Name: in vitro differentiation of mouse embryonic stem (mes) cells using the hanging drop method
Uploaded: 2008-07-23T22:33:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method at JoVE.com

<ol><li> Gelatinize T75 kolven med hjälp av en 0,1% gelatin-lösning och inkubera plattan i 37 ° C, 5% CO <sub>2</sub> vävnadsodling inkubator natten en dag innan. </li><li> Ta ut MES celler från inkubera, aspirera mediet, skölj kultur ES-celler med PBS, lägg till 0,05% trypsin lösning att belägga botten av skålen (2 ml/100mm tallrik). </li><li> Inkubera vid 37 ° C i ca 1 minut, tills cellerna avskedandet plattan. <br /></li><li> Försiktigt mal sönder (Pipettera upp och ner) den trypsinized celler fyra till sex gånger för att skin...

<ol>
	<li>Wobus, A. M., Wallukat, G., Hescheler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotent+mouse+embryonic+stem+cells+are+able+to+differentiate+into+cardiomyocytes+expressing+chronotropic+responses+to+adrenergic+and+cholinergic+agents+and+Ca2++channel+blockers.">Pluripotent mouse embryonic stem cells are able to differentiate into cardiomyocytes expressing chronotropic responses to adrenergic and cholinergic agents and Ca2+ channel blockers.</a> <em style='font-style: italic'>Differentiation</em>. <b>48</b>, 173-182 (1991).</li><li>Metzger, J. M., Lin, W. I., Samuelson, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transition+in+cardiac+contractile+sensitivity+to+calcium+during+the+in+vitro+differentiation+of+mouse+embryonic+stem+cells.">Transition in cardiac contractile sensitivity to calcium during the in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>J Cell Biol</em>. <b>126</b>, (1994).</li></ol>

<p> Nackdelarna med hängande släpp-metoden är följande: den flytande volym av en droppe är begränsad till mindre än 50ul grund för att upprätthålla hänger droppar på locket genom ytspänning, och det är omöjligt att ändra medium för hängande droppar. Observation bilda strandsandaler droppar direkt med mikroskopi är också mycket svårt under odlingen. Vidare består droppe metoden i två steg, därför kan ett antal steg i droppe metoden vara besvärande. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11965-092</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hyclone</td>
<td>SH30070.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-Glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Non-Essential Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11140-050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicllin / Streptomycin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium Pyruvate</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11360-70</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&#x03B2;-mercaptoethanol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>ES-007-E</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>leukemia inhibitory factor(LIF)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>LIF2005</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>96-well ultralow attachment plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Corning</td>
<td>3474</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

in vitro differentiation of mouse embryonic stem (mes) cells using the hanging drop method

<p class="jove_content">Stamceller har den anmärkningsvärda potential att utvecklas till många olika celltyper. När en stamcell delar sig har varje ny cell potential att antingen förbli en stamcellstransplantation eller bli en annan typ av cell med en mer specialiserad funktion, är detta lovande vetenskapens ledande forskare att undersöka möjligheten av cellbaserade terapier för behandling av sjukdomen. När kultur i avstängning utan antidifferentiation faktorer, embryonala stamceller skiljer spontant och bildar tredimensionella flercelliga aggregat. Dessa cellaggregat kallas embryoid organ (EB). Droppe kultur är en allmänt använd EB bildandet induktion metod. Den rundade botten droppe tillåter aggregering av ES-celler som kan ge MES celler en god miljö för att bilda EBS. Antalet ES-celler aggregatied i en droppe kan kontrolleras genom att variera antalet celler i den inledande cellsuspension att hängas som en droppe från locket på en petriskål. Med denna metod kan vi reproducerbart bilda homogena EB från ett förutbestämt antal ES-celler.</p>

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method at JoVE.com

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

<p class="jove_content">Denna video visar hur du utföra in vitro-differentiering av mus-embryonala stamceller till embryoid organ med hängande släpp-metoden.</p>

In vitro-differentiering av Mouse embryonala stamceller (MES) celler med hängande släpp-metoden

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Research

JoVE Journal

Biology

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

Mönstring av embryonala stamceller med hjälp av Bio Flip Chip

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

In vitro and in vivo Bioluminescence Reporter Gene Imaging of Human Embryonic Stem Cells

In vitro och in vivo mareld Reporter Gene avbildning av mänskliga embryonala stamcellslinjer

The discovery of human embryonic stem cells (hESCs) has dramatically increased the tools available to medical scientists interested in regenerative ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

In vitro-märkning av mänskliga embryonala stamceller för magnetisk resonanstomografi

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

The Preparation of <em>Drosophila</em> Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

The Preparation of Drosophila Embryos for Live-Imaging Using the Hanging Drop Protocol

Beredningen av<em> Drosophila</em> Embryon för Live-Imaging Använda droppe protokollet

Green fluorescent protein (GFP)-based timelapse live-imaging is a powerful technique for studying the genetic regulation of dynamic processes such as ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolering och Härledning av Mouse Embryonala Germinal celler

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differentiering av embryonala stamceller till Oligodendrocyte Prekursorer

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Efficient Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Motor Neurons

Effektiv Differentiering av embryonala stamceller från mus till Motorneuroner

Direct differentiation of embryonic stem (ES) cells into functional  motor neurons represents a promising resource to study disease mechanisms, to  screen ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

Generering av möss härledda från inducerade pluripotenta stamceller

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells <em>In vitro</em>

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiering av nyfödda mus härledda hudens stamceller i Germ-liknande celler<em&gt; In vitro</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

Profiling Individual Human Embryonic Stem Cells by Quantitative RT-PCR

Profilering individuella mänskliga embryonala stamceller genom kvantitativ RT-PCR

Heterogeneity of stem cell population hampers detailed understanding of stem cell biology, such as their differentiation propensity toward different ...