Name: preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures
Uploaded: 2008-10-17T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures at JoVE.com

Vi vill tacka Katharina Cosker och Stephanie Courchesne för bra diskussioner.

Beredning av reagenser <ol><li> Kollagen beläggning: kollagen päls P35 vävnadsodling tallrikar och placera i en ugn vid 37 ° C i 2 dagar innan smörjning av avdelare. Den slutliga koncentrationen av kollagen bör vara 0,71 mg / ml utspätt i 0,001 N HCl. Lägg sedan till 1 ml av blandningen per platta. </li><li> Fett lastare: För att fylla fett Loader måste en 60ml sprutan först fyllas med Corning vakuum fett. Använd sprutan för att fylla fett lastaren, linda in det i folie och sedan autoklav...

<ol>
	<li>Campenot, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Independent+Control+of+the+Local+Environment+of+Somas+and+Neurites.">Independent Control of the Local Environment of Somas and Neurites.</a> Methods in Enzymology. 58, 302-307 (1979).</li><li>Watson, F. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotrophins+use+the+Erk5+pathway+to+mediate+a+retrograde+survival+response.">Neurotrophins use the Erk5 pathway to mediate a retrograde survival response.</a> Nature Neuroscience. 4, 981-988 (2001).</li><li>Heerssen, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynein+motors+transport+activated+Trks+to+promote+survival+of+target-dependent+neurons.">Dynein motors transport activated Trks to promote survival of target-dependent neurons.</a> Nature Neuroscience. 7, 596-603 (2004).</li><li>Taylor, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nature Methods. 2, 599-605 (2006).</li><li>Park, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 4, 2128-2136 (2006).</li><li>Ure, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+transport+and+steady-state+distribution+of+125I-nerve+growth+factor+in+rat+sympathetic+neurons+in+compartmented+cultures.">Retrograde transport and steady-state distribution of 125I-nerve growth factor in rat sympathetic neurons in compartmented cultures.</a> J Neuroscience. 4, 1282-1290 (1997).</li></ol>

I den här filmen har vi visat hur man förbereder och underhåller fackindelade kamrar för användning i nervceller odling DRG. Görs rätt, ger detta system separation av cellkroppen från axonet för att studera mekanismer genom vilka neurotrofinernas signaler över långa axoner. Eftersom det finns fluidic isolering mellan fack, gör det för selektiv stimulering eller behandling av en avdelning utan att de andra facken påverkas. Fackindelade kammare kulturer kan stödja andra celltyper inklusive sympatiska nervceller från den överl...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>collagen</td>
<td>Reagent</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>354249</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N2-methylcellulose 400CPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sel-Win Chemicals</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Teflon divider</td>
<td>Other</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>CAMP10</td>
<td>many other types of dividers are available</td>
</tr>
<tr>
<td>Pin rake</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-PR</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Grease loader</td>
<td>Tool</td>
<td>Tyler Research</td>
<td>Camp-GLSS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>MT10017CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BDNF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Peprotech</td>
<td>450-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High vacuum grease</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-635-5D</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>AraC</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>C-1768</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23 gauge luer stub adapter</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>427565</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>90&deg; angle hemostats</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-7035</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation and maintenance of dorsal root ganglia neurons in compartmented cultures

Nervceller förlänga axonal processer som ligger långt från cellkroppen till innerverar målvävnader, där mål-derived growth faktorer krävs för neuronal överlevnad och funktion. Neurotrofinernas är specifikt krävs för att upprätthålla överlevnad och differentiering av innervating sensoriska neuroner, men frågan om hur dessa mål som härrör neurotrofinernas meddela cellkroppen av innervating nervceller har varit ett område med aktiv forskning i över 30 år. Den mest allmänt accepterade modellen för hur neurotrophin signaler når cellkroppen föreslår att signalering endosomes bära denna signal retrogradely längs axonet. För att studera retrograd transport, var en kultur system som ursprungligen utvecklades av Robert Campenot, i vilken cell organ är isolerade från sina axoner. Tekniken att förbereda dessa fackindelade kammare för odling sensoriska neuroner rekapitulerar den selektiva stimulering av neuron terminaler som sker in vivo efter utsläpp av mål-derived neurotrofinernas. Retrograd signalering händelser som kräver lång räckvidd mikrotubuli beroende retrograd transport har viktiga konsekvenser för behandling av neurodegenerativa sjukdomar.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures at JoVE.com

Preparation and Maintenance of Dorsal Root Ganglia Neurons in Compartmented Cultures

Här beskriver vi tekniken för att förbereda och underhålla fackindelade kammare för odling sensoriska nervceller i dorsalrotsganglier.

Upprättande och underhåll av ryggfenan Nervceller rotganglier i Fackindelade kulturer

Neurons extend axonal processes that are far removed from the cell body to innervate target tissues, where target-derived growth factors are required for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Preparation of Dissociated Mouse Cortical Neuron Cultures

Beredning av dissocierade Mouse kortikala Neuron kulturer

This video will guide you through the process for generating cortical neuronal cultures from late embryo and early postnatal mouse brain. These cultures ...

Preparation of Gene Gun Bullets and Biolistic Transfection of Neurons in Slice Culture

Beredning av Bullets Gene Gun och Biolistic transfektion av nervceller i Slice Kultur

Biolistic transfection is a physical means of transfecting cells by bombarding tissue with high velocity DNA coated particles. We provide a detailed ...

Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures

Beredning av 2-dGuo-behandlade Thymus Organ kulturer

In the thymus, interactions between developing T-cell precursors and stromal cells that include cortical and medullary epithelial cells are known to play ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protokoll för odling sympatiska nervceller från Rat Superior Cervikal Ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Preparation of Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron and Glia Development Studies

Beredning av Aggregate råtthjärna kulturer för Neuron och Glia utvecklingsstudier

An in vitro system that recapitulates the development and differentiation of progenitors into mature neurons and glia in the central nervous system (CNS) ...

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Preparation of Aplysia Sensory-motor Neuronal Cell Cultures

Beredning av Aplysia Sensomotorisk Neuronal cellkulturer

The nervous system of the marine mollusk Aplysia californica is relatively simple, consisting of approximately 20,000 neurons.  The neurons are large (up ...

Alternative Cultures for Human Pluripotent Stem Cell Production, Maintenance, and Genetic Analysis

Alternativa kulturer för Human pluripotenta stamceller Produktion, underhåll, samt genetisk analys

Human pluripotent stem cells (hPSCs) hold great promise for regenerative medicine and biopharmaceutical applications. Currently, optimal culture and ...

Lateral Root Inducible System in Arabidopsis and Maize

Lateral Root Inducible System in Arabidopsis and Maize

Lateral Root inducerbara systemet i<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Och Maize

Lateral root development contributes significantly to the root system, and hence is crucial for plant growth. The study of lateral root initiation is ...

Divergence of Root Microbiota in Different Habitats based on Weighted Correlation Networks

Divergens av rotmikrobiota i olika livsmiljöer baserat på viktade korrelationsnätverk

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, ...