Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

Het werk werd ondersteund door DK065872 (ENB), een Smith Family Foundation Award of Excellence in Biomedical Research (ENB), F31 DA023760 (BMG, ENP) en P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research).

Voorbereiding Voorafgaand aan de Cultuur Let op: ** gliacellen moeten goed worden uitgeplaat op voorhand, zodat ze tijd hebben om te woekeren en bedek de bodem van de gerechten. Voor muizen met atypische of experimentele genetische achtergrond, zorg ervoor om gliale en neuronale culturen wedstrijd in termen van genotype. Let op: ** 1-7 dagen vóór versnijding, bereiden verse neuronale medium en vervang de gliale medium in de gerechten met 2ml. </...

<ol>
	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

De hier beschreven methoden zorgen voor prima resolutie van morfologische en neurochemische kenmerken van centrale dopamine neuronen die anders niet beschikbaar zijn in een systemische of in vivo benadering.

Materialen zijn opgenomen in het protocol tekst.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

De mogelijkheid om primaire celculturen van dopamine neuronen te creëren zorgt voor de studie van de presynaptische kenmerken van dopamine neuronen geïsoleerd van de systemische input van elders in de hersenen. In ons lab, gebruiken we deze neuronen aan dopamine vrijgavekinetiek met behulp van koolstof vezel amperometrie, alsook expressie van dopamine verwante genen en eiwitten met behulp van kwantitatieve PCR en immunocytochemie te beoordelen. In deze video laten we u zien hoe we deze culturen genereren op basis van knaagdieren pasgeborenen. Het proces omvat een aantal stappen, waaronder de beplating van de corticale gliale astrocyten, de conditionering van neuronale cel-cultuur media door de gliale substraat, de ontleding van de middenhersenen bij pasgeborenen, de spijsvertering, extractie en plating van dopamine neuronen en de toevoeging van neurotrofe factoren om zorgen voor overleving van de cel. De applicaties die geschikt zijn voor een dergelijk preparaat onder de elektrofysiologie, immunocytochemie, kwantitatieve PCR, video microscopie (dat wil zeggen, van real-time vesiculaire fusie met de plasmamembraan), levensvatbaarheid van de cellen assays en andere toxicologische schermen.

Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primaire los middenhersenen dopamine celculturen zorgen voor de studie van de presynaptische kenmerken van dopamine neuronen. Ze kunnen worden gebruikt om real-time dopamine-afgifte kinetiek en een eiwitfractie / mRNA niveaus van de regulatoren van dopamine exocytose monitor. Hier tonen we u hoe u deze culturen genereren uit knaagdier pasgeborenen.

Primaire los middenhersenen Dopamine celculturen van knaagdieren pasgeborenen

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Research

JoVE Journal

Biology

ES Cell-derived Neuroepithelial Cell Cultures

ES Cell-afgeleide neuro-epitheliale cel culturen

ES cells have the potential to differentiate into cells from all germ layers, which makes them an attractive tool for the development of new therapies. In ...

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primaire neuronale culturen uit de hersenen van laat stadium Drosophila Poppen

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

De voorbereiding van Neuronale Culturen van Midgastrula Stage Drosophila embryo&#39;s

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

De voorbereiding van gescheiden Mouse Cortical Neuron culturen

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronale celkweken van Aplysia voor High-Resolution Imaging van Groei Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Murine Model for Parkinson's Disease: from 6-OH Dopamine Lesion to Behavioral Test

Muismodel voor de ziekte van Parkinson: van 6-OH Dopamine Laesie naar Behavioral Test

Parkinson's disease (PD) affects at least 6.5 million people worldwide, irrespective of gender, social, ethnic, economic, or geographic boundaries. Key ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Tot vaststelling van primaire Adult Fibroblast Culturen van knaagdieren

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primaire celculturen van Drosophila Gastrula Embryo&#39;s

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Snelle Fibroblast Verwijdering uit High Density menselijke embryonale stamcellen culturen

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...