Name: generation of bone marrow derived murine dendritic cells for use in 2-photon imaging
Uploaded: 2008-07-09T16:32:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging at JoVE.com

Institutos Nacionales de Salud Kirchstein beca beca predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41.514 (MDC), GM-48071 (IP)

1) Retire los dos huesos de fémur de un ratón <ol><li> Use las tijeras para cortar la disección muscular y exponer el hueso del fémur por encima y por debajo de las articulaciones (rodilla y cadera). Sujete el centro del fémur con unas pinzas de disección y corte por encima y por debajo de las articulaciones de dejar la mayor cantidad de la epífisis intacto como sea posible. </li><li> Limpie tanto músculo como sea posible con unas tijeras pequeñas disección. Transferencia del fémur en un plato de RPMI. </li>...

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	<li>Miller, M. J., Safrina, O., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+single+cell+dynamics+of+CD4++T+cell+activation+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes.">Imaging the single cell dynamics of CD4+ T cell activation by dendritic cells in lymph nodes.</a> J Exp Med. 200, 847-856 (2004).</li><li>Henrickson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+sensing+of+antigen+dose+governs+interactive+behavior+with+dendritic+cells+and+sets+a+threshold+for+T+cell+activation.">T cell sensing of antigen dose governs interactive behavior with dendritic cells and sets a threshold for T cell activation.</a> Nat Immunol. 9, 282-291 (2008).</li><li>Jefford, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+comparison+of+DCs+generated+in+vivo+with+Flt3+ligand+or+in+vitro+from+blood+monocytes:+differential+regulation+of+function+by+specific+classes+of+physiologic+stimuli.">Functional comparison of DCs generated in vivo with Flt3 ligand or in vitro from blood monocytes: differential regulation of function by specific classes of physiologic stimuli.</a> Blood. 102, 1753-1763 (2003).</li><li>Inaba, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+large+numbers+of+dendritic+cells+from+mouse+bone+marrow+cultures+supplemented+with+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor.">Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor.</a> J Exp Med. 176, 1693-1702 (1992).</li><li>Lutz, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+functions+of+IL-4+receptor+types+I+and+II+for+dendritic+cell+maturation+and+IL-12+production+and+their+dependency+on+GM-CSF.">Differential functions of IL-4 receptor types I and II for dendritic cell maturation and IL-12 production and their dependency on GM-CSF.</a> J Immunol. 169, 3574-3580 (2002).</li><li>Xu, Y., Zhan, Y., Lew, A. M., Naik, S. H., Kershaw, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+development+of+murine+dendritic+cells+by+GM-CSF+versus+Flt3+ligand+has+implications+for+inflammation+and+trafficking.">Differential development of murine dendritic cells by GM-CSF versus Flt3 ligand has implications for inflammation and trafficking.</a> J Immunol. 179, 7577-7584 (2007).</li><li>Inaba, K., Swiggard, W. J., Steinman, R. M., Romani, N., Schuler, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+dendritic+cells.">Isolation of dendritic cells.</a> Curr Protoc Immunol. 3, (2001).</li><li>Winzler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+stages+of+mouse+dendritic+cells+in+growth+factor-dependent+long-term+cultures.">Maturation stages of mouse dendritic cells in growth factor-dependent long-term cultures.</a> J Exp Med. 185, 317-328 (1997).</li><li>Koch, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+necrosis+factor+alpha+maintains+the+viability+of+murine+epidermal+Langerhans+cells+in+culture,+but+in+contrast+to+granulocyte/macrophage+colony-stimulating+factor,+without+inducing+their+functional+maturation.">Tumor necrosis factor alpha maintains the viability of murine epidermal Langerhans cells in culture, but in contrast to granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, without inducing their functional maturation.</a> J Exp Med. 171, 159-171 (1990).</li><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node.">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li><li>Wei, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++signals+in+CD4++T+cells+during+early+contacts+with+antigen-bearing+dendritic+cells+in+lymph+node.">Ca2+ signals in CD4+ T cells during early contacts with antigen-bearing dendritic cells in lymph node.</a> J Immunol. 179, 1586-1594 (2007).</li><li>Castellino, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+enhance+immunity+by+guiding+naive+CD8++T+cells+to+sites+of+CD4++T+cell-dendritic+cell+interaction.">Chemokines enhance immunity by guiding naive CD8+ T cells to sites of CD4+ T cell-dendritic cell interaction.</a> Nature. 440, 890-895 (2006).</li></ol>

Las células dendríticas son los principales mediadores de la respuesta inmune adaptativa y el antígeno de células más eficientes presentar caracterizado hasta la fecha. Métodos para el consumo humano y la cultura del ratón de células dendríticas en la literatura difieren en el tipo de citoquinas para influir en el desarrollo de diferentes tipos de células dendríticas. En particular, el GM-CSF, Flt3L, IL4, IL13, TNF-alfa e IFN-gamma se utilizan en diferentes combinaciones para producir maduro, inmaduro, inflamatoria y de estado es...

generation of bone marrow derived murine dendritic cells for use in 2-photon imaging

Existen varios métodos para la preparación de las células dendríticas murinas se puede encontrar en la literatura. A continuación, presentamos un método que produce más del 85% CD11c células dendríticas de alta en la cultura de que el hogar de los ganglios linfáticos que drenan después de la inyección subcutánea, y presentan el antígeno a las células T antígeno específicas (ver video). Además, utilizamos instrumentos Essen Incucyte para realizar un seguimiento de maduración de células dendríticas, donde, el día 10, la morfología de las células en cultivo es típico de una célula madura dendríticas y &lt;85% de las células son CD11chigh. El estudio de la presentación de antígenos en los ganglios linfáticos periféricos de dos fotones de imagen reveló que hay tres fases distintas de las células dendríticas y la interacción de las células T 1, 2. La Fase I se compone de breves contactos en serie entre las células T antígeno específicas muy móviles y el antígeno de llevar a las células dendríticas 1, 2. La segunda fase está marcada por los contactos prolongados entre los antígenos específicos de células T y células dendríticas antígeno teniendo 1, 2. Por último, la fase III se caracteriza por células T desprenderse de las células dendríticas, la recuperación de la motilidad y comienza a dividir 1, 2. Este es un ejemplo del tipo de antígeno específico de las interacciones que pueden ser analizados por dos fotones de imágenes de antígenos de células cargadas de seguimiento marcado tinte células dendríticas.

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Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

La presentación de antígenos en los órganos linfoides secundarios por las células dendríticas es fundamental para el inicio de la célula T mediada por la respuesta inmune adaptativa. Aquí se demuestra la cultura de la médula ósea procedentes de células dendríticas murinas, la activación, y el etiquetado de dos fotones de imágenes.

Generación de médula ósea procedentes de células murinas dendríticas para su uso en dos fotones de imágenes

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

La disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

Investigación

Biología

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

En imágenes in situ del timo de ratón utilizando 2-Photon Microscopía

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

A Method for 2-Photon Imaging of Blood Flow in the Neocortex through a Cranial Window

Un método para el 2-Photon imágenes del flujo sanguíneo en la neocorteza a través de una ventana craneal

The ability to image the cerebral vasculature (from large vessels to capillaries) and record blood flow dynamics in the intact brain of living rodents is ...

In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice

En Vivo 2-Photon imágenes de calcio en la capa 2 / 3 de los ratones

To understand network dynamics of microcircuits in the neocortex, it is essential to simultaneously record the activity of a large number of neurons .  ...

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

Cultura de células dendríticas mieloides a partir de precursores de médula ósea

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

La preparación de cultivos primarios de células hematopoyéticas de la médula ósea murina por electroporación

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow

Mensajeras de las células hematopoyéticas de la médula ósea

Homing is the phenomenon whereby transplanted hematopoietic cells are able to travel to and engraft or establish residence in the bone marrow.  Various ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

En Vivo Tracking 4-Dimensional de madre hematopoyéticas y células progenitoras en ratones adultos de calota de Médula Ósea

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

Osteoclastos Derivación de médula ósea de ratón

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Expresión de proteínas fluorescentes de fusión en murinas médula ósea células dendríticas y macrófagos

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...