Name: preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures
Uploaded: 2008-10-17T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures at JoVE.com

Gostaríamos de agradecer a Katharina Cosker e Stephanie Courchesne para discussões úteis.

Preparação de reagentes <ol><li> Revestimento de colágeno: colágeno casaco p35 placas de cultura de tecidos e coloque em um forno a 37 ° C por 2 dias antes da lubrificação os divisores. A concentração final de colágeno deve ser a 0,71 mg / ml diluída em HCl 0,001 N. Em seguida, adicionar 1 ml da mistura por placa. </li><li> Carregadores de graxa: A fim de preencher o carregador de graxa, uma seringa de 60mL primeiro deve ser preenchido com Corning graxa de vácuo. Use a seringa para encher ...

<ol>
	<li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+Control+of+the+Local+Environment+of+Somas+and+Neurites.">Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites.</a> Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).</li><li>Watson, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+use+the+Erk5+pathway+to+mediate+a+retrograde+survival+response.">Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response.</a> Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).</li><li>Heerssen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynein+motors+transport+activated+Trks+to+promote+survival+of+target-dependent+neurons.">Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons.</a> Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2, 599-605 (2006).</li><li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).</li><li>Ure, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+transport+and+steady-state+distribution+of+125I-nerve+growth+factor+in+rat+sympathetic+neurons+in+compartmented+cultures.">Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures.</a> J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).</li></ol>

Neste vídeo, demonstramos como se preparar e manter câmaras compartimentado para uso em neurônios DRG cultura. Feito corretamente, este sistema permite a separação do corpo celular do axônio para estudar mecanismos pelos quais neurotrofinas sinal através axônios longos. Uma vez que não é o isolamento fluídico entre os compartimentos, que permite a estimulação seletiva ou tratamento de um compartimento sem a outros compartimentos sendo afetados. Culturas câmara compartimentada pode suportar outros tipos de células, incluindo n...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>collagen</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354249</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N2-methylcellulose 400CPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sel-Win Chemicals</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Teflon divider</td>
<td>Other</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>CAMP10</td>
<td>many other types of dividers are available</td>
</tr>
<tr>
<td>Pin rake</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-PR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Grease loader</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-GLSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>MT10017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BDNF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-635-5D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AraC</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>C-1768</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23 gauge luer stub adapter</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>427565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>90&deg; angle hemostats</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-7035</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures

Neurônios estender os processos axonal que estão longe do corpo celular para inervar tecidos-alvo, onde alvo derivado fatores de crescimento são necessários para a sobrevivência neuronal e na função. Neurotrofinas são especificamente necessárias para manter a sobrevivência e diferenciação de neurônios sensoriais que inervam mas a questão de como esses neurotrofinas-alvo derivado comunicar para o corpo celular dos neurônios que inervam tem sido uma área de pesquisa ativa por mais de 30 anos. O modelo mais comumente aceita de como sinais de neurotrofina chegar ao corpo celular propõe que a sinalização endossomos transportar este sinal retrogradamente ao longo do axônio. A fim de estudar o transporte retrógrado, um sistema de cultura foi originalmente concebido por Robert Campenot, em que os corpos celulares estão isolados de seus axônios. A técnica de preparação destas câmaras compartimentado para recapitula cultura sensorial neurônios a estimulação seletiva dos terminais dos neurônios que ocorre na liberação in vivo de seguir-alvo derivado neurotrofinas. Retrógrada eventos que requerem sinalização de longo alcance microtúbulos transporte retrógrado dependentes têm implicações importantes para o tratamento de doenças neurodegenerativas.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures at JoVE.com

Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures

Aqui, descrevemos a técnica de preparação e manutenção de câmaras compartimentada para os neurônios sensoriais cultura do gânglio da raiz dorsal.

Preparação e manutenção dos neurônios da raiz dorsal Gânglios em culturas Compartmented

Neurons extend axonal processes that are far removed from the cell body to innervate target tissues, where target-derived growth factors are required for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Preparação de culturas de neurônios a partir de embriões Midgastrula Stage Drosophila

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Biologia

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Preparação de Dissociated rato Culturas Neuron Cortical

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Preparação de Gene Gun Bullets e Transfection biobalística de neurônios em cultura Slice

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

Preparação de 2-dGuo-Tratada Culturas Organ Thymus

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protocolo para Neurônios Cultivar Sympathetic de Gânglios Superior Rat Cervical (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Preparation of Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron and Glia Development Studies

Preparação das Culturas cérebro de um rato Aggregate para Neuron Glia e Estudos de Desenvolvimento

An in vitro system that recapitulates the development and differentiation of progenitors into mature neurons and glia in the central nervous system (CNS) ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparação de Aplysia Sensório-motor Neuronal culturas de células

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Alternative Cultures for Human Pluripotent Stem Cell Production, Maintenance, and Genetic Analysis

Culturas alternativas para produção, manutenção e análise genética de células-tronco pluripotentes humanas

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...

Lateral Root Inducible System in Arabidopsis and Maize

Lateral Root Inducible System in Arabidopsis and Maize

Sistema induzível de raiz lateral em Arabidopsis e milho

Lateral root development contributes significantly to the root system, and hence is crucial for plant growth. The study of lateral root initiation is ...

Divergence of Root Microbiota in Different Habitats based on Weighted Correlation Networks

Divergência de Microbiota Raiz em Diferentes Habitats baseados em Redes de Correlação Ponderada

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, ...