Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

O trabalho foi suportado por DK065872 (PEV), uma Smith Award Foundation Família de Excelência em Pesquisa Biomédica (PEV), F31 DA023760 (BMG, PEV) e P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research).

Precedendo a preparação Cultura Nota: ** As células gliais deve ser banhado com bastante antecedência para que eles tenham tempo para proliferar e cobrir o fundo dos pratos. Para camundongos com atípica ou experimental fundo genético, certifique-se para combinar as culturas gliais e neuronais, em termos de genótipo. Nota: ** 1-7 dias antes da dissecação, prepare neuronal médio fresco e substituir o médio glial nos pratos com 2 ml. <...

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	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

Os métodos descritos aqui permitem resolução fina de características morfológicas e neuroquímicas dos neurônios dopaminérgicos centrais que não estão disponíveis de outra forma em uma abordagem sistêmica ou em vivo.

Materiais estão incluídos no texto do protocolo.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

A capacidade de criar culturas de células primárias de neurônios de dopamina permite o estudo das características pré-sináptica dos neurônios de dopamina no isolamento da entrada sistêmica de outras partes do cérebro. Em nosso laboratório, usamos esses neurônios para avaliar a cinética de liberação de dopamina usando amperometria de fibra de carbono, bem como níveis de expressão de genes relacionados a dopamina e proteínas usando PCR quantitativo e imunocitoquímica. Neste vídeo, vamos mostrar como podemos gerar essas culturas de recém-nascidos de roedores. O processo envolve várias etapas, incluindo o revestimento de astrócitos corticais glial, o condicionamento de meios de cultura de células neuronais pelo substrato glial, a dissecção do mesencéfalo em recém-nascidos, a digestão, extração e cultivo de neurônios de dopamina e da adição de fatores neurotróficos para garantir a sobrevivência da célula. As aplicações adequadas para tal preparação incluem eletrofisiologia, imunocitoquímica, PCR quantitativo, a microscopia de vídeo (ou seja, em tempo real de fusão vesicular com a membrana plasmática), ensaios de viabilidade celular e outras telas toxicológicos.

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Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Principal dissociada mesencéfalo culturas de células de dopamina permitir o estudo das características pré-sináptica dos neurônios dopaminérgicos. Eles podem ser usados ​​para monitorar em tempo real a cinética de liberação de dopamina e proteína / mRNA níveis de reguladores de exocitose dopamina. Aqui, nós mostrar-lhe como gerar essas culturas de recém-nascidos de roedores.

Principal Dissociated Midbrain dopamina culturas de células de recém-nascidos de roedores

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Research

JoVE Journal

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