Name: from mefs to matrigel 3: passaging hescs from matrigel onto matrigel
Uploaded: 2008-06-10T15:33:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel at JoVE.com

<p> Humana estudos de células-tronco embrionárias no laboratório Teitell são suportados por um Instituto da Califórnia de Medicina Regenerativa (CIRM), as sementes conceder RS1-00313. Agradecemos a membros do Centro de Medicina Regenerativa Broad e Investigação em Células Estaminais na Universidade da Califórnia, especialmente Dr. Amander Clark, Dr. Jerome Zack, e membros do Instituto Broad Stem UCLA Facility núcleo celular para o seu apoio de nossos estudos. </p>

<p class="jove_title"> HESCs divisão de Matrigel para Matrigel </p><p class="jove_content"> Normalmente, uma placa de 6 bem-confluentes de hESCs em Matrigel pode ser dividida 01:03 - 01:05 para outra placa Matrigel, com os poços se tornar confluentes novamente 4-5 dias após a divisão. </p><ol><li> CM e placas Matrigel estão preparados como descrito acima antes de se separarem. </li><li> No dia da separação, lavar cada cavidade para dividir com 1 × PBS, pH7.4, adicionar 1 ml de 1mg/ml Dispase (solução diluída de ações 5mg/ml com DME...

<ol>
	<li>Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts+.">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts .</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>282</b>, 1145-1147 (1998).</li><li>Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells+Nature+Biotechnology+19."> Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells Nature Biotechnology 19.</a> <em style='font-style: italic'>Nature Biotechnology</em>. <b>19</b>, 971-974 (2001).</li></ol>

<p> Esta série de três vídeos demonstra como crescer células estaminais embrionárias humanas (hESCs) em fibroblastos de rato células embrionárias (MEF) alimentador (vídeo 1), como passagem para os Matrigel livre de células alimentador de placas (vídeo 2), e como manter a hESCs por passaging em Matrigel alimentação livre de células condições (vídeo 3). Numerosos estudos anteriores mostraram que a manutenção de viabilidade, hESCs indiferenciado requer a cultura em células alimentadoras inativado MEF. No entanto, para muitas exp...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Knockout Serum Replacer (KSR)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>10828-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM/F12</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11330-057</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Non-essential Amino Acids</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11140-050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>GlutaMax </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>35050-061</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>11995-065</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Clontech</td>
<td>631107</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>L-glutamine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>25030-081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BME</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP176-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>bFGF</td>
<td>Reagent</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>233-FB-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase IV</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>17104-019</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase</td>
<td>Reagent</td>
<td>Stem Cell Technologies</td>
<td>17105-041</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin / Streptomycin </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gelatin</td>
<td>Reagent</td>
<td>Chemicon</td>
<td>ES-006-B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Matrigel</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354277</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oct-4 antibody</td>
<td>Reagent</td>
<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
<td>SC-9081</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3</td>
<td>Reagent</td>
<td>R&D Systems</td>
<td>FAB1435P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FITCI-conjugated antirabbit IgG</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc.</td>
<td>715-095-152</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

from mefs to matrigel 3: passaging hescs from matrigel onto matrigel

<p class="jove_content">Este vídeo demonstra como manter o crescimento de células estaminais embrionárias humanas (hESCs) no alimentador livre de células condições e como hESCs contínua passagem de alimentação livre de células condições. Confirmação de CTEh pluripotência cultivadas em alimentador livre de células ao microscópio de imunofluorescência condições também é demonstrada.</p>

Watch this Scientific Journal Video about From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel at JoVE.com

From MEFs to Matrigel 3: Passaging hESCs from Matrigel onto Matrigel

<p class="jove_content">Este vídeo demonstra como manter o crescimento de células estaminais embrionárias humanas (hESCs) no alimentador livre de células condições e como hESCs contínua passagem de alimentação livre de células condições. Confirmação de CTEh pluripotência cultivadas em alimentador livre de células ao microscópio de imunofluorescência condições também é demonstrada. Parte 3 de 3.</p>

De MEFs para Matrigel 3: hESCs Passaging de Matrigel em Matrigel

This video demonstrates how to maintain the growth of human embryonic stem cells (hESCs) in feeder cell-free conditions and how to continuously passage ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

MATIZ Passaging-tronco embrionárias humanas Cell-linhas com Tripsina

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Biologia

Passaging Human Neural Stem Cells

Passaging células-tronco neurais

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs

De MEFs para Matrigel I: hESCs Passaging na Presença de MEFs

This video demonstrates how to grow human embryonic stem cells (hESCs) on mouse embryonic fibroblast (MEF) feeder cells.
...

Generating iPS Cells from MEFS through Forced Expression of Sox-2, Oct-4, c-Myc, and Klf4

Geração de iPS a partir de células MEFS através da expressão forçada de Sox-2, Oct-4, c-Myc e KLF4

Pluripotency can be induced in differentiated murine by viral transduction of Oct4, Sox2, Klf4, and c-Myc (Takahashi and Yamanaka, 2006;  Wernig, et al., ...

From MEFs to Matrigel 2: Splitting hESCs from MEFs onto Matrigel

De MEFs para Matrigel 2: hESCs Divisão de MEFs para Matrigel

This video demonstrates how to grow human embryonic stem cells (hESCs) on mouse embryonic fibroblast (MEF) feeder cells, how to passage hESCs from MEF ...

Cargo Loading onto Kinesin Powered Molecular Shuttles

Embarque de carga para cinesina Produzido Shuttles Molecular

Cells have evolved sophisticated molecular machinery, such as kinesin motor proteins and microtubule filaments, to support active intracellular transport ...

An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis

Uma Introdução ao Lab Worm: de Worms Cultivar a mutagênese

This protocol describes procedures to maintain nematodes in the laboratory and how to mutagenize them using two alternative methods: ethyl methane ...

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells

A Matrigel-Based Assay formação do tubo para avaliar a atividade vasculogênica de células tumorais

Over the past several decades, a tube formation assay using growth factor-reduced Matrigel has been typically employed to demonstrate the angiogenic ...

Efficient Production and Purification of Recombinant Murine Kindlin-3 from Insect Cells for Biophysical Studies

Produção eficiente e Purificação de recombinante murino Kindlin-3 a partir de células de insetos de Estudos biofísicos

Kindlins are essential coactivators, with talin, of the cell surface receptors&#160;integrins and also participate in integrin outside-in signalling, and ...

Generation of Myospheres From hESCs by Epigenetic Reprogramming

Geração de Myospheres De hESCs por epigenética Reprogramação

Generation of a homogeneous and abundant population of skeletal muscle cells from human embryonic stem cells (hESCs) is a requirement for cell-based ...