Name: human es cells: starting culture from frozen cells
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells at JoVE.com

Ontdooi een bevroren voorraad: <ol><li> Voordat ontdooien TINTEN cellen, ervoor zorgen dat de MEF plaat die je al hebt voorbereid correct is verguld en in goede conditie. Probeer NIET een minder dan wenselijk plaat, of een die ouder is dan drie dagen te gebruiken. Het wordt aanbevolen om pre-label alle conische buizen en putten worden gebruikt. </li><li> Pre-warme tinten media tot 37 ° C. Aliquot TINTEN media in een steriele conisch...

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

In deze video laten we zien hoe ons laboratorium routinematig een TINTEN menselijke embryonale stamcellen cultuur voorziet van een bevroren voorraad. Dit proces is vatbaar voor algemeen gebruik met een zoogdiercellen als bevroren in een DMSO oplossing. Efficiënte ontdooien is essentieel voor de oprichting van een nieuwe cultuur van tinten cellen van een ingevroren voorraad, en is belangrijk voor experimentele consistentie.

TINTEN media 651,5 ml KO-DMEM 500 ml Penstrep 6,5 ml glutamine 6,5 ml NEAA 6,5 ml beta-mercapto-ethanol 0.5ul KO Serum Vervanging 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / mL definitief) 0,65 ml

human es cells: starting culture from frozen cells

Hier laten we zien hoe onze lab een TINTEN menselijke embryonale stamcellen lijn cultuur begint met een bevroren voorraad. Ten eerste is een tot twee dagen oud tien cm plaat van ongeveer een (tot twee) miljoen bestraald muis embryonale fibroblasten feeder-cellen gespoeld met tinten media om resterende serum en cellen vuil te verwijderen, en vervolgens TINTEN media toegevoegd en links naar evenwicht in de cel cultuur incubator. Een bevroren flacon van cellen van lange termijn opslag van vloeibare stikstof of een-80C vriezer is afkomstig en snel ondergedompeld in een 37C waterbad voor snel ontdooien. Cellen in de vrieskou media worden vervolgens verwijderd uit de flacon en geplaatst in een groot volume van tinten media. Het grote volume van kleuren media vergemakkelijkt het verwijderen van overtollige serum en DMSO, wat kan leiden tot TINTEN menselijke embryonale stamcellen om te differentiëren. Cellen zijn zacht gesponnen uit de vering, en vervolgens opnieuw gesuspendeerd in een klein volume van verse TINTEN media die vervolgens wordt gebruikt om het zaad van de MEF plaat. Het wordt belangrijk geacht om het zaad van de MEF plaat door voorzichtig toe te voegen de tinten cellen in een druppelsgewijs manier om gelijkmatig te verspreiden in de hele plaat. De onlangs opgerichte TINTEN cultuur plaat terug naar de incubator voor 48 uur voor de media wordt vervangen, wordt vervolgens elke 24 uur daarna.

Watch this Scientific Journal Video about Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells at JoVE.com

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Hier laten we zien hoe onze lab een TINTEN menselijke embryonale stamcellen lijn cultuur begint met een bevroren voorraad.

Menselijke ES-cellen: Vanaf Cultuur van bevroren cellen

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Freezing Human ES Cells

Invriezen menselijke embryonale stamcellen

Here we demonstrate how our lab freezes HuES human embryonic stem cell lines.  A healthy, exponentially expanding culture is washed with PBS to remove ...

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Cultuur en onderhoud van menselijke embryonale stamcellen

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolatie en Cultuur van Volwassen epitheliale stamcellen uit menselijke huid

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Cultuur van primaire menselijke eileider epitheelcellen

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Inductie en analyse van epitheliale naar mesenchymale transitie

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolatie en Cultuur van Dental epitheliale stamcellen van de volwassen muis Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Efficiënte Generation humane geïnduceerde pluripotente stamcellen uit menselijke somatische cellen met Sendai-virus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generatie en cultuur van Blood uitgroei endotheelcellen van de humane perifere bloed

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...