Name: preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures
Uploaded: 2008-10-17T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures at JoVE.com

Wir möchten Katharina Cosker und Stephanie Courchesne für hilfreiche Diskussionen danken.

Vorbereitung der Reagenzien <ol><li> Collagen-Beschichtung: Kollagen Mantel p35 Zellkulturplatten und in einem Ofen bei 37 ° C für 2 Tage vor dem Schmieren der Teiler. Die endgültige Konzentration von Kollagen sollten bei 0,71 mg / ml in .001 N HCl verdünnt werden. Dann fügen Sie 1 ml der Mischung pro Platte. </li><li> Fett Lader: Um das Fett loader zu füllen, eine 60 ml Spritze muss zunächst mit Corning Vakuum Fett gefüllt werden. Verwenden Sie die Spritze mit dem Fett-Loader zu füllen, wick...

<ol>
	<li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+Control+of+the+Local+Environment+of+Somas+and+Neurites.">Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites.</a> Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).</li><li>Watson, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+use+the+Erk5+pathway+to+mediate+a+retrograde+survival+response.">Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response.</a> Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).</li><li>Heerssen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynein+motors+transport+activated+Trks+to+promote+survival+of+target-dependent+neurons.">Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons.</a> Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2, 599-605 (2006).</li><li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).</li><li>Ure, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+transport+and+steady-state+distribution+of+125I-nerve+growth+factor+in+rat+sympathetic+neurons+in+compartmented+cultures.">Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures.</a> J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).</li></ol>

In diesem Video haben wir gezeigt, wie man sich vorbereiten und pflegen compartmented Kammern für den Einsatz in Kultivierung DRG-Neuronen. Alles richtig, dieses System Trennung der Zellkörper aus dem Axon, um Mechanismen, durch die Neurotrophine Signal über lange Axone zu studieren. Da es fluidische Trennung zwischen den Fächern, ermöglicht es zur selektiven Stimulation oder Behandlung von einem Fach, ohne die anderen Fächer berührt wird. Compartmented Kammer Kulturen unterstützt auch andere Zelltypen, einschließlich sympathischen...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>collagen</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354249</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N2-methylcellulose 400CPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sel-Win Chemicals</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Teflon divider</td>
<td>Other</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>CAMP10</td>
<td>many other types of dividers are available</td>
</tr>
<tr>
<td>Pin rake</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-PR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Grease loader</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-GLSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>MT10017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BDNF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-635-5D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AraC</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>C-1768</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23 gauge luer stub adapter</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>427565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>90&deg; angle hemostats</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-7035</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures

Neurons verlängern axonalen Prozessen, die weit vom Zellkörper entfernt werden, um Zielgewebe, wo target-derived growth Faktoren für das neuronale Überleben und die Funktion erforderlich sind, innervieren. Neurotrophine sind speziell erforderlich, um das Überleben und die Differenzierung von innervieren sensorischen Neuronen zu halten, aber die Frage, wie diese Ziel-derived Neurotrophine zum Zellkörper der Neuronen innervieren zu kommunizieren, hat eine Fläche von aktiver Forschung seit über 30 Jahren. Die am häufigsten akzeptierte Modell, wie Neurotrophin-Signale erreichen den Zellkörper schlägt vor, dass Signalisierung tragen dieses Signal retrograd entlang des Axons Endosomen. Um retrograden Transport Studie wurde eine Kultur, das ursprünglich von Robert Campenot, in dem Zellkörper von ihrer Axone isoliert entwickelt. Die Technik zur Herstellung dieser compartmented Kammern zur Kultivierung von sensorischen Neuronen rekapituliert die selektive Stimulation von Neuronen Terminals, die in vivo nach der Entlassung von Soll-derived Neurotrophine auftritt. Retrograde Signal-Ereignisse, Langstrecken-Mikrotubuli abhängig retrograden Transport benötigen haben wichtige Implikationen für die Behandlung von neurodegenerativen Erkrankungen.

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Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures

Hier beschreiben wir die Technik der Herstellung und Aufrechterhaltung compartmented Kammern zur Kultivierung von sensorischen Neuronen der Spinalganglien.

Erstellung und Pflege von Spinalganglien Neuronen in Compartmented Kulturen

Neurons extend axonal processes that are far removed from the cell body to innervate target tissues, where target-derived growth factors are required for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Vorbereitung der neuronalen Kulturen aus Midgastrula Bühne Drosophila Embryonen

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Forschung

Biologie

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Vorbereitung von dissoziierten Maus kortikale Neuron Kulturen

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

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Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

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Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protokoll zur Kultivierung sympathischen Neuronen aus Ratten-Superior Halsganglien (SCG)

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