Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

El trabajo fue apoyado por DK065872 (PEV), una familia Smith Premio de la Fundación de Excelencia en Investigación Biomédica (PEV), F31 DA023760 (BMG, PEV) y P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research).

Preparación Antes de la Cultura Nota: las células gliales ** debe ser recubierto con suficiente antelación para que tengan tiempo de proliferar y cubrir el fondo de los platos. Para los ratones con antecedentes genéticos atípicos o experimental, asegúrese de que para que coincida con las culturas gliales y neuronales en términos de genotipo. Nota: ** 1-7 días antes de la disección, preparar el medio neuronal fresco y reemplazar el medio g...

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	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

Los métodos descritos aquí permiten la resolución de multa de características morfológicas y neuroquímicas de las neuronas dopaminérgicas centrales que se que no esta disponible en un enfoque sistémico o en vivo.

Los materiales están incluidos en el texto del protocolo.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

La capacidad de crear cultivos celulares primarios de neuronas de la dopamina permite el estudio de las características pre-sináptica de las neuronas de dopamina en el aislamiento de la entrada general a partir de otras partes del cerebro. En nuestro laboratorio, usamos estas neuronas para evaluar la cinética de liberación de la dopamina con amperometría de fibra de carbono, así como los niveles de expresión de genes relacionados con la dopamina y las proteínas utilizando la PCR cuantitativa y la inmunocitoquímica. En este video, te mostramos cómo generar estas culturas de los recién nacidos de roedores. El proceso consiste en varios pasos, incluyendo el revestimiento de los astrocitos corticales gliales, el condicionamiento de medios de cultivo celular neuronal por el sustrato gliales, la disección del cerebro medio, en los recién nacidos, la digestión, extracción y revestimiento de las neuronas de dopamina y la adición de factores neurotróficos a garantizar la supervivencia celular. Las aplicaciones adecuadas para esta preparación incluye la electrofisiología, la inmunocitoquímica, PCR cuantitativa, la microscopía de vídeo (es decir, de la fusión vesicular en tiempo real con la membrana plasmática), los ensayos de viabilidad celular y otras pantallas toxicológicos.

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Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primaria disociada del cerebro medio de cultivos celulares permiten la dopamina para el estudio de las características pre-sináptica de las neuronas dopaminérgicas. Pueden ser utilizados para monitorear en tiempo real la cinética de la liberación de dopamina y de la proteína / niveles de ARNm de los reguladores de la exocitosis de dopamina. Aquí te mostramos cómo generar estas culturas de los recién nacidos de roedores.

Primaria disociada Mesencéfalo culturas dopamina celulares de roedores recién nacidos

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Research

JoVE Journal

Biology

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Investigación

Biología

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Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

El establecimiento de cultivos primarios de fibroblastos de adultos de los roedores

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Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

La eliminación rápida de fibroblastos de alta densidad Humanos culturas de células madre embrionarias

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