Name: primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates
Uploaded: 2008-11-05T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

Arbetet stöddes av DK065872 (ENP), en Smith Family Foundation Award of Excellence inom biomedicinsk forskning (ENP), F31 DA023760 (BMG, ENP) och P30 NS047243 (Tufts Center for Neuroscience Research).

Förberedelser före Kultur Obs: ** Gliaceller måste klädd i god tid så att de har tid att föröka sig och täcka botten av rätter. För möss med atypiska eller experimentella genetisk bakgrund, se till att matcha gliaceller och nervceller kulturer i termer av genotyp. Obs: ** 1-7 dagar före dissekering, bered nya neuronala medium och ersätta gliaceller mediet i rätter med 2ml. Obs: ** På dagen före...

<ol>
	<li>Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+defective+mesolimbic+dopamine+exocytosis+in+obesity-prone+rats.">Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats.</a> FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).</li><li>Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+dopamine+quantal+size+in+midbrain+and+hippocampal+neurons.">Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons.</a> Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).</li><li>Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+vesicle+transporter+expression+regulates+vesicle+phenotype+and+quantal+size.">Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).</li><li>Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+recording+of+quanta+from+midbrain+dopamine+neurons+and+modulation+of+the+quantal+size.">Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size.</a> The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Presynaptic+mechanisms+that+regulate+quantal+size.">Presynaptic mechanisms that regulate quantal size.</a> Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).</li></ol>

De metoder som beskrivs här tillåter fina upplösning på morfologiska och neurokemiska funktioner i centrala dopaminneuron som annars inte finns tillgängliga i en systemisk eller in vivo-metod.

Material som ingår i protokollet texten.

primary dissociated midbrain dopamine cell cultures from rodent neonates

Möjligheten att skapa primära cellkulturer av dopaminneuron möjliggör studier av presynaptiska egenskaper dopaminneuron isolerat från systemisk input från andra håll i hjärnan. I vårt labb använder vi dessa nervceller att bedöma dopaminfrisättning kinetik med amperometry kolfiber, liksom nivåerna uttryck av dopamin relaterade gener och proteiner med hjälp av kvantitativ PCR och immuncytokemi. I denna video visar vi hur vi skapar dessa kulturer från gnagare nyfödda. I processen ingår flera steg, bland annat plätering av kortikal gliaceller astrocyter, konditionering av neuronala medier cellkulturer av gliaceller substratet, dissektion av mellanhjärnan hos nyfödda, matsmältningen, utvinning och plätering av dopamin neuroner och tillägg av neurotrofa faktorer se cellöverlevnad. Det program lämpade för en sådan beredning inkluderar elektrofysiologi, immuncytokemi, kvantitativ PCR, video mikroskopi (dvs i realtid SVD fusion med plasmamembranet), cell-analyser livskraft och andra toxikologiska skärmar.

Watch this Scientific Journal Video about Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates at JoVE.com

Primary Dissociated Midbrain Dopamine Cell Cultures from Rodent Neonates

Primär dissocierade mitthjärnan dopamin cellkulturer möjliggöra studier av presynaptiska egenskaper dopaminneuron. De kan användas för att övervaka i realtid kinetik dopaminfrisättning och protein / mRNA nivåer av regulatorer av dopamin exocytos. Här visar vi hur du skapar dessa kulturer från gnagare nyfödda.

Primär dissocierade mitthjärnan Dopamin cellkulturer från Gnagare Nyfödda

The ability to create primary cell cultures of dopamine neurons allows for the study of the presynaptic characteristics of dopamine neurons in isolation ...

Research

JoVE Journal

Biology

ES Cell-derived Neuroepithelial Cell Cultures

ES-cellerna neuroepiteliala cellkulturer

ES cells have the potential to differentiate into cells from all germ layers, which makes them an attractive tool for the development of new therapies. In ...

Primary Neuronal Cultures from the Brains of Late Stage Drosophila Pupae

Primär Neuronal kulturer från hjärnan hos sent stadium Drosophila puppor

In this video, we demonstrate the preparation of primary neuronal cultures from the brains of late stage Drosophila pupae. The procedure begins with the ...

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Beredning av dissocierade Mouse kortikala Neuron kulturer

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal cellkulturer från Aplysia för högupplöst avbildning av tillväxt Kottar

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Murine Model for Parkinson's Disease: from 6-OH Dopamine Lesion to Behavioral Test

Murina Modell för Parkinsons sjukdom: från 6-OH Dopamin skada som Behavioral Test

Parkinson's disease (PD) affects at least 6.5 million people worldwide, irrespective of gender, social, ethnic, economic, or geographic boundaries. Key ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Etablera primärkulturer Vuxen Fibroblast från gnagare

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos

Primära cellkulturer från Drosophila Gastrula Embryon

Here we describe a method for preparing and culturing primary cells dissociated from Drosophila gastrula embryos.   In brief, a large amount of staged ...

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Snabb Fibroblast Borttagning med hög densitet mänskliga embryonala stamcellskulturer

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...