Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
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Die Arbeit wurde von DK065872 (ENP), eine Smith Family Foundation Award of Excellence in Biomedical Research (ENP), F31 DA023760 (BMG, ENP) und P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research) unterstützt.

Vorbereitung Vor der Kultur Hinweis: ** Gliazellen muss weit im Voraus beschichtet werden, so dass sie Zeit sich zu vermehren und decken den Boden der Küche haben. Bei Mäusen, die mit atypischen oder experimentelle genetische Hintergrund, stellen Sie sicher, Glia-und Nervenzellen Kulturen in Form von Genotyp entsprechen. Hinweis: ** 1-7 Tage vor der Dissektion, bereiten Sie frisches neuronalen Medium und ersetzen Sie die Gliazellen Medium in den...

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	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

Die hier beschriebenen Methoden ermöglichen feine Auflösung von morphologischen und neurochemischen Merkmalen der zentralen Dopamin-Neuronen, die sonst nicht in einen systemischen oder in vivo-Ansatz zur Verfügung.

Die Materialien werden in das Protokoll Text enthalten.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

Die Fähigkeit zur primären Zellkulturen von Dopamin-Neuronen erstellen können für die Untersuchung der präsynaptischen Eigenschaften des Dopamin-Neuronen isoliert von systemischen Eingabe von anderswo im Gehirn. In unserem Labor verwenden wir diese Neuronen zu Dopamin Freisetzungskinetik mit Kohlefaser Amperometrie sowie Expression von Dopamin-Genen und Proteinen mittels quantitativer PCR und Immunzytochemie beurteilen. In diesem Video zeigen wir Ihnen, wie wir diesen Kulturen zu generieren von Nagetier Neugeborenen. Der Prozess umfasst mehrere Schritte, einschließlich der Beschichtung von kortikalen Gliazellen Astrozyten, die Konditionierung der neuronalen Zellkultur-Medien von den Gliazellen Substrat, das Sezieren des Mittelhirns bei Neugeborenen, die Aufschluss, Extraktion und Abscheidung von Dopamin-Neuronen und die Zugabe von neurotrophen Faktoren zu sicherzustellen, das Überleben der Zelle. Die Anwendungen für ein solches Präparat enthalten Elektrophysiologie, Immunzytochemie, quantitative PCR, Video-Mikroskopie (dh in Echtzeit vesikulären Fusion mit der Plasmamembran), die Lebensfähigkeit der Zellen Assays und andere toxikologische Bildschirme.

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Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primäre dissoziiert Mittelhirn Dopamin Zellkulturen erlauben die Untersuchung der präsynaptischen Eigenschaften des Dopamin-Neuronen. Sie können verwendet werden, um Echtzeit-Freisetzung von Dopamin Kinetik und Protein / mRNA-Spiegel von Regulatoren der Dopamin-Exozytose zu überwachen. Hier zeigen wir Ihnen, wie Sie diese Kulturen von Nagetier Neugeborenen zu generieren.

Primäre Dissoziierte Mittelhirn Dopamin Zellkulturen aus Nager Neugeborene

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Research

JoVE Journal

Biology

ES Cell-derived Neuroepithelial Cell Cultures

ES-Zellen abgeleiteten neuroepithelialen Zellkulturen

ES cells have the potential to differentiate into cells from all germ layers, which makes them an attractive tool for the development of new therapies. In ...

Forschung

Biologie

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primäre neuronale Kulturen aus den Gehirnen von Late Stage Drosophila Puppen

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Vorbereitung der neuronalen Kulturen aus Midgastrula Bühne Drosophila Embryonen

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Vorbereitung von dissoziierten Maus kortikale Neuron Kulturen

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronalen Zellkulturen von Aplysia für High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Die Herstellung von primären hämatopoetischen Zellkulturen aus Knochenmark der Maus für die Elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Murine Model for Parkinson's Disease: from 6-OH Dopamine Lesion to Behavioral Test

Mausmodell für Morbus Parkinson: von 6-OH Dopamin Läsion Behavioral-Test

Parkinson's disease (PD) affects at least 6.5 million people worldwide, irrespective of gender, social, ethnic, economic, or geographic boundaries. Key ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Gründung Primary Adult Fibroblastenkulturen von Nagetieren

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primären Zellkulturen aus Drosophila Gastrula Embryonen

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Schnelle Fibroblast Entfernung aus High Density humanen embryonalen Stammzellen Kulturen

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...