Name: neutrophil isolation protocol
Uploaded: 2008-07-23T22:05:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neutrophil Isolation Protocol at JoVE.com

<p> Financiamento do NIH R01 HL56621. </p>

<p class="jove_title"> Isolamento de neutrófilos Protocolo </p><ol><li> Trazer todos os reagentes à temperatura ambiente. </li><li> Coletar 5,0 ml de meios de isolamento de neutrófilos no tubo de centrifugação. Cuidadosamente camada de 5,0 ml de sangue sobre a mídia separação. Realizar esta etapa lenta e cuidadosamente, e com a ponta da pipeta perto da superfície da mídia para evitar a mistura do sangue e da mídia. </li><li> Centrifugar a 500 RCF por 35 min a 20-25 ° C. O sangue deve separar em 6 bandas distintas: plasma, monócitos...

<ol>
	<li>Boyum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+leucocytes+from+blood+and+bone+marrow.">Separation of leucocytes from blood and bone marrow.</a> <em style='font-style: italic'>Scand. J. Clin. Invest</em>. <b>21</b>, 77-83 (1968).</li><li>England, J. M., Rowan, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+assignment+of+values+to+fresh+blood+used+for+calibrating+automated+blood+cell+counters.">The assignment of values to fresh blood used for calibrating automated blood cell counters.</a> <em style='font-style: italic'>Clin. Lab. Haemat</em>. <b>10</b>, 203-212 (1988).</li><li>Garcia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+two+leukocyte+extraction+methods+for+cytomegalovirus+antigenemia+assay.">Comparison of two leukocyte extraction methods for cytomegalovirus antigenemia assay.</a> <em style='font-style: italic'>J. Clin. Microbiol</em>. <b>34</b>, 182-184 (1996).</li><li>Ferrante, A., Thong, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+conditions+for+simultaneous+purification+of+mononuclear+and+polymorphonuclear+leucocytes+from+human+peripheral+blood+by+the+Ficoll-Hypaque+method.">Optimal conditions for simultaneous purification of mononuclear and polymorphonuclear leucocytes from human peripheral blood by the Ficoll-Hypaque method.</a> <em style='font-style: italic'>J. Immunol. Methods</em>. <b>36</b>, 109-109 (1980).</li></ol>

<p> A densidade método de separação de gradiente é usado para isolar neutrófilos humanos a partir de sangue total utilizando uma mistura de sódio metrizoate e Dextran 500. Este método é baseado no método de separação de leucócitos mononucleares por Boyum (1968) que foi modificado para a separação de neutrófilos por Ferrante e Thong (1980). </p><p> Após a coleta de um doador, o sangue total pode ser anticoagulados com EDTA, citrato ou heparina. Uma vez que eles são de curta duração, os neutrófilos deve ser usado dentro de 2-4...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Lymphocyte Poly(R)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Cedarlane Labs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>PolymorphprepTM can be used as an alternative</td>
</tr>
<tr>
<td>Hank's Balanced Salt Solution without Calcium Chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen Gibco</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Human Serum Albumin</td>
<td>Reagent</td>
<td>ZLB Bioplasma</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Red Cell Lysis Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Diagnostics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Centrifuge</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortexer</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Pipettes and bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PolymorphprepTM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Axis-Shield PoC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative reagent to Lymphocyte-Poly (R)</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe Filter</td>
<td>Other</td>
<td>Millipore</td>
<td>SLGV033RS</td>
<td>Millex-GV, 0.22 &#181;m, PVDF, 33 mm, gamma-sterilizable</td>
</tr>
<tr>
<td>Hank's Balance Salt Solution with Calcium Chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen Gibco</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

neutrophil isolation protocol

<p class="jove_content">Neutrófilos granulócitos polimorfonucleares (PMN) são os leucócitos mais abundantes nos seres humanos e entre as primeiras células a chegar ao local da resposta imune inflamatória. Devido ao seu papel fundamental na inflamação, as funções de neutrófilos, como locomoção, produção de citocinas, fagocitose e combate de células tumorais são amplamente estudados. Para caracterizar as funções específicas de neutrófilos, um método limpo, rápido e confiável de separá-los de outras células sanguíneas é desejável para os estudos in vitro, especialmente desde que os neutrófilos têm vida curta e deve ser usado dentro de 2-4 horas após a coleta. Aqui, nós demonstramos um nível de densidade gradiente método de separação para isolar neutrófilos humanos a partir de sangue total utilizando a mídia separação comercialmente disponível que é uma mistura de sódio metrizoate e Dextran 500. O procedimento consiste de camadas de sangue toda a médio gradiente de densidade, a centrifugação, a separação da camada de neutrófilos, e lise de eritrócitos residual. Células são então lavados, contados, e ressuspenso em tampão de concentração desejada. Quando realizada corretamente, este método tem se mostrado a ceder amostras de neutrófilos&gt; 95% com&gt; viabilidade de 95%.</p>

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Neutrophil Isolation Protocol

<p class="jove_content">Neutrófilos estão entre as primeiras células a chegar ao local da resposta imune inflamatória, e suas funções e mecanismos têm sido estudadas extensivamente in vitro. Demonstramos um nível de densidade gradiente método de separação para isolar neutrófilos humanos do sangue total usando a mídia de separação disponíveis comercialmente.</p>

Isolamento de neutrófilos Protocolo

Neutrophil polymorphonuclear granulocytes (PMN) are the most abundant leukocytes in humans and among the first cells to arrive on the site of inflammatory ...

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