Name: double whole mount in situ hybridization of early chick embryos
Uploaded: 2008-10-27T00:00:00
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यह काम मार्गरेट एम. Alkek RHF फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया.

भाग 1: भ्रूण फिक्सिंग <ol><li> बर्फ depc पीबीएस ठंड के साथ विच्छेदन पकवान भरें. बर्फ पर रखें. संदंश के साथ खोल दोहन द्वारा अंडे खोलें और खोल के टुकड़े को हटाने. </li><li> संदंश के साथ albumin मोटी निकालें. मोटे संदंश क?...

<ol>
	<li>Streit, A., Berliner, A. J., Papanayotou, C., Sirulnik, A., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+neural+induction+by+FGF+signaling+before+gastrulation.">Initiation of neural induction by FGF signaling before gastrulation.</a> Nature. 406, 74-78 (2000).</li><li>Rodr&#237;guez Esteban, C., Capdevila, J., Economides, A. N., Pascual, J., Ortiz, A., Izpis&#250;a Belmonte, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+novel+Cer-like+protein+Caronte+mediates+the+establishment+of+embryonic+left-right+asymmetry.">The novel Cer-like protein Caronte mediates the establishment of embryonic left-right asymmetry.</a> Nature. 401, 243-251 (1999).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li><li>Kawakami, M., Nakanishi, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+an+endogenous+PKA+inhibitor,+PKIalpha,+in+organizing+left-right+axis+formation.">The role of an endogenous PKA inhibitor, PKIalpha, in organizing left-right axis formation.</a> Development. 128, 2509-2515 (2001).</li><li>Basch, M. L., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+the+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7.">Specification of the neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li></ol>

2 रंग में पूरे माउंट स्वस्थानी संकरण विधि जीन अभिव्यक्ति की दोनों स्थानिक और लौकिक पैटर्न को निर्धारित करने के लिए, ब्याज की एक या दो जीनों का उपयोग करने के लिए प्रयोग किया जाता है. आवेदन जीन उपन्यास जीन की अभिव?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>Animal</td>
<td>Charles River </td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hybridization Incubator</td>
<td>Tool</td>
<td>Hybaid</td>
<td>Micro-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Adams Nutator orbital mixer</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-062</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Spoon</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10370-18</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microcapillary tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1049-1PAK</td>
<td>Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to puncture cavities prior to in situ hybridization</td>
</tr>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20</td>
<td>Keep pins together using a magnetic stirrer;</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>Diethylpyrocarbonate (depc)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>10025025</td>
<td>Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave</td>
</tr>
<tr>
<td>16% PFA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tween-20</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P1379-100ML</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Proteinase K</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>P2308-5MG</td>
<td>Stock at 10 mg/ml in depc-H2O in 10ul aliquots. Store at -20C.</td>
</tr>
<tr>
<td>Formamide, deionized</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ambion</td>
<td>9342</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Yeast tRNA-25 mg</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15401-011</td>
<td>Stock at 20 mg/ml in depc-H2O in 125ul aliquots. Store at -20C</td>
</tr>
<tr>
<td>Heparin Sodium salt</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784-250MG</td>
<td>Stock at 50 mg/ml in depc-H2O in 100ul aliquots. Store at -20C.</td>
</tr>
<tr>
<td>SSC x20 pH5.5</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>PR-V4261</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDTA (0.5M)</td>
<td>PR-V4231</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SDS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP166-100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Maleic acid</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fluka</td>
<td>63189</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Boehringer Blocking Reagent</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Applied Sciences</td>
<td>11096176001</td>
<td>Use at 2% in MABT. To make, heat with MABT for 20 mn at 60C. Can make a stock and store in 1-5 ml aliquots at 20C.</td>
</tr>
<tr>
<td>Heat inactivated sheep serum</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>013-000-121</td>
<td>Dissolve in 10 ml H2O; heat 550C, 30 mn. Aliquot at 1ml, -20C.</td>
</tr>
<tr>
<td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Applied Sciences</td>
<td>11093274910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NBT/BCIP stock solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Applied Sciences</td>
<td>11681451001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anti-Fluorescein-AP, Fab fragments</td>
<td>Reagent</td>
<td>Roche Applied Sciences</td>
<td>11426338910</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2M Tris</td>
<td>BP1759-500</td>
<td>Fisher</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vector Red Alkaline Phosphatase Substrate Kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>SK-5100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1,2,3,4-tetrahydronaphthalene</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>429325-100ML</td>
<td>Under hood</td>
</tr>		
</tbody>
</table>
</div>

double whole mount in situ hybridization of early chick embryos

लड़की भ्रूण जल्दी भ्रूण के विकास के अध्ययन में एक महत्वपूर्ण उपकरण है. इसकी पारदर्शिता, पहुंच, और हेरफेर की आसानी, यह मस्तिष्क, न्यूरल ट्यूब, somite और दिल primordia गठन में जीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श उपकरण बनाते हैं. इस वीडियो स्वस्थानी संकरण में 2 रंग पूरे माउंट में विभिन्न चरणों को दर्शाता है, पहला, भ्रूण अंडे से dissected है और paraformaldehyde में तय है. दूसरा, भ्रूण prehybridization के लिए कार्रवाई की है. भ्रूण तो दो अलग अलग जांच, डीआईजी युग्मित, और एक FITC के लिए युग्मित के साथ संकरित है. रातोंरात संकरण के बाद, भ्रूण डीआईजी युग्मित एंटीबॉडी के साथ incubated है. डीआईजी सब्सट्रेट के लिए रंग की प्रतिक्रिया का प्रदर्शन किया, और ब्याज के क्षेत्र नीले प्रकट होता है. भ्रूण तो FITC एंटीबॉडी के साथ मिलकर incubated है. भ्रूण FITC के साथ रंग की प्रतिक्रिया के लिए कार्रवाई की है, और ब्याज के क्षेत्र लाल प्रकट होता है. अंत में, भ्रूण तय है और संसाधित और phtograph लिए सेक्शनिंग. समस्या निवारण मार्गनिर्देशिका भी प्रस्तुत किया है.

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Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

यह वीडियो स्वस्थानी संकरण, एक विधि है जिसके द्वारा स्थानिक और लौकिक 2 अलग जीन की अभिव्यक्ति पैटर्न युवा लड़की भ्रूण में visualized किया जा सकता में 2 रंग पूरे माउंट दर्शाता है. इस पद्धति का मूल दाऊद Wilkinson, डोमिंगोस हेनरिक, फिल Ingham और ईशबोशेत Horowicz डेविड द्वारा पेश किया गया था.

प्रारंभिक चिकी भ्रूण के स्वस्थानी संकरण में डबल पूरा पर्वत

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

प्रारंभिक चिकी भ्रूण पूर्व vivo (नई संस्कृति) की संस्कृति के लिए विधि

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

चिकी में पूरे माउंट एंटीबॉडी धुंधला के लिए विधि

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

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Zebrafish पूरा पर्वत उच्च संकल्प डबल प्रतिदीप्त स्वस्थानी में संकरण

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

चिकी भ्रूण में एकल सेल अभिकर्मक

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

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पूरे पर्वत का उपयोग बगल में आण्विक और organismal जीवविज्ञान लिंक संकरण

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

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पूरे माउंट<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; E8.5 E11.5 माउस भ्रूण संकरण

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Tracking Morphogenetic Tissue Deformations in the Early Chick Embryo

प्रारंभिक चिकी भ्रूण में Morphogenetic ऊतक विरुपणों ट्रैकिंग

Embryonic epithelia undergo complex deformations (e.g. bending, twisting, folding, and stretching) to form the primitive organs of the early embryo. ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

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पूरे माउंट आरएनए प्रतिदीप्त<em&gt; स्वस्थानी में</em&gt; संकरण<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; भ्रूण

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

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आरएनए<em&gt; सीटू में</em&gt; पूरे माउंट भ्रूण और सेल हिस्टोलॉजि में संकरण समुद्री Elasmobranchs के लिए अनुकूलित

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

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प्रतिदीप्ति का प्रयोग mRNA अणुओं के दृश्य और विश्लेषण<em&gt; स्वस्थानी</emमें&gt; संकरण<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...