Name: a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells at JoVE.com

Vi vill tacka Pete Houston och Eugenia Xu för all hjälp.

<ol><li> Immobiliserade celler för tidsförloppet epifluorescence mikroskopi. Observera att detta protokoll är bara användbar om syftet linserna på din mikroskop är under mikroskop scenen. </li><li> Placera celler vid önskad koncentration i flytande medier på en lång täckglas (ungefär 24x50mm) </li><li> Skär en agar-block av önskad storlek från ett syntetiskt media platta (dessa har lägre autofluorescens) och placera över cellerna. Placera sidan av agar blockerar inte hanteras av pincett i kontakt med cell...

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Detta är en snabb teknik som immobilizes jästceller samtidigt tillåta tillväxt. Vi har följt jäst tillväxt för upp till tio timmar, med jästen som visar vilda priser typ divisionen under hela försöksperioden. Observera att denna inställning kräver att objektivet ligga under mikroskop scenen.

a rapid technique for the visualization of live immobilized yeast cells

Vi presenterar här en enkel, snabb och extremt flexibel teknik för immobilisering och visualisering av växande jästceller av epifluorescence mikroskopi. Tekniken passar lika bra för visualisering av statisk jäst populationer eller tidsförlopp experiment upp till tio timmar långa. Min mikroskopi undersöker epigenetiska arv vid den tysta parning loci i S. cerevisiae. Det finns två tysta parning loci, HML och HMR, som normalt inte uttrycks som de är förpackade i heterochromatin. I sir1 muterade bakgrunden ljuddämpning är försvagad så att varje lokus antingen kan vara i uttrycks eller tystade epigenetiska tillstånd, så i befolkningen som helhet finns en blandning av celler av olika epigenetiska stater för både HML och HMR. Min mikroskopi visade att det inte finns något samband mellan den epigenetiska tillstånd HML och HMR i en enskild cell. sir1 celler växla stokastiskt epigenetiska tillstånd, inrättande tysta vid ett tidigare uttryckt locus eller uttrycker en tidigare tystade lokus. Min tid naturligtvis mikroskopi spåras enskilda sir1 celler och deras avkomma att göra poäng frekvensen i varje av de fyra möjliga epigenetiska strömbrytare, och därmed stabiliteten i varje epigenetiska stater i sir1 celler. Se även Xu et al. Mol. Cell 2006.

Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells at JoVE.com

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

En snabb teknik för visualisering av växande immobiliserade jästceller, här gäller för fluorescerande reportrar på den tysta parning lokus HML och HMR

En snabb teknik för visualisering av Live Immobiliserade jästceller

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Research

JoVE Journal

Biology

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Kvantitativa levande celler fluorescens-mikroskopi Analys av fissionsjäst

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Visualization of Endoplasmic Reticulum Localized mRNAs in Mammalian Cells

Visualisering av endoplasmatiska nätverket Lokaliserade mRNA i däggdjursceller

In eukaryotes, most of the messenger RNAs (mRNAs) that encode secreted and membrane proteins are localized to the surface of the endoplasmic reticulum ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Den Tomat / GFP-FLP / FRT Metod för Live avbildning av Mosaic vuxen<em&gt; Drosophila</em&gt; ljusmätare celler

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

Upptäckt av Live<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7 celler genom PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Visualization of G3BP Stress Granules Dynamics in Live Primary Cells

Visualisering av G3BP Stress Granulat Dynamics i Live Primärceller

SGs can be visualized in cells by immunostaining of specific protein components or polyA+ mRNAs. SGs are highly dynamic and the study of their assembly ...

Investigating Protein-protein Interactions in Live Cells Using Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Undersökning av protein-proteininteraktioner i levande celler med hjälp Bioluminescence Resonance Energy Transfer

Assays based on Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) provide a sensitive and reliable means to monitor protein-protein interactions in live ...

Protein Purification Technique that Allows Detection of Sumoylation and Ubiquitination of Budding Yeast Kinetochore Proteins Ndc10 and Ndc80

Protein reningsteknik som möjliggör detektion av Sumoylation och ubikvitinering av knoppande jäst kinetochore Proteiner Ndc10 och Ndc80

Post-translational Modifications (PTMs), such as phosphorylation, methylation, acetylation, ubiquitination, and sumoylation, regulate the cellular ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxin mikroinjektion i Zebrafish till Model akut njursvikt

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Använda mikroflödessystem enheter för att mäta livslängd och Cellular fenotyper i Single Budding jästceller

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...

In Situ Monitoring of Transiently Formed Molecular Chaperone Assemblies in Bacteria, Yeast, and Human Cells

In situ övervakning av transitivt bildade molekylär Chaperone församlingar i bakterier, jäst, och mänskliga celler

J-domain proteins (JDPs) form the largest and the most diverse co-chaperone family in eukaryotic cells. Recent findings show that specific members of the ...