem Cell Derived Embryoid Body Cells for Analysis of Hematopoietic Differentiation

Kemirgen Embriyonik retroviral Enfeksiyon Hematopoetik Farklılaşma Analizi için Hücre Türetilmiş embriyoidlerin Vücut Kök Hücreler

Embryonic stem cells (ESCs) are an outstanding model for elucidating the molecular mechanisms of cellular differentiation. They are especially useful for ...

Identification of Key Factors Regulating Self-renewal and Differentiation in EML Hematopoietic Precursor Cells by RNA-sequencing Analysis

RNA dizileme Analizi ile EML Hematopoetik Öncü Hücreler Self-yenileme ve farklılaşma Düzenlenmesi Anahtar Faktörler belirlenmesi

Hematopoietic stem cells (HSCs) are used clinically for transplantation treatment to rebuild a patient&#39;s hematopoietic system in many diseases such as ...