Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
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Le travail a été soutenu par DK065872 (PEV), un Prix Smith Family Foundation de l&#39;excellence en recherche biomédicale (PEV), F31 DA023760 (BMG, PEV) et P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research).

Préparation de la culture précédente Note: Les cellules gliales ** doit être plaqué à l&#39;avance afin qu&#39;ils aient le temps de proliférer et de couvrir le fond de la vaisselle. Pour les souris avec le fond génétique atypique ou expérimentale, assurez-vous réunir les cultures gliales et neurones en termes de génotype. Note: ** 1-7 jours avant la dissection, préparer fraîches moyennes neuronales et remplacer le milieu gliales dan...

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	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

Les méthodes décrites ici permettent de résolution fine des caractéristiques morphologiques et neurochimiques des neurones dopaminergiques centrales qui sont par ailleurs pas disponible dans une approche systémique ou dans l&#39;approche in vivo.

Les matériaux sont inclus dans le texte du protocole.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

La capacité à créer des cultures de cellules primaires de neurones à dopamine permet l&#39;étude des caractéristiques présynaptique des neurones dopaminergiques dans l&#39;isolement de l&#39;entrée systémique d&#39;ailleurs dans le cerveau. Dans notre laboratoire, nous utilisons ces neurones pour évaluer la cinétique de libération de dopamine en utilisant l&#39;ampérométrie en fibre de carbone, ainsi que les niveaux d&#39;expression des gènes liés dopamine et de protéines en utilisant la PCR quantitative et immunocytochimie. Dans cette vidéo, nous vous montrons comment nous générons ces cultures du nouveau-né contre les rongeurs. Le processus comporte plusieurs étapes, y compris le placage de corticale astrocytes gliales, le conditionnement des milieux de culture cellulaire neuronale par le substrat gliales, la dissection du mésencéphale chez les nouveaux nés, la digestion, l&#39;extraction et le placage des neurones à dopamine et l&#39;ajout de facteurs neurotrophiques pour d&#39;assurer la survie cellulaire. Les applications appropriées pour une telle préparation comprennent l&#39;électrophysiologie, l&#39;immunocytochimie, PCR quantitative, la microscopie vidéo (ie, de la fusion vésiculaire en temps réel avec la membrane plasmique), des dosages de la viabilité cellulaire et d&#39;autres tests de dépistage toxicologique.

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Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primaire dissocié des cultures de cellules dopaminergiques du mésencéphale permettre l&#39;étude des caractéristiques des neurones à dopamine présynaptique. Ils peuvent être utilisés pour surveiller en temps réel des cinétiques de libération de dopamine et de la protéine / ARNm niveaux de régulation de l&#39;exocytose de dopamine. Ici, nous vous montrons comment générer ces cultures du nouveau-né contre les rongeurs.

Primaire Dissocié cultures Mésencéphale dopamine cellulaire du nouveau-né contre les rongeurs

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

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