Name: using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro
Uploaded: 2008-09-11T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro at JoVE.com

Araştırma NIH Grants EY012031 ve EY0182175 ve FM Kirby Vakfı tarafından desteklenmiştir.

Izole kültür hücreleri işlemek için Optik cımbız Optik cımbız Yakalama güçleri ışık ivme (Ashkin ve ark, 1986 Ashkin, 1991) oluşturulur. Bu güçlerin kolayca süspansiyon hücreleri tuzak olsa da, onlar bir yüzeye bağlı hücreleri hareket etmek mümkün değildir. Bu nedenle, hücrelerin tuzağa noktada kültür çanak yapışma azaltmak için, lamel itici hücre ile poli-2-hydroxyethylmethacrylate (poli-HEMA) (Sigma Chemical Co, St Louis, MO), toksik olmayan bileşik k...

<ol>
	<li>Ashkin, A., Dziedzic, J. M., Bjorkholm, J. E., Chu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+of+a+Single-Beam+Gradient+Force+Optical+Trap+for+Dielectric+Particles.">Observation of a Single-Beam Gradient Force Optical Trap for Dielectric Particles.</a> Opt. Lett. 11, 288-290 (1986).</li><li>Clarke, R. J., Hoegnason, K., Brimacombe, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cone+and+rod+cells+have+different+target+preferences+in+vitro+as+revealed+by+optical+tweezers.">Cone and rod cells have different target preferences in vitro as revealed by optical tweezers.</a> Mol. Vision. 14, 706-720 (2008).</li><li>Folkman, J., Moscona, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cell+shape+in+growth+control.">Role of cell shape in growth control.</a> Nature. 273, 345-349 (1978).</li><li>Liu, Y., Cheng, D. K., Soneck, G. J., Berns, M. W., Chapman, C. F., Tromberg, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+localized+cell+heating+induced+by+infrared+optical+tweezers.">Evidence of localized cell heating induced by infrared optical tweezers.</a> Biophysical Journal. 68, 2137-2144 (1995).</li><li>MacLeish, P. R., Barnstable, C. J., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+monoclonal+antibody+as+a+substrate+for+mature+neurons+in+vitro.">Use of a monoclonal antibody as a substrate for mature neurons in vitro.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 80, 7014-7018 (1983).</li><li>MacLeish, P. R., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+synapse+formation+among+major+classes+of+adult+salamander+retinal+neurons+in+vitro.">Growth and synapse formation among major classes of adult salamander retinal neurons in vitro.</a> Neuron. 1, 751-760 (1988).</li><li>Mandell, J. W., MacLeish, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Townes-Anderson+E.+Process+outgrowth+and+synaptic+varicosity+formation+by+adult+photoreceptors+in+vitro.">Townes-Anderson E. Process outgrowth and synaptic varicosity formation by adult photoreceptors in vitro.</a> J. Neurosci. 13, 3533-3548 (1993).</li><li>Nachman-Clewner, M., Townes-Anderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury-induced+remodelling+and+regeneration+of+the+ribbon+presynaptic+terminal+in+vitro.">Injury-induced remodelling and regeneration of the ribbon presynaptic terminal in vitro.</a> J. Neurocytol. 25, 597-613 (1996).</li><li>Townes-Anderson, E., St Jules, R. S., Sherry, D. M., Lichtenberger, J., Hassanain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromanipulation+of+retinal+neurons+by+optical+tweezers.">Micromanipulation of retinal neurons by optical tweezers.</a> Mol. Vis.. 4, (1998).</li></ol>

Işık momentumu vardır ve bir hücre geçerken kırılan bir ışık ışını zaman, bir kuvvet momentum yönünü değiştirmek için gerekli. Çünkü momentumun korunumu yasası, ters yönde bir kuvvet, sırayla, bir hücre tepki vermelidir. Ashkin (1991) mikroskop objektif lens ile odaklanmış bir lazer ışını tarafından üretilen kuvvet, bir hücre odak merkezine doğru hareket edeceğini gösterdi. Bir lazer ışını sadece birkaç piconewtons güç üretir rağmen, bu gücün, orta aracılığıyla bir hücre çekmek için y...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>25mm circle No.1 coverglass</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR Scientific Inc., Westchester, PA</td>
<td>48380 080</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>poly-2-hydroxyethylmethacrylate (poly-HEMA)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Chemical Co., St Louis, MO</td>
<td>P-3932</td>
<td>Dissolve in 95% ethanol</td>
</tr>
<tr>
<td>Goat anti-mouse IgG antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Chemicon International, Temecula CA</td>
<td>AP181</td>
<td> 1mg in 1ml, dilute 10x for use</td>
</tr>
<tr>
<td>Sal-1 supernatant containing mouse anti-salamander antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>generously provided by Dr. Peter MacLeish</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dr. Peter MacLeish, Morehouse School of Medicine, Atlanta, GA</td>
</tr>
<tr>
<td>3 mm bore 5ml pyrex disposable pipets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning Inc., Corning NY</td>
<td>7078A-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell culture dishes 35mm x 10mm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corning inc., Corning NY</td>
<td>430165</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sylgard 184 silicone elastomer kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning Corp., Midland MI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Optical tweezers-microtool or laser tweezers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1 W continuous wave diode laser of 980nm wavelength</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc., Albuquerque NM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Axiovert 100 inverted light microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>40x oil immersion plan neofluor objective lens</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Carl Zeiss Inc., Thornwood, NY</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Numerical aperture (N.A. 1.3)</td>
</tr>
<tr>
<td>Black and white CCD camera</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sony Corporation, Tokyo, Japan</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Computer and joystick with software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cell Robotics Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>for controlling a motorized stage</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

using laser tweezers for manipulating isolated neurons in vitro

Bu kağıt ve video, hedefleme tercihleri, in vitro yetişkin retinal nöronların yenileyici hücre süreçlerini incelemek için laboratuarda kullanılan protokoller açıklanmaktadır. Kaplama ile izole retina hücrelerinin özellikle lazer cımbız ile kullanımı için yapılan yemekler diseksiyonu, sindirim ve retina, öğütme ve bitiş retinal hücre kültürlerinin hazırlanması için prosedürler ile başlar. Bu yemekleri bir hücre yapışkan yarım ve bir hücre itici yarısı ayrılır. Hücre yapıştırıcı yan hücrelerin büyümesine üzerine bir substrat sağlarlar Sal-1 antikorları, bir tabaka ile kaplanmıştır. Diğer yapışkan substratlar diğer hücre türleri için kullanılabilir. Hücre itici tarafı poli-HEMA ince bir tabaka ile kaplıdır. Yemeğin poli-HEMA tarafında kaplama hücreleri, lazer cımbız ile tuzağa taşınan ve ardından bir çift oluşturmak için bir hücre Sal-1 tarafta komşu olarak yerleştirilmelidir. Bu teknik ile herhangi bir boyut hücre gruplarının oluşumu mümkün olmalıdır. &quot;Lazer cımbız kontrollü mikromanipülasyon&quot; araştırmacı hücreleri taşımak için hangi seçim anlamına gelir, ve hücreler arasındaki istenen mesafe standart olabilir. Çünkü lazer ışını kültür çanağı şeffaf yüzeylerden geçer, hücre seçme ve yerleştirme, kapalı, steril bir ortamda yapılır. Hücreler video time-lapse tarafından izlenmekte ve gerekli her türlü hücre biyolojik tekniği ile kullanılabilir. Bu teknik, hücre-hücre etkileşimleri soruşturma yardımcı olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro at JoVE.com

Using Laser Tweezers For Manipulating Isolated Neurons In Vitro

Bu video in vitro lazer cımbız kullanarak manipülasyon kültürlü nöronların açıklamaktadır.

In Vitro İzole Nöronlar kurgulama için Lazer Cımbız

In this paper and video, we describe the protocols used in our laboratory to study the targeting preferences of regenerating cell processes of adult ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

Nöronlar FM Etiketleme kullanarak ölçüm ekzositoz

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Biyoloji

Silicon Microchips for Manipulating Cell-cell Interaction

Hücre hücre Etkileşim kurgulama için Silikon mikroçipler

The role of the cellular microenvironment is recognized as crucial in determining cell fate and function in virtually all mammalian tissues from ...

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Teşhis Araçları Geliştirmek İçin Mikro-Elektro-Mekanik Sistemler (MEMS)

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

Schwann-astrosit Etkileşimleri Analizi In Vitro Tahliller

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Ribozom Bağlı Doğan Polipeptitler İzolasyonu<em&gt; In vitro</em&gt; MRNA boyunca Translasyonel Duraklat Siteleri Belirleme

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

In Vitro Aggregation Assays Using Hyperphosphorylated Tau Protein

In Vitro Aggregation Assays Using Hyperphosphorylated Tau Protein

In Vitro toplama Deneyler hiperfosforile tau proteini kullanılarak

Alzheimer's disease is one of a large group of neurodegenerative disorders known as tauopathies that are manifested by the neuronal deposits of ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

Kemirgen Gözyaşı bezi kurgulama

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

The Mouse Isolated Perfused Kidney Technique

Fare İzole perfüze Böbrek Tekniği

The mouse isolated perfused kidney (MIPK) is a technique for keeping a mouse kidney under ex vivo conditions perfused and functional for 1 hr. This is a ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Spektral Sitometrisi ile Katı Dokular İzole Hücre Cezalar Analizi

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Laser-Capture Microdissection RNA-Sequencing for Spatial and Temporal Tissue-Specific Gene Expression Analysis in Plants

Bitkilerde Mekansal ve Zamansal Dokuya Özgü Gen Ekspresyonu Analizi için Lazer Yakalama Mikrodiszesi RNA-Dizileme

The development of a complex multicellular organism is governed by distinct cell types that have different transcriptional profiles. To identify ...