Name: human es cells: starting culture from frozen cells
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells at JoVE.com

Tina från en frusen lager: <ol><li> Före upptining nyanser celler, se till att MEF plattan du redan har förberett ordentligt klädd och i gott skick. Försök INTE att använda en mindre än önskvärt platta, eller en som är äldre än tre dagar. Det rekommenderas att i förväg märka alla koniska rör och brunnar som används. </li><li> Pre-varma nyanser media till 37 ° C. Alikvotera nyanser media i en steril koniska rör fö...

<ol>
	<li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts.">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li></ol>

I denna video visar vi hur vårt laboratorium rutinmässigt fastställer en nyanser mänskliga embryonala kultur stamcell från ett fruset lager. Denna process är mottaglig för allmänt bruk med alla däggdjursceller om de är frysta i ett DMSO lösning. Effektiv tina är avgörande för att skapa en ny kultur av nyanser celler från en frusen lager, och är viktig för experimentell konsekvens.

Nyanser medier 651,5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6,5 ml Glutamin 6,5 ml NEAA 6,5 ml beta-merkaptoetanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng / ml slutlig) 0,65 ml

human es cells: starting culture from frozen cells

Här kan vi visa hur vårt labb börjar en nyanser stamceller från mänskliga embryon kulturen cellinje från en frusen lager. För det första är ett till två dygn gamla tio cm tallrik med cirka en (eller två) miljoner bestrålade möss embryonala fibroblast feeder celler sköljas med nyanser media för att avlägsna rester av serum och cellfragment och sedan nyanser media tillkommit och vänster till jämvikt i cellen kultur inkubator. En frusen injektionsflaska med celler från långsiktig flytande kväve lagring eller en-80C frys anskaffas och snabbt nedsänkt i en 37C vattenbad för snabb upptining. Celler i frysning media sedan bort från flaskan och placeras i en stor mängd nyanser medier. Den stora volymen av nyanser medier underlättar borttagning av överskott serum och DMSO, vilket kan orsaka nyanser mänskliga embryonala stamceller att differentiera. Celler är försiktigt spunna ur sin vila, och sedan suspenderas i en liten volym av färska nyanser media som sedan används till utsäde MEF plattan. Det anses viktigt att utsädet MEF plattan genom att försiktigt lägga till nyanser celler i ett droppvis sätt för att jämnt sprida ut dem över hela plattan. Det nybildade nyanser odlingsplatta återförs till inkubator för 48 timmar före media ersätts, matas sedan varje 24 timmar därefter.

Watch this Scientific Journal Video about Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells at JoVE.com

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

Här kan vi visa hur vårt labb börjar en nyanser stamceller från mänskliga embryon kulturen cellinje från en frusen lager.

Mänskliga ES-celler: Starta Kultur från frusna celler

Here we demonstrate how our lab begins a HuES human embryonic stem cell line culture from a frozen stock.  First, a one to two day old ten cm plate of  ...

Research

JoVE Journal

Biology

Freezing Human ES Cells

Frysning Mänskliga ES-celler

Here we demonstrate how our lab freezes HuES human embryonic stem cell lines.  A healthy, exponentially expanding culture is washed with PBS to remove ...

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Spridning av mänskliga embryonala stamceller (ES-celler)

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Kromatin Immunoprecipitation från mänskliga embryonala stamcellslinjer

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Kultur och underhåll av mänskliga embryonala stamcellslinjer

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolering och odling av vuxna Epithelial stamceller från mänskliga Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Ex vivo Kultur av primära humana äggledaren epitelceller

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion och Analys av Epithelial till mesenkymala övergång

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolering och kultur av Dental epitelceller stamceller från vuxen mus Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

Effektiv Generation Human inducerade pluripotenta stamceller från mänskliga somatiska celler med Sendai-virus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Generation and Culture of Blood Outgrowth Endothelial Cells from Human Peripheral Blood

Generation och kultur of Blood utväxt endotelceller från humant perifert blod

Historically, the limited availability of primary endothelial cells from patients with vascular disorders has hindered the study of the molecular ...