Name: a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00
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Gostaríamos de agradecer a Pete Houston e Eugenia Xu por toda sua ajuda.

<ol><li> Células imobilizadas por tempo microscopia de epifluorescência curso. Por favor note que este protocolo só é útil se as lentes objetiva de seu microscópio são abaixo do estágio do microscópio. </li><li> Células lugar na concentração desejada em meio líquido em uma lamela de comprimento (cerca de 24x50mm) </li><li> Cortar um bloco de agar do tamanho desejado de uma placa de material sintético (estes têm menor autofluorescência) e coloque sobre as células. Coloque o lado do bloco de agar não trat...

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Esta é uma técnica rápida que imobiliza as células de levedura, enquanto ainda permitindo o crescimento. Temos acompanhado o crescimento do fermento para até 10 horas, com o fermento exibindo taxas de divisão de tipo selvagem durante todo o experimento. Note que esta configuração requer a lente objetiva para ser abaixo do estágio do microscópio.

a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells

Apresentamos aqui uma técnica simples, rápida e extremamente flexível para a imobilização e visualização de células de levedura crescendo por microscopia de epifluorescência. A técnica é igualmente adequado para visualização de populações de leveduras estática, ou cursos de experimentos de tempo de até 10 horas de duração. Meu microscopia investiga herança epigenética no loci acasalamento silêncio em S. cerevisiae. Há dois loci de acasalamento em silêncio, HML e HMR, que não são normalmente expressos como eles são embalados em heterocromatina. No silenciamento de fundo sir1 mutante está enfraquecido de tal forma que cada locus pode estar no estado expressa ou silenciados epigenético, por isso, a população como um todo há uma mistura de células de diferentes estados epigenética para ambos HML e HMR. Meu microscopia demonstrou que não há relação entre o estado epigenético da HML e HMR em uma cela individual. sir1 células estocasticamente interruptor estados epigenética, o estabelecimento de silenciamento em um locus previamente expressos ou expressar um locus previamente silenciados. Meu microscopia curso de tempo monitorados individuais sir1 células e seus descendentes para marcar a freqüência de cada um dos quatro possíveis interruptores epigenética e, portanto, a estabilidade de cada um dos estados epigenéticas em células sir1. Veja também Xu et al. Mol. Celular 2006.

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A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Uma técnica rápida para a visualização do crescimento de células de levedura imobilizadas, aqui aplicado a repórteres fluorescentes no silêncio de acasalamento loci HML e HMR

Uma técnica rápida para a visualização de células vivas de levedura Imobilizado

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Research

JoVE Journal

Biology

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Quantitativas de células vivas de Análise de microscopia de fluorescência de levedura

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Biologia

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The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

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Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detecção de Vivo<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7 Células por PMA-qPCR

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Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualização de G3BP Estresse grânulos Dynamics em pilhas ao vivo

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Técnica de purificação de proteína que permite a detecção de SUMOilação e Ubiquitination de brotamento Yeast kinetochore Proteínas Ndc10 e Ndc80

Post-translational Modifications (PTMs), such as phosphorylation, methylation, acetylation, ubiquitination, and sumoylation, regulate the cellular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxina microinjeção no peixe-zebra ao modelo de lesão renal aguda

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Usando dispositivos microfluídicos medir Longevidade e Celular fenótipos em células individuais levedura de brotamento

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

In Situ Monitoring of Transiently Formed Molecular Chaperone Assemblies in Bacteria, Yeast, and Human Cells

Monitoração in situ de montagens moleculars formadas Transientemente do chaperone nas bactérias, no fermento, e nas pilhas humanas

J-domain proteins (JDPs) form the largest and the most diverse co-chaperone family in eukaryotic cells. Recent findings show that specific members of the ...