Name: using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro
Uploaded: 2008-09-11T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке грантов NIH EY012031 и EY0182175 и FM-Кирби Foundation.

Оптический пинцет для манипуляций изолированных клеток в культуре Захват силами оптического пинцета создаются из импульсов света (Ашкина, 1991;. Ашкина и др., 1986). Хотя эти силы легко ловушку клеток в суспензии, они не в состоянии двигаться клеток, которые придерживаются ?...

<ol>
	<li>Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+a+Single-Beam+Gradient+Force+Optical+Trap+for+Dielectric+Particles.">Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles.</a> Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).</li><li>Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+cells+have+different+target+preferences+in+vitro+as+revealed+by+optical+tweezers.">Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers.</a> Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).</li><li>Folkman, J., Moscona, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cell+shape+in+growth+control.">Role of cell shape in growth control.</a> Nature. 273, 345-349 (1978).</li><li>Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+localized+cell+heating+induced+by+infrared+optical+tweezers.">Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers.</a> Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).</li><li>MacLeish, P. R., Barnstable, C. J., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro.">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, 7014-7018 (1983).</li><li>MacLeish, P. R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+synapse+formation+among+major+classes+of+adult+salamander+retinal+neurons+in+vitro.">Growth and synapse formation among major classes of adult salamander retinal neurons in vitro.</a> Neuron. 1, 751-760 (1988).</li><li>Mandell, J. W., MacLeish, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Townes-Anderson+E.+Process+outgrowth+and+synaptic+varicosity+formation+by+adult+photoreceptors+in+vitro.">Townes-Anderson E. Process outgrowth and synaptic varicosity formation by adult photoreceptors in vitro.</a> J. Neurosci. 13, 3533-3548 (1993).</li><li>Nachman-Clewner, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury-induced+remodelling+and+regeneration+of+the+ribbon+presynaptic+terminal+in+vitro.">Injury-induced remodelling and regeneration of the ribbon presynaptic terminal in vitro.</a> J. Neurocytol. 25, 597-613 (1996).</li><li>Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+retinal+neurons+by+optical+tweezers.">Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers.</a> Mol. Vis.. 4, (1998).</li></ol>

Свет импульс, и, когда световой луч преломляется, проходя через ячейки, сила требуется для изменения направления движения. В силу закона сохранения импульса, силы в противоположном направлении должна, в свою очередь, реагируют обратно на камеру. Ашкина (1991) показали, что сила, создаваемая с помощью ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>25mm circle No.1 coverglass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR Scientific Inc., Westchester, PA</td>
<td>48380 080</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>poly-2-hydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Chemical Co., St Louis, MO</td>
<td>P-3932</td>
<td>Dissolve in 95% ethanol</td>
</tr>
<tr>
<td>Goat anti-mouse IgG antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon International, Temecula CA</td>
<td>AP181</td>
<td> 1mg in 1ml, dilute 10x for use</td>
</tr>
<tr>
<td>Sal-1 supernatant containing mouse anti-salamander antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>generously provided by Dr. Peter MacLeish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dr. Peter MacLeish, Morehouse School of Medicine, Atlanta, GA</td>
</tr>
<tr>
<td>3 mm bore 5ml pyrex disposable pipets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Inc., Corning NY</td>
<td>7078A-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell culture dishes 35mm x 10mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning inc., Corning NY</td>
<td>430165</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 silicone elastomer kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning Corp., Midland MI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optical tweezers-microtool or laser tweezers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 W continuous wave diode laser of 980nm wavelength</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axiovert 100 inverted light microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>40x oil immersion plan neofluor objective lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Numerical aperture (N.A. 1.3)</td>
</tr>
<tr>
<td>Black and white CCD camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sony Corporation, Tokyo, Japan</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Computer and joystick with software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for controlling a motorized stage</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro

В данной работе и видео, мы описываем протоколов, используемых в нашей лаборатории для изучения ориентации предпочтения регенерации клеточных процессов взрослых нейронов сетчатки в пробирке. Порядок подготовки сетчатки клеточных культурах начинается с рассечение, пищеварения и растирания сетчатки, а в конце покрытия изолированных клеток сетчатки на блюда, приготовленные специально для использования с лазерным пинцетом. Эти блюда делятся на половину ячейки клей с половиной ячейки репеллент. Стороны ячейки клей покрыта слоем Сал-1 антител, которые обеспечивают подложки, на которой наши клетки расти. Другие клей подложки могут быть использованы для других типов клеток. Стороны ячейки репеллент покрыта тонким слоем поли-НЕМА. Клетки высевали на поли-НЕМА стороне блюда оказались в ловушке с лазерным пинцетом, транспортировались и затем помещается рядом с ячейкой на Сал-1 стороной для создания пары. Формирование группы клеток любого размера должно быть возможным с этой техникой. &quot;Лазерный пинцет контролируемых микроманипуляция&quot; означает, что исследователь может выбрать, какие клетки необходимо переместить, и необходимое расстояние между клетками может быть стандартизирована. Поскольку лазерный луч проходит через прозрачную поверхность культуры блюдо, выбора ячейки и размещение делается в закрытых, стерильной среде. Клетки могут контролироваться с помощью видео покадровой и использовать с любой клетки биологических техники требуется. Эта техника может помочь исследование межклеточных взаимодействий.

Watch this Scientific Journal Video about Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro at JoVE.com

Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro

Это видео описывает манипуляции культурный нейронов помощью лазерного пинцета в пробирке.

Использование лазерный пинцет для манипуляций Изолированные нейроны In Vitro

In this paper and video, we describe the protocols used in our laboratory to study the targeting preferences of regenerating cell processes of adult ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Измерение экзоцитоза в Нейроны Использование FM-маркировки

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Silicon Microchips for Manipulating Cell-cell Interaction

Кремний Микрочипы для манипулирования межклеточных Взаимодействие

The role of the cellular microenvironment is recognized as crucial in determining cell fate and function in virtually all mammalian tissues from ...

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Использование Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) для разработки средств диагностики

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Подготовка генной пушки Маркеры и Biolistic Трансфекция Нейроны фрагмент культуры

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Анализ Шванн-астроцитов взаимодействий с использованием In Vitro Анализы

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Выделение Рибосома связанных стадии становления Полипептиды<em&gt; В пробирке</em&gt;, Чтобы определить Поступательное сайтов Пауза Наряду мРНК

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

In Vitro Aggregation Assays Using Hyperphosphorylated Tau Protein

In Vitro Aggregation Assays Using Hyperphosphorylated Tau Protein

В пробирке агрегации анализов с помощью гиперфосфорилированного тау-белок

Alzheimer's disease is one of a large group of neurodegenerative disorders known as tauopathies that are manifested by the neuronal deposits of ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Манипулируя мышиной слезной железы

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Мышь Изолированные перфузировались почки Техника

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Анализ Суспензии клеток, выделенная из твердых тканей с помощью спектральной проточной цитометрии

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...