Name: chromatin immunoprecipitation from human embryonic stem cells
Uploaded: 2008-07-22T00:31:00
Duration: 10 min 36 s
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提出作品は、再生医療のためのカリフォルニア工科大学（CIRM）からFSへの助成金（RS1 - 00477から1）でサポートされています

<ol>
	<li>Evans, M. J., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+in+culture+of+pluripotential+cells+from+mouse+embryos.">Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos.</a> Nature. 292, 154-156 (1981).</li><li>Boyer, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycomb+complexes+repress+developmental+regulators+in+murine+embryonic+stem+cells.">Polycomb complexes repress developmental regulators in murine embryonic stem cells.</a> Nature. 441, 349-353 (2006).</li><li>Lee, T. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+developmental+regulators+by+Polycomb+in+human+embryonic+stem+cells.">Control of developmental regulators by Polycomb in human embryonic stem cells.</a> Cell. 125, 301-313 (2006).</li><li>Kornberg, R. D., Lorch, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twenty-five+years+of+the+nucleosome,+fundamental+particle+of+the+eukaryotic+chromosome.">Twenty-five years of the nucleosome, fundamental particle of the eukaryotic chromosome.</a> Cell. 98, 285-294 (1999).</li><li>Guenther, M. G., Jenner, R. G., Chevalier, B., Nakamura, T., Croce, C. M., Canaani, E., Young, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+Hox-specific+roles+for+the+MLL1+methyltransferase.">Global and Hox-specific roles for the MLL1 methyltransferase.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.. 102, 8603-8608 (2005).</li><li>Lee, T. I., Johnstone, S. E., Young, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+immunoprecipitation+and+microarray-based+analysis+of+protein+location.">Chromatin immunoprecipitation and microarray-based analysis of protein location.</a> Nat. Protoc. 1, 729-748 (2006).</li><li>Sanchez-Elsner, T., Gou, D., Kremmer, E., Sauer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noncoding+RNAs+of+trithorax+response+elements+recruit+Drosophila+Ash1+to+Ultrabithorax.">Noncoding RNAs of trithorax response elements recruit Drosophila Ash1 to Ultrabithorax.</a> Science. 311, 1118-1123 (2006).</li></ol>

クロマチン免疫沈降（ChIP）は、細胞の分化に伴うクロマチンベースのプロセスの解剖のための貴重な技術を提供しています。この方法の成功のための前提条件は、良好な抗体と目的の抗原を欠いているコントロールの細胞または組織からクロマチンの可用性です。 DNAマイクロアレイ技術のチップを組み合わせることで、膨大な量の情報が得られる。 ChIPの結果の検証は、セルの開発中に生物学的プロセスの実行で、タンパク質修飾および/またはRNAをタンパク質の動的な関連付けをリンクさせることができる適切なテストシステムの可用性に依存します。

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Poteinase-K</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche</td>
<td>#EO0491</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>RNase-A</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fermentas</td>
<td>#EN0531</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>formaldehyde 37%</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>FX040-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chloroform</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>3150</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethanol </td>
<td>Reagent</td>
<td>Goldshield</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>phenol:chloroform:isoamyl alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15593-031</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SA, fraction V</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>2930</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dubecco's Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>14190</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>HEPES</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>5330</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S271-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDTA</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>4050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100 </td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>9410</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Dodecyl Sulfate</td>
<td>Reagent</td>
<td>J.T Baker</td>
<td>4095-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lithium chloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>5910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris-HCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>9230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NP-40</td>
<td>Reagent</td>
<td>Calbiochem</td>
<td>492015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Deoxycholic acid, sodium salt</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>BP349-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ammonium acetate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Applichem</td>
<td>631-61-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>4840</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>Reagent</td>
<td>EMD</td>
<td>4840</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>dynalbeads, protein A</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>100.02D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>dynalbeads, protein G</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>100.04D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5ml Low Retention Microtubes, Xtreme</td>
<td>Other</td>
<td>Phenix Research Products</td>
<td>MAX-815S</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phase Lock Gel Light, 2.0 ml</td>
<td>Reagent</td>
<td>Eppendorf</td>
<td>955154037</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

chromatin immunoprecipitation from human embryonic stem cells

後生動物の生物の細胞の無数の機能と構造の複雑さは、幹細胞の数が少ないから生じる。自己再生および多能ほぼすべての細胞の1型に分化する幹細胞を可能にする：幹細胞は、2つの基本的な性質によって特徴付けられる。分化した細胞への進行の幹細胞は、活動の確立と細胞型特異的遺伝子発現パターンを維持するため、多能な構造と形態変化と転写因子の階層的活性とシグナル伝達分子、の損失によって特徴付けられる。分子レベルで、細胞の分化は、幹細胞と細胞の分化過程2,3の機能的特徴に貴重な洞察を提供することができるダイナミックなクロマチンの構造や組成の変化とそれらの動的変化の検出を行います。クロマチンは、タンパク質、主にヒストン4セルパッケージ染色体DNAを形成する高度に圧縮されたDNA -タンパク質複合体です。 Stemcellnessと細胞分化は、このようなエピジェネティックな因子、ヒストン変異体、および転写因子2,3,5のような調節タンパク質の特定の配列の存在と相関している。 クロマチン免疫沈降（ChIP）は、RNAの存在、タンパク質、およびクロマチン6,7におけるタンパク質修飾を監視するための貴重な方法を提供する。異なる種類の細胞からクロマチンの比較では、細胞分化時に発生するタンパク質-クロマチン団体のダイナミックな変化を解明することができます。 クロマチン免疫沈降法はin vivoで架橋クロマチンでの精製を含む。分離されたクロマチンは、酵素消化または機械的な力によってより小さな断片に還元される。クロマチンの断片は、タンパク質またはタンパク質とDNAの変化を標的とする特異的抗体を用いて沈殿させる。沈殿したDNAまたはRNAを精製し、PCRやDNAマイクロアレイを用いたアッセイのためのテンプレートとして使用されます。成功したChIPの前提条件は、所望の抗原と標的分子を発現していないコントロール細胞からクロマチンの可用性への高品質な抗体です。 CHIPは蛋白質、蛋白質とRNAの変更、および特定の標的DNAとRNAの存在を相互に関連付け、そして、outreadツールの選択に応じて特定の標的遺伝子で、またはゲノム全体の文脈における標的分子の結合を検出することができます。分化細胞のクロマチン中のタンパク質の分布の比較では、細胞系列に沿って細胞の進行に合わせクロマチン構成の動的変化を解明することができます。

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Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

ESCの分化は、細胞型特異的構造の変化とクロマチンの構成と一致している。これらの変更の検出はstemcellnessと細胞分化を定義するメカニズムが貴重な洞察を提供します。クロマチン免疫沈降（ChIP）は、幹細胞の分化の分子メカニズムを解明する貴重な方法を表します。

ヒト胚性幹細胞からクロマチン免疫沈降

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

ヒト胚性幹（ES）細胞の増殖

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

マウス胚性幹細胞から造血幹細胞の導出

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

免疫手術でヒト胚性幹細胞の導出

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

ヒト胚性幹細胞の文化とメンテナンス

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

染色体分析のためのヒト胚性幹細胞の染色体スプレッドの準備

Although human embryonic stem cells (hESC) have been shown to present a stable diploid karyotype 1, many studies have reported that depending on culture ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

ヒト胚性幹細胞を凍結融解

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

オリゴデンドロサイト前駆体に胚性幹細胞の分化

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

テラトーマ形成により、ヒト胚性幹細胞の運命のマッピング

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells

Chromatin Immunoprecipitation ChIP to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells

ヒト細胞において活性化遺伝子発現のアッセイのダイナミックヒストン修飾のクロマチン免疫沈降（ChIP）

In response to a variety of extracellular ligands, the STAT (signal transducer and activator of transcription) transcription factors are rapidly recruited ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

胚性幹細胞を生体内でクロマチン蛋白質のダイナミクスを測定するアッセイ（FRAP＆FLIP）を光退色

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...