Name: neutrophil isolation protocol
Uploaded: 2008-07-23T22:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neutrophil Isolation Protocol at JoVE.com

<p> De financiering van NIH R01 HL56621. </p>

<p class="jove_title"> Neutrofielen Isolatie Protocol </p><ol><li> Breng alle reagentia op kamertemperatuur. </li><li> Verzamel 5,0 ml van neutrofielen isolatie media in centrifugebuis. Voorzichtig laagje 5,0 ml bloed over de scheiding media. Voer deze stap langzaam en voorzichtig, en met de pipet tip dicht bij de oppervlakte van de media om te voorkomen dat het mengen van het bloed en de media. </li><li> Centrifugeer op 500 RCF gedurende 35 min bij 20-25 ° C. Het bloed op moet scheiden in 6 verschillende bands: plasma, monocyten, isolatie med...

<ol>
	<li>Boyum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+leucocytes+from+blood+and+bone+marrow.">Separation of leucocytes from blood and bone marrow.</a> <em style='font-style: italic'>Scand. J. Clin. Invest</em>. <b>21</b>, 77-83 (1968).</li><li>England, J. M., Rowan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+assignment+of+values+to+fresh+blood+used+for+calibrating+automated+blood+cell+counters.">The assignment of values to fresh blood used for calibrating automated blood cell counters.</a> <em style='font-style: italic'>Clin. Lab. Haemat</em>. <b>10</b>, 203-212 (1988).</li><li>Garcia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+two+leukocyte+extraction+methods+for+cytomegalovirus+antigenemia+assay.">Comparison of two leukocyte extraction methods for cytomegalovirus antigenemia assay.</a> <em style='font-style: italic'>J. Clin. Microbiol</em>. <b>34</b>, 182-184 (1996).</li><li>Ferrante, A., Thong, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+conditions+for+simultaneous+purification+of+mononuclear+and+polymorphonuclear+leucocytes+from+human+peripheral+blood+by+the+Ficoll-Hypaque+method.">Optimal conditions for simultaneous purification of mononuclear and polymorphonuclear leucocytes from human peripheral blood by the Ficoll-Hypaque method.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol. Methods</em>. <b>36</b>, 109-109 (1980).</li></ol>

<p> De dichtheid gradiënt scheiding methode wordt gebruikt om de menselijke neutrofielen isoleren van volbloed met een mengsel van natrium-metrizoate en Dextran 500. Deze methode is gebaseerd op de mononucleaire leukocyten scheiding methode Boyum (1968), die was voor neutrofielen scheiding gewijzigd door Ferrante en Thong (1980). </p><p> Na het verzamelen van een donor, kan volledig bloed worden antistolling met EDTA, citraat of heparine. Omdat ze van korte duur, moet neutrofielen worden gebruikt binnen 2-4 uur van de collectie. De procedure b...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Lymphocyte Poly(R)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Cedarlane Labs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PolymorphprepTM can be used as an alternative</td>
</tr>
<tr>
<td>Hank's Balanced Salt Solution without Calcium Chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen Gibco</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human Serum Albumin</td>
<td>Reagent</td>
<td>ZLB Bioplasma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Red Cell Lysis Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortexer</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Pipettes and bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PolymorphprepTM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Axis-Shield PoC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative reagent to Lymphocyte-Poly (R)</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe Filter</td>
<td>Other</td>
<td>Millipore</td>
<td>SLGV033RS</td>
<td>Millex-GV, 0.22 &#181;m, PVDF, 33 mm, gamma-sterilizable</td>
</tr>
<tr>
<td>Hank's Balance Salt Solution with Calcium Chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen Gibco</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

neutrophil isolation protocol

<p class="jove_content">Neutrofiele granulocyten polymorfonucleaire (PMN) zijn de meest voorkomende leukocyten bij mensen en bij de eerste cellen aan te komen op de site van inflammatoire immuunrespons. Vanwege hun belangrijke rol in ontstekingen, zijn neutrofielen functies zoals motoriek, cytokine productie, fagocytose, en de tumorcel te bestrijden uitgebreid bestudeerd. Te bepalen wat de specifieke functies van neutrofielen, een schone, snelle en betrouwbare methode om ze te scheiden van andere bloedcellen is wenselijk voor in-vitro-studies, vooral omdat neutrofielen zijn van korte duur en moet worden gebruikt binnen 2-4 uur van de collectie. Hier tonen we een standaard dichtheidsgradiënt scheidingsmethode voor de menselijke neutrofielen isoleren van volbloed met in de handel verkrijgbaar scheiding media dat is een mengsel van natrium-metrizoate en Dextran 500. De procedure bestaat uit lagen volbloed op de dichtheidsgradiënt medium, centrifugeren, scheiding van neutrofielen laag, en lysis van erytrocyten rest. Cellen worden vervolgens gewassen, geteld, en opnieuw gesuspendeerd in buffer tot de gewenste concentratie. Bij het correct wordt uitgevoerd, is deze methode is aangetoond dat monsters van&gt; 95% neutrofielen met&gt; 95% levensvatbaarheid opbrengst.</p>

Watch this Scientific Journal Video about Neutrophil Isolation Protocol at JoVE.com

Neutrophil Isolation Protocol

<p class="jove_content">Neutrofielen behoren tot de eerste cellen aan te komen op de site van inflammatoire immuunrespons, en hun functies en mechanismen zijn uitgebreid bestudeerd in vitro. Demonstreren we een standaard dichtheidsgradiënt scheidingsmethode voor de menselijke neutrofielen isoleren van volbloed met in de handel verkrijgbaar scheiding media.</p>

Neutrofielen Isolatie Protocol

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

Protocol voor Mosquito Opfok (A. gambiae)

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

A Protocol for the Production of KLRG1 Tetramer

Een protocol voor de productie van KLRG1 tetrameer

Killer cell lectin-like receptor G1 (KLRG1) is a type II transmembrane glycoprotein inhibitory receptor belonging to the C type lectin-like superfamily. ...

DNA-based Fish Species Identification Protocol

DNA-gebaseerde Vissoorten Identification Protocol

We have developed a fast, simple, and accurate DNA-based screening method to identify the fish species present in fresh and processed seafood samples. ...

Protocol for Isolation of Primary Human Hepatocytes and Corresponding Major Populations of Non-parenchymal Liver Cells

Protocol voor isolatie van primaire menselijke hepatocyten en Overeenkomstige Major Populaties van niet-parenchymale Liver Cells

Beside parenchymal hepatocytes, the liver consists of non-parenchymal cells (NPC) namely Kupffer cells (KC), liver endothelial cells (LEC) and hepatic ...

Clock Scan Protocol for Image Analysis: ImageJ Plugins

Clock Scan Protocol voor Image Analysis: ImageJ Plugins

The clock scan protocol for image analysis is an efficient tool to quantify the average pixel intensity within, at the border, and outside (background) a ...

A Simple High Efficiency Protocol for Pancreatic Islet Isolation from Mice

Een eenvoudig hoog rendement protocol voor isolatie van de alvleesklier eiland van muizen

Pancreatic islets, also called the Islets of Langerhans, are a cluster of endocrine cells which produces hormones for glucose regulation and other ...

The MUB<sub>40</sub> Peptide for Use in Detecting Neutrophil-Mediated Inflammation Events

The MUB40 Peptide for Use in Detecting Neutrophil-Mediated Inflammation Events

De MUB<sub>40</sub> Peptide voor gebruik bij de opsporing van ontsteking neutrofiele-gemedieerde gebeurtenissen

Here, we provide a protocol involving the use of MUB40, a synthesized peptide with the ability to bind glycosylated lactoferrin stored at high ...

Rapid Lipid Droplet Isolation Protocol Using a Well-established Organelle Isolation Kit

Snelle lipide Droplet isolatie Protocol met behulp van een gerenommeerd organel isolatie Kit

Lipid droplets (LDs) are bioactive organelles found within the cytosol of the most eukaryotic and some prokaryotic cells. LDs are composed of neutral ...

An Improved Time- and Labor- Efficient Protocol for Mouse Primary Hepatocyte Isolation

Een verbeterd tijd- en arbeidsefficiënt protocol voor primaire hepatocytenisolatie bij muizen

Primary hepatocytes are used extensively in liver in vitro research, especially in glucose metabolism studies. A base technique has been adapted based on ...

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an <em>In Vitro</em> Spontaneous Death Assay

Neutrophil Lifespan Extension with CLON-G and an In Vitro Spontaneous Death Assay

Verlenging van de levensduur van neutrofielen met CLON-G en een <em>in vitro</em> spontane doodstest

The average lifespan of a neutrophil is less than 24 h, which limits basic research on neutrophils and the application of neutrophil studies. Our previous ...