Name: using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro
Uploaded: 2008-09-11T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro at JoVE.com

अनुसंधान NIH EY012031 अनुदान और EY0182175 और एफएम Kirby फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया.

संस्कृति में अलग कक्षों को जोड़ तोड़ के लिए ऑप्टिकल चिमटी ऑप्टिकल चिमटी के फँसाने बलों प्रकाश की गति (; Ashkin एट अल, 1986 Ashkin, 1991) से उत्पन्न कर रहे हैं. हालांकि इन बलों को आसानी से जाल निलंबन में कोशिक?...

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	<li>Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+a+Single-Beam+Gradient+Force+Optical+Trap+for+Dielectric+Particles.">Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles.</a> Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).</li><li>Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+cells+have+different+target+preferences+in+vitro+as+revealed+by+optical+tweezers.">Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers.</a> Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).</li><li>Folkman, J., Moscona, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cell+shape+in+growth+control.">Role of cell shape in growth control.</a> Nature. 273, 345-349 (1978).</li><li>Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+localized+cell+heating+induced+by+infrared+optical+tweezers.">Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers.</a> Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).</li><li>MacLeish, P. R., Barnstable, C. J., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro.">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, 7014-7018 (1983).</li><li>MacLeish, P. R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+synapse+formation+among+major+classes+of+adult+salamander+retinal+neurons+in+vitro.">Growth and synapse formation among major classes of adult salamander retinal neurons in vitro.</a> Neuron. 1, 751-760 (1988).</li><li>Mandell, J. W., MacLeish, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Townes-Anderson+E.+Process+outgrowth+and+synaptic+varicosity+formation+by+adult+photoreceptors+in+vitro.">Townes-Anderson E. Process outgrowth and synaptic varicosity formation by adult photoreceptors in vitro.</a> J. Neurosci. 13, 3533-3548 (1993).</li><li>Nachman-Clewner, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury-induced+remodelling+and+regeneration+of+the+ribbon+presynaptic+terminal+in+vitro.">Injury-induced remodelling and regeneration of the ribbon presynaptic terminal in vitro.</a> J. Neurocytol. 25, 597-613 (1996).</li><li>Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+retinal+neurons+by+optical+tweezers.">Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers.</a> Mol. Vis.. 4, (1998).</li></ol>

लाइट गति है, और जब एक प्रकाश किरण के रूप में यह एक सेल के माध्यम से गुजरता है refracted है, एक बल गति की दिशा बदलने के लिए आवश्यक है. गति के संरक्षण के कानून की वजह से, विपरीत दिशा में एक शक्ति, बारी में, किसी कक्ष पर वापस प्?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>25mm circle No.1 coverglass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR Scientific Inc., Westchester, PA</td>
<td>48380 080</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>poly-2-hydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Chemical Co., St Louis, MO</td>
<td>P-3932</td>
<td>Dissolve in 95% ethanol</td>
</tr>
<tr>
<td>Goat anti-mouse IgG antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon International, Temecula CA</td>
<td>AP181</td>
<td> 1mg in 1ml, dilute 10x for use</td>
</tr>
<tr>
<td>Sal-1 supernatant containing mouse anti-salamander antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>generously provided by Dr. Peter MacLeish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dr. Peter MacLeish, Morehouse School of Medicine, Atlanta, GA</td>
</tr>
<tr>
<td>3 mm bore 5ml pyrex disposable pipets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Inc., Corning NY</td>
<td>7078A-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell culture dishes 35mm x 10mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning inc., Corning NY</td>
<td>430165</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 silicone elastomer kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning Corp., Midland MI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optical tweezers-microtool or laser tweezers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 W continuous wave diode laser of 980nm wavelength</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axiovert 100 inverted light microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>40x oil immersion plan neofluor objective lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Numerical aperture (N.A. 1.3)</td>
</tr>
<tr>
<td>Black and white CCD camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sony Corporation, Tokyo, Japan</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Computer and joystick with software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for controlling a motorized stage</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro

इस कागज और वीडियो में, हम लक्ष्यीकरण regenerating सेल प्रक्रियाओं के इन विट्रो में वयस्क रेटिना न्यूरॉन्स की वरीयताओं को अध्ययन के लिए हमारी प्रयोगशाला में इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल का वर्णन. रेटिना सेल संस्कृतियों की तैयारी के लिए प्रक्रिया विच्छेदन, पाचन और रेटिना के trituration, लेजर चिमटी के साथ उपयोग के लिए विशेष रूप से बने बर्तन पर अलग रेटिना की कोशिकाओं के चढ़ाना के साथ और अंत के साथ शुरू करते हैं. इन व्यंजनों को एक सेल चिपकने वाला आधा और एक सेल repellant आधा में विभाजित हैं. सेल चिपकने वाला पक्ष साल एक एंटीबॉडी, जो एक सब्सट्रेट पर जो हमारी कोशिकाओं को बढ़ने प्रदान की एक परत के साथ लेपित है. अन्य चिपकने वाला substrates अन्य प्रकार की कोशिकाओं के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. सेल repellant पक्ष पाली - हेमा की एक पतली परत के साथ लेपित है. पकवान की पाली - हेमा पक्ष पर मढ़वाया कोशिकाओं लेजर चिमटी के साथ फंस रहे हैं, पहुंचाया और फिर एक सेल करने के लिए आसन्न साल एक तरफ एक जोड़ी बनाने के लिए रखा. किसी भी आकार के सेल समूहों का गठन इस तकनीक के साथ संभव होना चाहिए. &quot;लेजर चिमटी नियंत्रित micromanipulation&quot; का मतलब है कि अन्वेषक जो कोशिकाओं को स्थानांतरित करने के लिए चुन सकते हैं, और कोशिकाओं के बीच वांछित दूरी मानकीकृत किया जा सकता है. क्योंकि लेजर बीम संस्कृति पकवान की पारदर्शी सतहों के माध्यम से चला जाता है, सेल चयन और नियुक्ति एक संलग्न, बाँझ वातावरण में किया जाता है. कक्ष समय चूक वीडियो द्वारा नजर रखी जा सकता है और किसी भी सेल जैविक तकनीक की आवश्यकता के साथ इस्तेमाल किया. इस तकनीक को सेल सेल बातचीत की जांच में मदद मिल सकती है.

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Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro

यह वीडियो सभ्य न्यूरॉन्स इन विट्रो में लेजर चिमटी का उपयोग कर के हेरफेर का वर्णन करता है.

इन विट्रो में पृथक न्यूरॉन्स चालाकी के लिए लेजर चिमटी का उपयोग

In this paper and video, we describe the protocols used in our laboratory to study the targeting preferences of regenerating cell processes of adult ...

Research

JoVE Journal

Biology

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