Name: a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells at JoVE.com

We willen graag Pete Houston en Eugenia Xu bedanken voor hun hulp.

<ol><li> Geïmmobiliseerde cellen voor tijdsverloop epifluorescentie microscopie. Houdt u er rekening mee dat dit protocol alleen zinvol is als de objectieve lenzen van je microscoop onder de microscoop podium. </li><li> Plaats cellen op de gewenste concentratie in vloeibare media op een lange dekglaasje (ongeveer 24x50mm) </li><li> Snijd een agar blok van de gewenste grootte van een synthetische media plaat (deze hebben een lagere autofluorescentie) en plaats over de cellen. Plaats de zijde van de agar blok niet afgehan...

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Dit is een snelle techniek die gistcellen immobiliseert terwijl nog het toestaan ​​groei. We hebben gevolgd gist groei tot tien uur, met de gist het weergeven van wild-type divisie tarieven gedurende het experiment. Merk op dat deze opstelling het objectief te zijn onder de microscoop podium nodig heeft.

a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells

We presenteren hier een eenvoudige, snelle, en uiterst flexibele techniek voor de immobilisatie en visualisatie van groeiende gist cellen door epifluorescentie microscopie. De techniek is ook geschikt voor het visualiseren van statische gist populaties, of tijd cursussen experimenten tot tien uur lang. Mijn microscopie onderzoekt epigenetische overerving bij de stille paring loci in S. cerevisiae. Er zijn twee stille paring loci, HML en HMR, die normaal niet worden weergegeven als ze zijn verpakt in heterochromatine. In de sir1 mutant achtergrond zwijgen op te leggen is verzwakt zodanig dat elke locus of kan worden in de uitdrukkelijke of zwijgen epigenetische toestand, dus in de bevolking als geheel is een mix van cellen van verschillende epigenetische staten voor zowel HML en HMR. Mijn microscopie toonde aan dat er geen verband tussen de epigenetische toestand van HML en HMR in een individuele cel. sir1 cellen stochastisch switch epigenetische staten, tot oprichting van zwijgen op een eerder uitgesproken locus of het uiten van een eerder zwijgen locus. Mijn tijd uiteraard microscopie gevolgd individuele sir1 cellen en hun nakomelingen om de frequentie van elk van de vier mogelijke epigenetische schakelaars, en daarmee de stabiliteit van elk van de epigenetische staten in sir1 cellen score. Zie ook Xu et al.., Mol. Cel 2006.

Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells at JoVE.com

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Een snelle techniek voor de visualisatie van de groeiende geïmmobiliseerde gistcellen, hier toegepast op de TL-verslaggevers bij de stille paring loci HML en HMR

Een snelle techniek voor de visualisatie van Live Geïmmobiliseerd gistcellen

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Research

JoVE Journal

Biology

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kwantitatieve Live Cell Fluorescentie-microscopie analyse van Fission Yeast

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Visualisatie van endoplasmatisch reticulum gelokaliseerd mRNA&#39;s in zoogdiercellen

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

De Tomaat / GFP-FLP / FRT Methode voor Live Imaging van Mozaïek Adult<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotoreceptorcellen

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detectie van Levende<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7 cellen door PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualisatie van G3BP Stress Korrels Dynamics Live primaire cellen

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Onderzoeken eiwit-eiwit interacties in levende cellen met behulp van bioluminescentie resonantie energieoverbrenging

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

Eiwitzuivering Techniek dat Detectie van sumoylation en Ubiquitinering van Budding gist kinetochoor Eiwitten Ndc10 en Ndc80 Maakt

Post-translational Modifications (PTMs), such as phosphorylation, methylation, acetylation, ubiquitination, and sumoylation, regulate the cellular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxische substantie Micro-injectie in zebravis tot acuut nierfalen Model

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Met behulp van microfluïdische apparaten te meten Levensduur en Cellulaire Phenotypes in Single Budding gistcellen

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

In Situ Monitoring of Transiently Formed Molecular Chaperone Assemblies in Bacteria, Yeast, and Human Cells

In situ monitoring van transitieve gevormde moleculaire Chaperone-assemblages in bacteriën, gist en menselijke cellen

J-domain proteins (JDPs) form the largest and the most diverse co-chaperone family in eukaryotic cells. Recent findings show that specific members of the ...