Name: a behavioral assay to measure responsiveness of zebrafish to changes in light intensities
Uploaded: 2008-10-03T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het National Institute of Health Subsidies EY0081 en 5T32UY07145 en door de Tempeliers Eye Foundation. Jason Rihel is een Bristol-Squibb Fellow van de Life Sciences Research Foundation.

Dit protocol beschrijft de stappen om de Visual-Motor Reactie van zebravis larven aan het licht stappen en verlaagt in je eigen lab uit te voeren. Zebravis zijn een grote modelsysteem voor gedragsstudies. Ze zijn gemakkelijk te onderhouden, ze hebben grote koppeling maten, en ontwikkelen ze snel. Bijvoorbeeld, de ogen van de zebravis larven zijn reageren op licht door drie dagen van de ontwikkeling en op welk moment ze vertonen een schrikreactie. <p class="j...

<ol>
	<li>Allwardt, A. B., Lall, B. A., Brockerhoff, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+formation+is+arrested+in+retinal+photoreceptors+of+the+zebrafish+nrc+mutant.">Synapse formation is arrested in retinal photoreceptors of the zebrafish nrc mutant.</a> J Neurosci. 21, 2330-2330 (2001).</li><li>Emran, F., Rihel, J., Adolph, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OFF+ganglion+cells+cannot+drive+the+optokinetic+reflex+in+zebrafish.">OFF ganglion cells cannot drive the optokinetic reflex in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104, 19126-19126 (2007).</li><li>Prober, D. A., Rihel, J., Onah, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypocretin/orexin+overexpression+induces+an+insomnia-like+phenotype+in+zebrafish.">Hypocretin/orexin overexpression induces an insomnia-like phenotype in zebrafish.</a> J Neurosci. 26, 13400-13400 (2006).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish. , (2000).</li></ol>

De experimentele procedures die we zien in de film zijn alle representatieve van WT vis. Echter, deze experimenten analoog worden gedaan op mutant vis maar ook (zie de vertegenwoordiger resultaat sectie). We stellen voor om plaat WT vis en mutant vis op dezelfde plaat in een dambord schets voor een optimale controle doeleinden. Bij het gebruik van gemuteerde vis op dezelfde plaat als WT vis zorgen ervoor dat u opschrijven wat voor soort vis werd uitgeplaat in elk putje. Hier is een suggestie over hoe te houden van de vis uitgeplaat ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Microplate devices</td>
<td>Tool</td>
<td>Whatman</td>
<td>7701-1651</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Transfer pipetes</td>
<td>Tool</td>
<td>VWR</td>
<td>202205</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fish water</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>refer to reference #4</td>
</tr>
<tr>
<td>Recording chambers (Zebrabox)</td>
<td>Tool</td>
<td>Viewpoint Lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Videotrack Software</td>
<td>Tool</td>
<td>Viewpoint Lifesciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

a behavioral assay to measure responsiveness of zebrafish to changes in light intensities 

De optokinetische reflex (OKR) is een eenvoudige visuele reflex tentoongesteld door de meeste gewervelde dieren en speelt een belangrijke rol bij het stabiliseren van het oog ten opzichte van de visuele scène. Echter, de OKR vereist dat een dier te detecteren bewegen strepen en het is mogelijk dat vissen die niet aan een OKR tentoonstelling niet helemaal blind. Een zebravis mutant, de no optokinetische antwoord c (NRC) heeft geen OKR onder alle lichtomstandigheden getest en was naar verluidt volledig blind. Eerder hebben we aangetoond dat de OFF-ganglion cel-activiteit kan worden opgenomen in deze mutanten. Om te bepalen of mutant vissen zonder OKR, zoals de NRC mutant kan simpel licht stappen en verlaagt ontwikkelden we de visuele motorische gedrag assay (VMR) te detecteren. In deze test, zijn enkele zebravis larven geplaatst in elke well van een 96-wells plaat waarmee de gelijktijdige controle van de larven met behulp van een geautomatiseerd video-tracking systeem. Het bewegingsapparaat reacties van elke larve tot 30 minuten licht aan en 30 minuten het licht uit werden geregistreerd en gekwantificeerd. WT vissen hebben een korte piek van de motorische activiteit bij de verlichting aan, bekend als de schrikreactie, gevolgd door een terugkeer naar een lager dan baseline activiteit, een zogenaamde bevriezen. WT vis ook sterk onmiddellijk verhogen hun locomotorische activiteit volgende lichten UIT en slechts geleidelijk (over enkele minuten) terug te keren naar de uitgangswaarde locomotorische activiteit. Het NRC mutanten dezelfde reageren op OFF licht als WT vis, maar vertonen een lichte daling van hun gemiddelde activiteit in vergelijking met WT vissen. Motorische activiteit als reactie op ON licht in NRC mutanten is vertraagd en traag. Er is een langzame stijging tijd van het NRC mutant reactie op licht ON in vergelijking met WT het licht van de respons. De resultaten geven aan dat NRC vis niet volledig blind. Omdat teleosten kunnen detecteren door middel van niet-retinale weefsel, we bevestigd dat de directe gedragsmatige reacties op licht-intensiteit verandert intact ogen nodig met behulp van de chokh (CHK) mutanten, die geheel ontbreekt ogen vanaf de vroegste stadia van ontwikkeling. In onze VMR test, de chk mutanten vertonen geen schrikreactie ofwel licht aan of uit, waaruit blijkt dat de laterale ogen dit gedrag te bemiddelen. De VMR test hier beschreven een aanvulling op de gevestigde OKR assay, die niet testen het vermogen van zebravis larven om te reageren op veranderingen in lichtintensiteit. Bovendien is de automatisering van de VMR test leent zich voor high-throughput screening voor defecten in het licht-intensiteit driven visuele reacties.

Watch this Scientific Journal Video about A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities at JoVE.com

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities

We ontwikkelden de Visual-Motor Reactie op het motorvermogen van larvale zebravis kwantificeren in reactie op licht stappen en verlaagt. We hebben ook onderzocht zebravis visie mutanten, waaronder de no optokinetische reactie (NRC) mutanten, waarvan gedacht werd dat volledig blind wanneer het wordt getest door een andere visie assay, de optokinetische reflex.

Een Behavioral Assay aan responsiviteit van zebravis Maatregel om veranderingen in lichtintensiteit

The optokinetic reflex (OKR) is a basic visual reflex exhibited by most vertebrates and plays an important role in stabilizing the eye relative to the ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Behavioral Assay to Measure Responsiveness of Zebrafish to Changes in Light Intensities 

Intravenous Microinjections of Zebrafish Larvae to Study Acute Kidney Injury

Intraveneuze micro-injecties van de zebravis Larven tot acute nierschade Study

In this video article we describe a zebrafish model of AKI using gentamicin as the nephrotoxicant.  The technique consists of intravenous microinjections ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Laser Ablatie van de zebravis Pronephros renale epitheliale regeneratie Study

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Combined Immunofluorescence and DNA FISH on 3D-preserved Interphase Nuclei to Study Changes in 3D Nuclear Organization

Gecombineerd Immunofluorescentie en DNA FISH op 3D-bewaarde interfase kernen aan veranderingen in 3D Nuclear Organisatie Studie

Fluorescent in situ hybridization using DNA probes  on 3-dimensionally preserved nuclei followed by 3D confocal microscopy (3D DNA  FISH) represents the ...

Analysis of Apoptosis in Zebrafish Embryos by Whole-mount Immunofluorescence to Detect Activated Caspase 3

Whole-mount immunofluorescence to detect activated Caspase 3 (Casp3 assay) is useful to identify cells undergoing either intrinsic or extrinsic apoptosis ...

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

In vitro Methylation Assay to Study Protein Arginine Methylation

In vitro Methylatietest Assay om Protein Arginine methylatie Bestudeer

Protein arginine methylation is one of the most abundant post-translational modifications in the nucleus. Protein arginine methylation can be identified ...

Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

Kwantitatieve immunofluorescentiebepaling op het Variatie in eiwitgehalten op centrosomes Maatregel

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Methode voor de evaluatie van de effecten van een golflengtebereik en intensiteiten van Rood / nabij-infrarood Lichttherapie op oxidatieve stress<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Use of the Ramsay Assay to Measure Fluid Secretion and Ion Flux Rates in the Drosophila melanogaster Malpighian Tubule

Gebruik van de Ramsay Assay Fluid Afscheiding en Ion Flux tarieven in de Meet<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Malpighian buisje

Modulation of renal epithelial ion transport allows organisms to maintain ionic and osmotic homeostasis in the face of varying external conditions. The ...

In Vitro Assay to Measure Phosphatidylethanolamine Methyltransferase Activity

In Vitro Assay to Measure Phosphatidylethanolamine Methyltransferase Activity

In vitro test te meten Fosfatidylethanolamine methyltransferase activiteit

Phosphatidylethanolamine methyltransferases are biosynthetic enzymes that catalyze the transfer of one or more methyl group(s) from ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nefrotoxische substantie Micro-injectie in zebravis tot acuut nierfalen Model

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...