Name: in vitro differentiation of mouse embryonic stem (mes) cells using the hanging drop method
Uploaded: 2008-07-23T22:33:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method at JoVE.com

<ol><li> Gelatineren T75 fles met behulp van een 0,1% gelatine-oplossing en incubeer plaat in een 37 ° C, 5% CO <sub>2</sub> weefselkweek incubator &#39;s nachts een dag voor. </li><li> Haal de MES-cellen van broeden, zuig het medium, spoel de ES-cel-cultuur met PBS, toe te voegen 0,05% trypsine oplossing voor laag de bodem van de schaal (2 ml/100mm plaat). </li><li> Incubeer bij 37 ° C gedurende ongeveer een minuut, totdat de cellen afstoten van de plaat. <br /></li><li> Voorzichtig vermaal (pipet op en neer) de getrypsiniseerd cellen vier t...

<ol>
	<li>Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+mouse+embryonic+stem+cells+are+able+to+differentiate+into+cardiomyocytes+expressing+chronotropic+responses+to+adrenergic+and+cholinergic+agents+and+Ca2++channel+blockers.">Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers.</a> <em style='font-style: italic'>Differentiation</em>. <b>48</b>, 173-182 (1991).</li><li>Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+in+cardiac+contractile+sensitivity+to+calcium+during+the+in+vitro+differentiation+of+mouse+embryonic+stem+cells.">Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Biol</em>. <b>126</b>, (1994).</li></ol>

<p> De nadelen van opknoping drop methode zijn als volgt: de vloeistof volume van een druppel is beperkt tot minder dan 50ul te wijten aan het behoud van opknoping druppels op het deksel door oppervlaktespanning, en het is onmogelijk om het medium te veranderen voor opknoping druppels. Observatie van het vormen van EBS in druppels direct met microscopie is ook zeer moeilijk tijdens de teelt. Verder, de opknoping druppel methode bestaat uit twee stappen, kan daarom een ​​reeks stap van de opknoping drop methode lastig. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11965-092</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30070.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Non-Essential Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11140-050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicllin / Streptomycin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Pyruvate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11360-70</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&#x03B2;-mercaptoethanol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>ES-007-E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>leukemia inhibitory factor(LIF)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>LIF2005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well ultralow attachment plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Corning</td>
<td>3474</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

in vitro differentiation of mouse embryonic stem (mes) cells using the hanging drop method

<p class="jove_content">Stamcellen hebben de opmerkelijke potentie uit te groeien tot een groot aantal verschillende celtypen. Wanneer een stamcel deelt, elke nieuwe cel de mogelijkheid om ofwel te blijven een stamcel of worden een ander type cel met een meer gespecialiseerde functie heeft, is deze veelbelovende van de wetenschap vooraanstaande wetenschappers de mogelijkheid van cel-gebaseerde therapieën voor behandeling van de ziekte te onderzoeken. Wanneer cultuur in suspensie zonder antidifferentiation factoren, embryonale stamcellen spontaan differentiëren en vormen drie-dimensionale meercellige aggregaten. Deze cel aggregaten worden genoemd embryoid organen (EB). Opknoping druppel cultuur is een veel gebruikt EB formatie inductie methode. De afgeronde onderkant van opknoping druppel maakt de samenvoeging van de ES-cellen die kunnen zorgen voor MES-cellen een goede omgeving voor het vormen van EBS. Het aantal van de ES-cellen aggregatied in een opknoping druppel kan worden geregeld door het variëren van het aantal cellen in de eerste celsuspensie te worden opgehangen als een druppel uit het deksel van de petrischaal. Met behulp van deze methode kunnen we reproduceerbare vorm homogene EBS vanuit een vooraf bepaald aantal ES-cellen.</p>

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method at JoVE.com

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

<p class="jove_content">Deze video laat zien hoe in vitro differentiatie van muis embryonale stamcellen te voeren om embryoid lichamen met behulp van de opknoping drop methode.</p>

In vitro differentiatie van muis embryonale stamcellen (MES) cellen met behulp van de Opknoping neerzetten

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

Patroonvorming van embryonale stamcellen Met behulp van de Bio Flip Chip

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

In vitro and in vivo Bioluminescence Reporter Gene Imaging of Human Embryonic Stem Cells

In vitro en in vivo bioluminescente reportergen-beeldvorming van menselijke embryonale stamcellen

The discovery of human embryonic stem cells (hESCs) has dramatically increased the tools available to medical scientists interested in regenerative ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

In vitro Labeling van menselijke embryonale stamcellen voor Magnetic Resonance Imaging

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

The Preparation of <em>Drosophila</em> Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

De voorbereiding van<em> Drosophila</em> Embryo&#39;s voor Live-Imaging Met behulp van de Opknoping Drop Protocol

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differentiatie van embryonale stamcellen in de oligodendrocyt Voorlopers

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Efficient Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Motor Neurons

Efficiënte Differentiatie van muis embryonale stamcellen in de motorische neuronen

Direct differentiation of embryonic stem (ES) cells into functional  motor neurons represents a promising resource to study disease mechanisms, to  screen ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generatie van Muizen Afgeleid van geïnduceerde pluripotente stamcellen

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells <em>In vitro</em>

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiatie van pasgeboren muis Skin afgeleide stamcellen in Germ-achtige cellen<em&gt; In vitro</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Profilering Individuele menselijke embryonale stamcellen door kwantitatieve RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...