Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

Protein synthesis is a complex cellular process that is regulated at many levels. For example, global translation can be inhibited at the initiation phase ...

University of Medicine and Dentistry of New Jersey, Robert Wood Johnson Medical School

&#x9AD8;&#x6548;&#x541E;&#x9700;&#x8981;&#x9488;&#x5BF9;&#x6307;&#x5B9A;&#x8D27;&#x7269;&#x7EB3;&#x5165;&#x4F53;&#x819C;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x80DE;&#x8D28;&#x57DF;&#x3002;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8D27;&#x7269;&#x96C6;&#x5408;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C06;&#x76EE;&#x6807;&#x4FE1;&#x53F7;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x541E;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x7279;&#x70B9; NPFX(1,2) (&#x76EE;&#x6807;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; NPFX (1&#xFF0C;2) &#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D; Sla1p D &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x541E;&#x4F5C;&#x7528;&#x5728;&#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684; NPFX[1,2]D)&#x3002;11 &#x5305;&#x62EC; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5C31;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5;&#x5438;&#x6536;&#x7684;&#x622A;&#x65AD;&#x4FE1;&#x606F;&#x7D20;&#x53D7;&#x4F53; Ste2p &#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;&#x541E;&#x76EE;&#x6807;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6CA1;&#x6709;&#x6301;&#x7EED;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x82EF;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x6216;&#x5929;&#x51AC;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x6362;&#x3002;NPFX1&#xFF0C;2D &#x76F8;&#x5173;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6CDB;&#x7D20;&#x7684;&#x541E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E0E;&#x5197;&#x4F59;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x672C;&#x673A; Ste2p &#x6807;&#x8BC6;&#x3002;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x4E92;&#x52A8;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E0A;&#x7684; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x4EA7;&#x751F; SLA1&#xFF0C;&#x4F46;&#x6CA1;&#x6709;&#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801; Eps15 &#x540C;&#x6E90; (EH) &#x57DF;&#xFF0C;&#x80FD;&#x8BC6;&#x522B;&#x4EA4;&#x6B3E;&#x80BD;&#x86CB;&#x767D;&#x6A21;&#x5757;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;EH &#x57DF;&#x4E0D;&#x627F;&#x8BA4; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x4FE1;&#x53F7;&#x76F4;&#x63A5;&#x7531;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x5206;&#x6790;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x65F6;&#x3002;SLA1 &#x4E2D;&#x65AD;&#x4E25;&#x91CD;&#x6291;&#x5236; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x541E;&#xFF0C;&#x4F46;&#x53EA;&#x6709;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x5F71;&#x54CD;&#x9488;&#x5BF9;&#x6CDB;&#x7D20;&#x7684;&#x5438;&#x6536;&#x3002;NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x4F9D;&#x8D56;&#x5185;&#x90E8;&#x5316;&#x6240;&#x9700; Sla1p&#xFF0C;SLA1 &#x540C;&#x6E90;&#x57DF;&#xFF0C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x5305;&#x542B;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x4F53;&#x5916;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x672C;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x4EA4;&#x6B3E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#xFF0C;Sla1p &#x4F5C;&#x4E3A;&#x541E;&#x76EE;&#x6807;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7F51;&#x683C;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x541E;&#x673A;&#x6784;&#x63D0;&#x4F9B;&#x51E0;&#x4E2A;&#x8D27;&#x7269;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;

Sla1p &#x4F5C;&#x4E3A;&#x9776;&#x5411;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BC6;&#x522B;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E3A; NPFX (1&#xFF0C;2) D &#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x541E;&#x3002;

Efficient endocytosis requires cytoplasmic domain targeting signals that specify incorporation of cargo into endocytic vesicles. Adaptor proteins play a central role in cargo collection by linking targeting signals to the endocytic machinery. We have characterized NPFX(1,2) (NPFX[1,2]D) targeting signals and identified the actin-associated protein Sla1p as the adaptor for NPFX(1,2)D-mediated endocytosis in Saccharomyces cerevisiae. 11 amino acids encompassing an NPFX(1,2)D sequence were sufficient to direct uptake of a truncated form of the pheromone receptor Ste2p. In this context, endocytic targeting activity was not sustained by conservative substitutions of the phenylalanine or aspartate. An NPFX1,2D-related sequence was identified in native Ste2p that functions redundantly with ubiquitin-based endocytic signals. A two-hybrid interaction screen for NPFX(1,2)D-interacting proteins yielded SLA1, but no genes encoding Eps15 homology (EH) domains, protein modules known to recognize NPF peptides. Furthermore, EH domains did not recognize an NPFX(1,2)D signal when directly tested by two-hybrid analysis. SLA1 disruption severely inhibited NPFX(1,2)D-mediated endocytosis, but only marginally affected ubiquitin-directed uptake. NPFX(1,2)D-dependent internalization required a conserved domain of Sla1p, SLA1 homology domain, which selectively bound an NPFX(1,2)D-containing fusion protein in vitro. Thus, through a novel NPF-binding domain, Sla1p serves as an endocytic targeting signal adaptor, providing a means to couple cargo with clathrin- and actin-based endocytic machineries.

Sla1p serves as the targeting signal recognition factor for NPFX(1,2)D-mediated endocytosis.

Endocytose efficace exige le domaine cytoplasmique ciblant les signaux qui sp&eacute;cifient l&#39;incorporation de la cargaison dans les v&eacute;sicules endocytiques. Prot&eacute;ines adaptateur jouent un r&ocirc;le central dans la collection de la cargaison en liant les signaux de ciblage &agrave; la machinerie endocytaire. Nous avons caract&eacute;ris&eacute; des NPFX(1,2) (NPFX[1,2]D) ciblant les signaux et identifi&eacute; les prot&eacute;ines associ&eacute;es &agrave; l&#39;actine Sla1p comme l&#39;adaptateur d&#39;endocytose D NPFX (1,2) chez Saccharomyces cerevisiae. 11 acides amin&eacute;s comprenant une s&eacute;quence D NPFX (1,2) ne suffisaient pas &agrave; l&#39;absorption directe d&#39;une forme tronqu&eacute;e du r&eacute;cepteur de la ph&eacute;romone Ste2p. Dans ce contexte, endocytose ciblage n&#39;&eacute;tait pas soutenue par des substitutions de conservateurs de la ph&eacute;nylalanine ou aspartate. Un NPFX1, s&eacute;quence de 2D a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; dans Ste2p native qui fonctionne de mani&egrave;re redondante avec l&#39;ubiquitine-endocytose signaux bas&eacute;s sur. Un &eacute;cran d&#39;interaction de deux-hybride de prot&eacute;ines d&#39;interaction de D NPFX (1,2) a donn&eacute; SLA1, mais aucun g&egrave;ne codant Eps15 domaines d&#39;homologie (EH), modules de prot&eacute;ine sait reconna&icirc;tre les peptides des FNP. En outre, EH domaines ne reconnaissaient pas un signal D NPFX (1,2) lors d&#39;un essai directement par l&#39;analyse de deux-hybride. SLA1 perturbation s&eacute;v&egrave;rement inhib&eacute;e endocytose D NPFX (1,2), mais que marginalement affect&eacute; absorption r&eacute;alis&eacute; par l&#39;ubiquitine. Internalisation d&eacute;pendante D NPFX (1,2) requis un domaine conserv&eacute; des Sla1p, domaine d&#39;homologie de SLA1, qui lie une prot&eacute;ine de fusion contenant D NPFX (1,2) in vitro. Ainsi, &agrave; travers un roman domaine de liaison &agrave; des FNP, Sla1p sert un adaptateur de signal ciblage endocytose, fournissant un moyen de cargaison de couple avec les m&eacute;canismes endocytose clathrine et actine dot&eacute;s.

Sla1p est le facteur de reconnaissance de signal ciblage d&#39;endocytose D NPFX (1,2).

Sla1p dient als Targeting-Signal Wiedererkennungswert f&#xFC;r NPFX (1,2) D-vermittelte Endozytose.

Endocitosi efficiente richiede il dominio citoplasmatico targeting segnali che specificano l&#39;incorporazione di carico endocitico vescicole. Le proteine adattatore svolgono un ruolo centrale nella raccolta merci collegando targeting segnali al macchinario endocitico. Noi abbiamo caratterizzato NPFX(1,2) (NPFX[1,2]D) segnali di targeting e identificate le proteine associate all&#39;actina Sla1p come l&#39;adattatore per endocitosi mediata D NPFX (1,2) in Saccharomyces cerevisiae. 11 aminoacidi che comprende una sequenza D NPFX (1,2) erano sufficienti per assorbimento diretto di una forma troncata del recettore feromone Ste2p. In questo contesto, attivit&agrave; di targeting endocitico non fu sostenuta dal conservatore sostituzioni della fenilalanina o aspartato. Un NPFX1, sequenza di 2D &egrave; stato identificato in Ste2p nativo che funzioni ridondante con segnali endocitico ubiquitina-based. Uno schermo di interazione di due ibridi per le proteine interagenti D NPFX (1,2) ha reso SLA1, ma non i geni che codificano Eps15 domini omologia (EH), moduli di proteina conosciuti di riconoscere peptidi NPF. Inoltre, EH domini non riconobbe un segnale D NPFX (1,2) quando testato direttamente dall&#39;analisi dei due ibridi. Interruzione di SLA1 severamente inibito endocitosi mediata D NPFX (1,2), ma solo marginalmente assorbimento diretto di ubiquitin. Interiorizzazione D-dipendente NPFX (1,2) richiesto un dominio conservato di Sla1p, dominio di omologia di SLA1, che selettivamente associata una proteina di fusione contenenti D NPFX (1,2) in vitro. Cos&igrave;, attraverso un romanzo dominio NPF-associazione, Sla1p serve come un adattatore di segnale targeting endocitico, fornendo un mezzo carico di coppia con macchinari endocitico clatrina e actina-based.

Sla1p serve come il fattore di riconoscimento segnale targeting per endocitosi mediata D NPFX (1,2).

&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x8CA8;&#x7269;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3092;&#x6307;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8CA8;&#x7269;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5185;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3044;&#x308B;&#x7279;&#x5FB4; NPFX(1,2) (&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; Sla1p NPFX (1, 2) D &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x7528;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B; NPFX[1,2]D)&#x3002;NPFX (1, 2) D &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5305;&#x542B; 11 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306F;&#x7701;&#x7565;&#x5F62;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; Ste2p &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9; &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3; &#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30B9;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AE;&#x30F3;&#x9178;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x306A;&#x7F6E;&#x63DB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6301;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x306A;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;NPFX1&#x3001;2 D &#x95A2;&#x9023;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x5197;&#x9577;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3068;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E; Ste2p &#x3067;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3; NPFX (1, 2) &#x306E; D &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081; SLA1, Eps15 &#x76F8;&#x540C;&#x6027; (EH) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;NPF &#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30E2;&#x30B8;&#x30E5;&#x30FC;&#x30EB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;EH &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x76F4;&#x63A5; 2 &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;NPFX (1, 2) D &#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;SLA1 &#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x306F;&#x6DF1;&#x523B;&#x306A; NPFX (1, 2) D &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x306E;&#x307F;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x76E3;&#x7763;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NPFX (1, 2) D &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x5185;&#x90E8;&#x5316; Sla1p&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x3001;NPFX (1, 2) D &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x3054;&#x4F53;&#x5916;&#x7D50;&#x5408; SLA1 &#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066; NPF &#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;Sla1p &#x306F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x8CA8;&#x7269;&#x306B;&#x624B;&#x6BB5;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sla1p NPFX (1, 2) D &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8A8D;&#x8B58;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; endocytosis &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC5C6;&#xC774; &#xD654;&#xBB3C; endocytic &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; endocytic &#xAE30;&#xACC4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558; &#xC5EC; &#xD654;&#xBB3C; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158;&#xC758; &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9;&#xD560;. &#xC6B0;&#xB9AC; NPFX(1,2) (NPFX[1,2]D) &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558; &#xACE0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Sla1p NPFX (1, 2)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; D &#xC911;&#xC7AC; endocytosis Saccharomyces cerevisiae&#xC5D0; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC788;&#xB2E4;. NPFX (1, 2) D &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; 11 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xD398;&#xB85C;&#xBAAC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; ste2p&#xC758; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; &#xD615;&#xD0DC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; endocytic &#xB300;&#xC0C1; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD558;&#xC9C0; &#xD398;&#xB2D0;&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xB610;&#xB294; aspartate&#xC758; &#xBCF4;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. NPFX1, 2D &#xAD00;&#xB828; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; Ste2p &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAE30;&#xBC18; endocytic &#xC2E0;&#xD638;&#xC640; &#xC911;&#xBCF5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. NPFX (1, 2) D &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 2 &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD654;&#xBA74; &#xC544;&#xBB34; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Eps15 homology (EH) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBAA8;&#xB4C8; NPF &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; SLA1, &#xB098;&#xC654;&#xACE0;. &#xB610;&#xD55C;, EH &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC9C1;&#xC811; &#xB450; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC744; &#xB54C; NPFX (1, 2) D &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SLA1 &#xC7A5;&#xC560; &#xC2EC;&#xAC01; NPFX (1, 2) D-&#xC911;&#xC7AC; endocytosis &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB2E8; marginally &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xAC10;&#xB3C5; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744;. NPFX (1, 2) D &#xC885;&#xC18D; &#xAD6D;&#xC81C;&#xD654; Sla1p, &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; NPFX (1, 2) D &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; SLA1 homology &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC18C;&#xC124; NPF &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; Sla1p &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; endocytic &#xB300;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; clathrin &#xB9D0;&#xB77C; &#xAE30;&#xBC18; endocytic &#xAE30;&#xACC4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBA87; &#xD654;&#xBB3C; &#xC218;&#xB2E8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sla1p NPFX (1, 2) D-&#xC911;&#xC7AC; endocytosis &#xB300;&#xC0C1; &#xC2E0;&#xD638; &#xC778;&#xC2DD; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Endocitosis eficiente requiere dominio citopl&aacute;smico dirigidos a las se&ntilde;ales que especifican la incorporaci&oacute;n de carga en ves&iacute;culas endoc&iacute;ticas. Prote&iacute;nas Adaptadoras juegan un papel central en la colecci&oacute;n cargo uniendo se&ntilde;ales apuntadas a la maquinaria endoc&iacute;ticas. Hemos caracterizado NPFX(1,2) (NPFX[1,2]D) a se&ntilde;ales e identific&oacute; la endocitosis mediada por D de la prote&iacute;na asociada a la actinia Sla1p como el adaptador para NPFX (1,2) en Saccharomyces cerevisiae. 11 amino&aacute;cidos que abarca una secuencia D NPFX (1,2) fueron suficientes para la captaci&oacute;n directa de una forma truncada de los receptores de feromonas Ste2p. En este contexto, actividad dirigida a endoc&iacute;ticas no era sostenido por sustituciones conservadoras de la fenilalanina o aspartato. Un NPFX1, secuencia basadas en 2D fue identificada en Ste2p nativo que funciona redundante con se&ntilde;ales endoc&iacute;ticas basadas en la ubiquitina. Una pantalla de interacci&oacute;n de dos h&iacute;bridos para las prote&iacute;nas NPFX (1,2) D-interactuando rindi&oacute; SLA1, pero no los genes que codifican Eps15 dominios de la homolog&iacute;a (EH), m&oacute;dulos de prote&iacute;nas que reconocen p&eacute;ptidos NPF. Adem&aacute;s, dominios EH no reconoc&iacute;a una se&ntilde;al NPFX (1,2) D cuando directamente probados por el an&aacute;lisis de dos h&iacute;bridos. SLA1 interrupci&oacute;n inhibe severamente endocitosis mediada por D de NPFX (1,2), pero s&oacute;lo marginalmente afectados captaci&oacute;n ubiquitin-dirigido. Internalizaci&oacute;n de NPFX (1,2) D-dependiente requiere un dominio conservado de Sla1p, SLA1 dominio de homolog&iacute;a, que selectivamente limitados a una NPFX (1,2) D-que contiene prote&iacute;na de fusi&oacute;n in vitro. As&iacute;, a trav&eacute;s de una novela dominio NPF-obligatorio, Sla1p sirve como un adaptador de se&ntilde;al dirigida a endoc&iacute;ticas, proporcionar un medio para carga de par con base de clatrina y actina endoc&iacute;ticas maquinarias.

Sla1p sirve como el factor de reconocimiento de se&ntilde;al apuntado por endocitosis mediada por D de NPFX (1,2).

GRACILE (&#x751F;&#x957F;&#x8FDF;&#x7F13;&#x3001; aminoaciduria&#x3001; &#x80C6;&#x6C41;&#x6DE4;&#x79EF;&#x3001; &#x94C1;&#x8FC7;&#x8F7D;&#x3001; lactacidosis &#x548C;&#x8FC7;&#x65E9;&#x6B7B;&#x4EA1;) &#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x9690;&#x6027;&#x7EE7;&#x627F;&#x7684;&#x81F4;&#x547D;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x80CE;&#x513F;&#x751F;&#x957F;&#x8FDF;&#x7F13;&#x3001; &#x4E73;&#x9178;&#x6027;&#x9178;&#x4E2D;&#x6BD2;&#x3001; aminoaciduria&#x3001; &#x80C6;&#x6C41;&#x6DE4;&#x79EF;&#x4E0E;&#x94C1;&#x4EE3;&#x8C22;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x5230;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 2q33 37 1.5 &#x5398;&#x7C73;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x901A;&#x8FC7;&#x67E5;&#x660E;&#x5728;&#x82AC;&#x5170;&#x8F7B;&#x76C8;&#x5F81;&#xFF0C;BCS1L &#x57FA;&#x56E0; S78G &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4E09;&#x4E2A;&#x82F1;&#x56FD;&#x5A74;&#x513F;&#x7684;&#x4E94;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EAF;&#x5408;&#x9519;&#x4E49;&#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6B64;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7D0A;&#x4E71;&#x3001; &#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;BCS1L&#xFF0C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5185;&#x5728;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F34;&#x4FA3;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x547C;&#x5438;&#x94FE;&#x590D;&#x6742;&#x7B2C;&#x4E09;&#x3002;&#x8109;&#x51B2;&#x5927;&#x901A;&#x4E2D; COS-1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E; S78G &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x6539;&#x53D8;&#x7ED3;&#x679C;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#xFF0C;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E92;&#x8865;&#x7814;&#x7A76;&#x53D1;&#x73B0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684; BCS1L &#x86CB;&#x767D;&#x529F;&#x80FD;&#x7F3A;&#x5931;&#x3002;&#x571F;&#x8033;&#x5176;&#x660E;&#x663E;&#x4E0D;&#x540C;&#x8868;&#x578B;&#x60A3;&#x8005;&#x5DF2;&#x5728;&#x5176;&#x4ED6;&#x5730;&#x65B9;&#xFF0C;&#x62A5;&#x544A;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C; BCS1L &#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x571F;&#x8033;&#x5176;&#x548C;&#x82F1;&#x56FD;&#x75C5;&#x4EBA;&#x6709;&#x590D;&#x6742;&#x4E09;&#x7F3A;&#xFF0C;&#x800C; GRACILE &#x82AC;&#x5170;&#x60A3;&#x8005;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x590D;&#x6742;&#x4E09;&#x6D3B;&#x52A8;&#x662F;&#x5728;&#x6B63;&#x5E38;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x610F;&#x5473;&#x7740; BCS1L &#x6709;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x662F;&#x65E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x53C2;&#x4E0E;&#x94C1;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x8F7B;&#x76C8;&#x7684;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x94C1;&#x8FC7;&#x8F7D;&#x3001; &#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7D0A;&#x4E71;&#x662F;&#x7531; BCS1L &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;

GRACILE (growth retardation, aminoaciduria, cholestasis, iron overload, lactacidosis, and early death) syndrome is a recessively inherited lethal disease characterized by fetal growth retardation, lactic acidosis, aminoaciduria, cholestasis, and abnormalities in iron metabolism. We previously localized the causative gene to a 1.5-cM region on chromosome 2q33-37. In the present study, we report the molecular defect causing this metabolic disorder, by identifying a homozygous missense mutation that results in an S78G amino acid change in the BCS1L gene in Finnish patients with GRACILE syndrome, as well as five different mutations in three British infants. BCS1L, a mitochondrial inner-membrane protein, is a chaperone necessary for the assembly of mitochondrial respiratory chain complex III. Pulse-chase experiments performed in COS-1 cells indicated that the S78G amino acid change results in instability of the polypeptide, and yeast complementation studies revealed a functional defect in the mutated BCS1L protein. Four different mutations in the BCS1L gene have been reported elsewhere, in Turkish patients with a distinctly different phenotype. Interestingly, the British and Turkish patients had complex III deficiency, whereas in the Finnish patients with GRACILE syndrome complex III activity was within the normal range, implying that BCS1L has another cellular function that is uncharacterized but essential and is putatively involved in iron metabolism.

GRACILE syndrome, a lethal metabolic disorder with iron overload, is caused by a point mutation in BCS1L.

GRACILE (retard de croissance, aminoacidurie, cholestase, surcharge en fer, lactaeidose et mort pr&eacute;matur&eacute;e) syndrome est une maladie mortelle h&eacute;r&eacute;ditaire r&eacute;cessif, caract&eacute;ris&eacute;e par un retard de croissance f&oelig;tale, acidose lactique, aminoacidurie, cholestase et anomalies dans le m&eacute;tabolisme du fer. Nous avons pr&eacute;c&eacute;demment localis&eacute;s le g&egrave;ne en cause &agrave; une r&eacute;gion de 1,5 cM sur le chromosome 2q33-37. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous rapportons le d&eacute;faut mol&eacute;culaire causant cette maladie m&eacute;tabolique, en identifiant une mutation faux-sens homozygote qui se traduit par un changement d&#39;acide amin&eacute; de S78G dans le g&egrave;ne BCS1L chez les patients finlandais avec syndrome GRACILE, ainsi que cinq mutations diff&eacute;rentes dans trois nourrissons britanniques. BCS1L, une prot&eacute;ine de la membrane interne mitochondriale, est une escorte n&eacute;cessaire pour l&#39;assemblage de mitochondriale respiratoire complexe III de la cha&icirc;ne. Exp&eacute;riences effectu&eacute;es dans des cellules COS-1 indiquent que les acides amin&eacute;s S78G modification entra&icirc;ne l&#39;instabilit&eacute; du polypeptide, et &eacute;tudes de compl&eacute;mentation de levure a r&eacute;v&eacute;l&eacute; un d&eacute;faut fonctionnel de la prot&eacute;ine mut&eacute;e de la BCS1L. Quatre mutations diff&eacute;rentes du g&egrave;ne BCS1L ont &eacute;t&eacute; signal&eacute;es ailleurs, chez les patients turcs ayant un ph&eacute;notype distinct. Fait int&eacute;ressant, les patients britanniques et turcs avaient complexe d&eacute;ficience III, alors que chez les patients finlandais avec GRACILE syndrome complexe III activit&eacute; est dans les limites normales, ce qui implique que le BCS1L a une autre fonction cellulaire qui est ind&eacute;termin&eacute; mais essentielle et est potentiellement impliqu&eacute;es dans le m&eacute;tabolisme du fer.

Syndrome GRACILE, un trouble m&eacute;tabolique l&eacute;tal avec surcharge en fer, est caus&eacute;e par une mutation ponctuelle dans BCS1L.

GRACILE-Syndrom, eine t&#xF6;dliche Stoffwechselkrankheit mit Eisen&#xFC;berladung wird durch eine Punktmutation in BCS1L verursacht.

GRACILE (ritardo di crescita, aminoaciduria, colestasi, sovraccarico di ferro, lactacidosis e morte precoce) la sindrome &egrave; una malattia letale recessiva caratterizzata da ritardo di crescita fetale, acidosi lattica, aminoaciduria, colestasi e anomalie nel metabolismo del ferro. Abbiamo precedentemente localizzato il gene responsabile di una regione di 1,5 cM sul cromosoma 2q33-37. Nel presente studio, riportiamo il difetto molecolare che causano questa malattia metabolica, mediante l&#39;identificazione di una mutazione omozigote missenso che si traduce in un cambiamento dell&#39;amminoacido S78G nel gene BCS1L nei pazienti finlandesi con sindrome GRACILE, cos&igrave; come cinque diverse mutazioni nei tre neonati britannici. BCS1L, una proteina di membrana interna mitocondriale, &egrave; un chaperone necessari per l&#39;assemblaggio di mitocondriale respiratorio complesso III della catena. Gli esperimenti di impulso-chase condotti in cellule COS-1 indicato che l&#39;amminoacido S78G cambiare risultati nell&#39;instabilit&agrave; del polipeptide, e gli studi di complementazione di lievito ha rivelato un difetto funzionale della proteina BCS1L mutato. Quattro diverse mutazioni nel gene BCS1L sono state segnalate altrove, in turchi pazienti con un fenotipo nettamente diverso. &Egrave; interessante notare che, i pazienti britannici e turchi avevano carenza di complesso III, considerando che nei pazienti finlandesi con GRACILE sindrome complessa III attivit&agrave; era all&#39;interno della gamma normale, implicando che BCS1L ha un&#39;altra funzione cellulare che &egrave; prevalentemente coinvolti nel metabolismo del ferro e atipici ma essenziale.

Sindrome GRACILE, una letale malattia metabolica con sovraccarico di ferro, &egrave; causata da una mutazione puntiforme in BCS1L.

GRACILE &#xFF08;&#x767A;&#x80B2;&#x9045;&#x5EF6;&#x3001;aminoaciduria&#x3001;&#x80C6;&#x6C41;&#x3046;&#x3063;&#x6EDE;&#x3001;&#x9244;&#x306E;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC; &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;lactacidosis&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x65E9;&#x671F;&#x6B7B;&#x4EA1;) &#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x306F;&#x3001;&#x80CE;&#x5150;&#x767A;&#x80B2;&#x9045;&#x5EF6;&#x3001;&#x4E73;&#x9178;&#x30A2;&#x30B7;&#x30C9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x3001;aminoaciduria&#x3001;&#x80C6;&#x6C41;&#x3046;&#x3063;&#x6EDE;&#x3068;&#x9244;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x7D99;&#x627F;&#x3057;&#x305F;&#x52A3;&#x6027;&#x81F4;&#x6B7B;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x539F;&#x56E0;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; 2q33 37 &#x4E0A; 1.5 cM &#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x3089;&#x308A;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; BCS1L &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E; S78G &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 5 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x7570; 3 &#x30A4;&#x30AE;&#x30EA;&#x30B9;&#x4E73;&#x5150;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30DB;&#x30E2;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5206;&#x5B50;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;BCS1L &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5185;&#x819C;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x547C;&#x5438;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; III &#x306E;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;COS 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5B9F;&#x884C;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x5B9F;&#x9A13; S78G &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x304C;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9175;&#x6BCD;&#x76F8;&#x88DC;&#x7814;&#x7A76;&#x5909;&#x7570; BCS1L &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x6B20;&#x9665;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;4 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5909;&#x7570; BCS1L &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x4ED6;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x3001;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B3;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E; GRACILE &#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; III &#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x82F1;&#x56FD;&#x3068;&#x30C8;&#x30EB;&#x30B3;&#x60A3;&#x8005;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; III &#x6B20;&#x4E4F; BCS1L &#x672A;&#x540C;&#x5B9A;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x63A8;&#x5B9A;&#x9244;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5225;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;

&#x3059;&#x3089;&#x308A;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x3001;&#x81F4;&#x6B7B;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x3068;&#x9244;&#x306E;&#x904E;&#x8CA0;&#x8377;&#x3001;BCS1L &#x306E;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

GRACILE (&#xC131;&#xC7A5; &#xC9C0;&#xCCB4;, aminoaciduria, cholestasis, &#xCCA0; &#xBD84; &#xACFC;&#xBD80;&#xD558;, lactacidosis, &#xBC0F; &#xC870;&#xAE30; &#xC0AC;&#xB9DD;) &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;&#xC740; &#xD0DC;&#xC544; &#xC131;&#xC7A5; &#xC9C0;&#xCCB4;, &#xC720;&#xC0B0; &#xC99D;, aminoaciduria, cholestasis, &#xBC0F; &#xCCA0; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xC0C1; &#xD2B9;&#xC9D5; recessively &#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; 2q33-37&#xC5D0; 1.5 c m &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xB41C;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD540;&#xB780;&#xB4DC;&#xC5B4; &#xB0A0;&#xC52C;&#xD55C; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; BCS1L &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; S78G &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xBCC0;&#xD654; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; 5 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; 3 &#xC601;&#xAD6D; &#xC720;&#xC544; &#xACB0;&#xACFC; homozygous missense &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xB300;&#xC0AC; &#xC7A5;&#xC560;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. BCS1L, &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB0B4; &#xB9C9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD638;&#xD761; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; III &#xCCB4;&#xC778;. &#xD384;&#xC2A4;-&#xCCB4;&#xC774;&#xC2A4; &#xC2E4;&#xD5D8; COS 1 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xC2DC; S78G &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; polypeptide, &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xBCF4;&#xC644;&#xC131; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; BCS1L &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xACB0;&#xD568;&#xC744; &#xBC1D;&#xD600;. BCS1L &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCC0;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xACF3;, &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD130;&#xD0A4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, &#xC601;&#xAD6D;&#xACFC; &#xD130;&#xD0A4; &#xD658;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; III &#xACB0;&#xD54D;&#xC99D; GRACILE&#xC640; &#xD540;&#xB780;&#xB4DC;&#xC5B4; &#xD658;&#xC790; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; III &#xD65C;&#xB3D9; &#xC815;&#xC0C1; &#xBC94;&#xC704; &#xB0B4;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; bcs1l&#xB294; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC70;&#xB098; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD544;&#xC218; &#xC774;&#xBA70; &#xCCA0; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xAE30;&#xB97C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0;.

&#xB0A0;&#xC52C;&#xD55C; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70;, &#xCCA0; &#xBD84; &#xACFC;&#xBD80;&#xD558;&#xC640; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0AC; &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; bcs1l&#xC5D0; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

GRACILE (retraso de crecimiento, aminoaciduria, colestasis, sobrecarga de hierro, lactacidosis y muerte temprana) es una enfermedad letal hereditaria y recesivo caracterizada por el retraso de crecimiento fetal, acidosis l&aacute;ctica, aminoaciduria, colestasis y anormalidades en el metabolismo del hierro. Que previamente localizado el gen causal a una regi&oacute;n de 1.5 cM en el cromosoma 2q33-37. En el presente estudio, Divulgamos el defecto molecular que causa este desorden metab&oacute;lico, mediante la identificaci&oacute;n de una mutaci&oacute;n sin sentido homocig&oacute;tica que resulta en un cambio del amino&aacute;cido de S78G en el gen de la BCS1L en pacientes finlandeses con s&iacute;ndrome gr&aacute;cil, as&iacute; como cinco mutaciones diferentes en tres ni&ntilde;os brit&aacute;nicos. BCS1L, una prote&iacute;na de membrana interna mitocondrial, es una chaperona necesaria para el montaje de mitocondrial respiratorio complejo III de la cadena. Pulso-persiga los experimentos realizados en las c&eacute;lulas COS-1 indican que el amino&aacute;cido S78G cambiar resultados en inestabilidad del polip&eacute;ptido y levadura complementaci&oacute;n estudios revelaron un defecto funcional de la prote&iacute;na mutada de BCS1L. Cuatro diversas mutaciones en el gen de la BCS1L han divulgado en otra parte, en pacientes turcos con un fenotipo claramente diferente. Curiosamente, los pacientes brit&aacute;nicos y turcos ten&iacute;an deficiencia del complejo III, mientras que en los pacientes finlandeses con GRACILE s&iacute;ndrome compleja III actividad era dentro de la gama normal, lo que implica que BCS1L tiene otra funci&oacute;n celular que es esencial pero no caracterizados y est&aacute; supuestamente involucrado en el metabolismo del hierro.

S&iacute;ndrome gr&aacute;cil, un desorden metab&oacute;lico letal con sobrecarga de hierro, es causado por una mutaci&oacute;n de punto en BCS1L.

Sec1/Munc18 (SM) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x540C;&#x6E90;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N ethylmaleimide &#x654F;&#x611F;&#x56E0;&#x5B50;&#x9644;&#x4EF6;&#x86CB;&#x767D;&#x53D7;&#x4F53; (&#x9677;&#x9631;) &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x56CA;&#x6CE1;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x878D;&#x5408;&#x4E4B;&#x524D;, &#x56CA;&#x6CE1;&#x505C;&#x9760;&#x5230;&#x7279;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x819C;&#x3002;&#x89C4;&#x4F8B;&#x7684;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5BF9;&#x63A5;&#x662F;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6240;&#x6709;&#x7684; SM &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x6B64;&#x8F83;&#x65E9;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684;&#x4E13;&#x4E1A;&#x5316;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; Sec1p &#x4F3C;&#x4E4E;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x505C;&#x9760;&#x53EA;&#x540E;&#x6C34;&#x6CE1;&#x548C;&#x7F51;&#x7F57;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x8FDB;&#x884C;&#x7EC4;&#x88C5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x9175;&#x6BCD; Sec1p &#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x4E4B;&#x524D;, &#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x5927;&#x4F1A;&#x53D1;&#x8A00;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301; SM &#x86CB;&#x767D;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5BF9;&#x63A5;&#x4E0E;&#x878D;&#x5408;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7C7B;&#x7684; sec1 &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;A &#x7C7B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x53CA;&#x5206;&#x6CCC;&#x5728;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x5927;&#x4F1A;&#x524D;&#x4E00;&#x6B65;&#x7D27;&#x7D27;&#x5730;&#x88AB;&#x963B;&#x6B62;&#x3002;B &#x7C7B;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5DF2;&#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7F3A;&#x9677;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x53CA;&#x5206;&#x6CCC;&#x7F3A;&#x9677;&#x3002;&#x6620;&#x5C04;&#x5230; SM &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7ED3;&#x6784;&#x7A81;&#x53D8;&#x6D89;&#x53CA;&#x5916;&#x56F4;&#x6346;&#x7ED1;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#xFF0C;&#x505C;&#x9760;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x6DF1;&#x6C9F;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x9762; nSec1/Munc-18&#x3001; Sec1p &#x548C; exocytic &#x7F51;&#x7F57;&#x590D;&#x6742;&#x4E4B;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9;&#x816D;&#x88C2;&#x4FEE;&#x590D;&#x540E;&#x7684; syntaxin-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

&#x9175;&#x6BCD; Sec1p &#x51FD;&#x6570;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5BF9;&#x63A5;&#x3002;

Sec1/Munc18 (SM) proteins bind cognate soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor (SNARE) complexes and stimulate vesicle membrane fusion. Before fusion, vesicles are docked to specific target membranes. Regulation of vesicle docking is attributed to some but not all SM proteins, suggesting specialization of this earlier function. Yeast Sec1p seems to function only after vesicles are docked and SNARE complexes are assembled. Here, we show that yeast Sec1p is required before and after SNARE complex assembly, in support of general requirements for SM proteins in both vesicle docking and fusion. Two classes of sec1 mutants were isolated. Class A mutants are tightly blocked in cell growth and secretion at a step before SNARE complex assembly. Class B mutants have a SNARE complex binding defect, with a range in severity of cell growth and secretion defects. Mapping the mutations onto an SM protein structure implicates a peripheral bundle of helices for the early, docking function and a deep groove, opposite the syntaxin-binding cleft on nSec1/Munc-18, for the interaction between Sec1p and the exocytic SNARE complex.

Yeast Sec1p functions before and after vesicle docking.

Sec1/Munc18 (SM) prot&eacute;ines lient apparent&eacute;s sensible N-&eacute;thylmal&eacute;imide facteur accessoire prot&eacute;ine du r&eacute;cepteur (SNARE) complexes solubles et stimulent la fusion des v&eacute;sicules membranaires. Avant la fusion, les v&eacute;sicules sont ancr&eacute;s aux membranes de cible sp&eacute;cifique. R&egrave;glement d&#39;accostage de la v&eacute;sicule est attribu&eacute;e &agrave; certains mais pas tous les prot&eacute;ines SM, sugg&eacute;rant la sp&eacute;cialisation de cette fonction ant&eacute;rieure. Levure Sec1p semble fonctionner seulement apr&egrave;s v&eacute;sicules sont ancr&eacute;s et complexes SNARE sont assembl&eacute;s. Ici, nous montrons que la levure Sec1p est requise avant et apr&egrave;s le montage complexe SNARE, &agrave; l&#39;appui des exigences g&eacute;n&eacute;rales relatives aux prot&eacute;ines SM dans les v&eacute;sicules d&#39;amarrage et fusion. Deux classes de sec1 mutants ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s. Des mutants de classe A sont fermement bloqu&eacute;s dans la croissance cellulaire et la s&eacute;cr&eacute;tion &agrave; une &eacute;tape avant l&#39;assemblage complexe SNARE. Des mutants de classe B ont un d&eacute;faut de liaison complexe SNARE, avec une gamme de s&eacute;v&eacute;rit&eacute; de la croissance des cellules et des d&eacute;fauts de s&eacute;cr&eacute;tion. Cartographie les mutations sur une structure de prot&eacute;ine SM implique un ensemble de p&eacute;riph&eacute;rique des h&eacute;lices pour le d&eacute;but, amarrage de fonction et un profond sillon, en face de la syntaxine-liaison soud&eacute;s sur nSec1/Munc-18, pour l&#39;interaction entre Sec1p et la s&eacute;cr&eacute;tion du complexe SNARE.

Levure Sec1p fonctions avant et apr&egrave;s la v&eacute;sicule d&#39;amarrage.

S1/Munc18 (SM) Proteine binden ige l&ouml;slichen N-Ethylmaleimid-Sensitive Faktor Anlage Rezeptor (SNARE) Proteinkomplexe und Vesikel Membrane Fusion zu stimulieren. Vor der Fusion werden die Bl&auml;schen an bestimmte Ziel-Membranen angedockt. Regulierung der Vesikel andocken wird einige aber nicht alle SM-Proteine, die darauf hindeutet Spezialisierung dieser fr&uuml;heren Funktion zugeschrieben. Hefe-Sec1p scheint funktioniert nur nach Bl&auml;schen sind angedockt und SNARE-komplexe sind montiert. Hier zeigen wir, dass Hefe Sec1p vor und nach der SNARE-komplexe Montage, zur Unterst&uuml;tzung der allgemeinen Anforderungen f&uuml;r SM-Proteine in Vesikel Andocken und Fusion erforderlich ist. Zwei Klassen von S1 Mutanten wurden isoliert. Klasse A-Mutanten sind eng in Zellwachstum und Sekretion bei einem Schritt vor SNARE komplexe Montage blockiert. Klasse B-Mutanten haben einen SNARE-komplexe Bindung defekt, mit einer Palette in Schweregrad von Zellwachstum und Sekretion M&auml;ngel. Zuordnung der Mutations auf eine SM-Protein-Struktur impliziert eine periphere B&uuml;ndel von Helices f&uuml;r den fr&uuml;hen, docking-Funktion und einer Rillen-, gegen&uuml;ber der Gaumenspalte auf nSec1/Munc-18, f&uuml;r die Interaktion zwischen Sec1p und der Exocytic SNARE-komplexe Syntaxin-Bindung.

Hefe Sec1p Funktionen vor und nach der Vesikel andocken.

Munc18/sec1 (SM) proteine legano cognate N-ethylmaleimide-sensibile fattore accessorio proteina recettore (rullante) complessi solubili e stimolano la fusione di membrana della vescicola. Prima fusione, le vescicole sono ancorate alle membrane bersaglio specifico. Regolamento della vescicola docking &egrave; attribuito ad alcune ma non tutte le proteine SM, suggerendo la specializzazione della funzione precedente. Lievito Sec1p sembra funzionare solo dopo le vescicole sono ancorate e complessi SNARE vengono assemblati. Qui, ci mostrano che il lievito Sec1p &egrave; richiesto prima e dopo l&#39;assemblaggio complesso SNARE, a sostegno di requisiti generali per le proteine SM in vescicola docking e la fusione. Due classi di sec1 mutanti sono state isolate. Mutanti di classe A sono saldamente bloccate nella crescita delle cellule e la secrezione a un passo prima dell&#39;assemblaggio complesso SNARE. Mutanti di classe B hanno un difetto di associazione complessa di rullante, con una gamma in gravit&agrave; della crescita cellulare e difetti di secrezione. Mappatura le mutazioni su una struttura di proteina SM implica un fascio periferico di eliche per primi, docking funzione e un solco profondo, di fronte la sintaxina-associazione schisi su nSec1/Munc-18, per l&#39;interazione tra Sec1p e il exocytic complesso SNARE.

Prima e dopo l&#39;attracco la vescicola di lievito Sec1p funzioni.

Sec1/Munc18 (SM) &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x540C;&#x65CF;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; N n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; (&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x30C9;&#x30E9;&#x30E0;) &#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x819C;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x878D;&#x5408;&#x524D;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x819C;&#x306B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x7279;&#x6B8A;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x304C;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B; SM &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3078;&#x5E30;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD; Sec1p &#x5F8C;&#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x306E;&#x307F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SM &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x5C0F;&#x80DE;&#x3068;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x8981;&#x4EF6;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x524D;&#x5F8C;&#x9175;&#x6BCD; Sec1p &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E; sec1 &#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; A &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3063;&#x304B;&#x308A;&#x3068;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9; B &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x91CD;&#x5927;&#x5EA6;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306E; SNARE &#x8907;&#x5408;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6B20;&#x9665;&#x3068;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x6B20;&#x9665;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SM &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4E0A;&#x306B;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3078;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x675F;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x3001;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068; nSec1/Munc - 18&#x3001;Sec1p &#x3068; exocytic &#x30B9;&#x30CD;&#x30A2;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x88C2;&#x30B7;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306E;&#x6DF1;&#x3044;&#x6E9D;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3065;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sec1p &#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x5F8C;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D9;&#x30B7;&#x30AF;&#x30EB;&#x9175;&#x6BCD;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Sec1/Munc18 (SM) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB3D9;&#xC871; &#xC131; N ethylmaleimide &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC694;&#xC18C; &#xCCA8;&#xBD80; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (&#xC62C; &#xBB34;) &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; &#xC18C;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xC790;&#xADF9;. &#xD4E8;&#xC804;, &#xC804;&#xC5D0; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB294; &#xD2B9;&#xC815; &#xB300;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC18C;&#xD3EC; &#xB3C4;&#xD0B9;&#xC758; &#xADDC;&#xC815;&#xC740;&#xC774; &#xC774;&#xC804; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xD2B9;&#xC218;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xBD80;&#xB294; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBD80; SM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD6A8; &#xBAA8; Sec1p &#xC791;&#xB3D9; &#xD6C4; &#xC18C;&#xD3EC;&#xB9CC; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD558; &#xACE0; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xB294; &#xAC83; &#xAC19;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE30; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBC0F; &#xD4E8;&#xC804; SM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xC804;&#xD6C4; &#xD6A8; Sec1p &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; sec1 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; A &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9C9;&#xD78C;&#xB2E4;. &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; B &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC758; &#xC2EC;&#xAC01;&#xB3C4;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xC640; &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xACB0;&#xD568; &#xBC0F; &#xBD84; &#xBE44; &#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. SM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9E4;&#xD551; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xD3EC;&#xD568; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xBC88;&#xB4E4; &#xCD08;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xAE4A;&#xC740; &#xD648; syntaxin &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; nSec1/Munc-18 Sec1p exocytic &#xC62C; &#xBB34; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC18;&#xB300;.

&#xB3C4;&#xD0B9; &#xAE30; &#xC804;&#xD6C4; Sec1p &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xD6A8; &#xBAA8;.

Sec1/Munc18 (SM) prote&iacute;nas unen cognados sensibles a N-etilmaleimida factor accesorio prote&iacute;na del receptor (trampa) complejos solubles y estimulan la fusi&oacute;n de la membrana de ves&iacute;cula. Antes de la fusi&oacute;n, las ves&iacute;culas se acoplan a las membranas espec&iacute;ficos. Reglamento de acoplamiento de la ves&iacute;cula se atribuye a algunas pero no todas prote&iacute;nas SM, sugiriendo la especializaci&oacute;n de esta funci&oacute;n anterior. Levadura Sec1p parece funcionar s&oacute;lo despu&eacute;s las ves&iacute;culas se acoplan y se ensamblan los complejos de la trampa. Aqu&iacute;, demostramos que la levadura Sec1p se requiere antes y despu&eacute;s del montaje complejo SNARE, en apoyo de requisitos generales para las prote&iacute;nas de SM en la ves&iacute;cula de acoplamiento y de la fusi&oacute;n. Se aislaron dos clases de sec1 mutantes. Mutantes de la clase A est&aacute;n firmemente bloqueados en crecimiento celular y la secreci&oacute;n en un paso antes del montaje complejo SNARE. Mutantes de clase B tienen un defecto de enlace complejo SNARE, con un rango de severidad del crecimiento celular y defectos de la secreci&oacute;n. Mapeo de las mutaciones en la estructura de la prote&iacute;na de una SM implica un conjunto perif&eacute;rico de h&eacute;lices para la primera, funci&oacute;n y un surco profundo, frente a la Uni&oacute;n sintaxina hendido en nSec1-Munc-18, para la interacci&oacute;n entre Sec1p y el exoc&iacute;ticas complejo SNARE.

Levadura Sec1p funciones antes y despu&eacute;s del acoplamiento de la ves&iacute;cula.

&#x6076;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x663E;&#x793A;&#x4E0D;&#x826F;&#x53CD;&#x5E94;&#x7387;&#x4F50;&#x5242;&#x7597;&#x6CD5;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x56FA;&#x6709;&#x7684;&#x62B5;&#x6297;&#x5BF9;&#x6D46;&#x6DB2;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x963B;&#x529B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x514B;&#x670D;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x901A;&#x8FC7;&#x9488;&#x5BF9; eEF1A &#x4F38;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E; narciclasine&#xFF0C;&#x77F3;&#x849C;&#x79D1;&#x5F02;&#x55B9;&#x8BFA;&#x916E;&#x63A7;&#x5236;&#x690D;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x3002;Narciclasine &#x663E;&#x793A; IC(50) &#x589E;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x95EE;&#x5176;&#x6D46;&#x6DB2;&#x523A;&#x6FC0;&#x6297;&#x6027;&#x6C34;&#x5E73; 30-100 nM &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x503C;&#x3002;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x80BF;&#x5757;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x8F83;&#x5C0F;&#x5F97;&#x591A;&#x3002;&#x65E0;&#x6BD2;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#xFF0C;narciclasine &#x4E5F;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8; (P = 0.004) &#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x79FB;&#x690D;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CB;&#x4EA1;&#x6297;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x94ED;&#x8BB0;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x3002;Narciclasine &#x4E0E; eEF1A &#x9488;&#x5BF9; (50 nM&#xFF09; &#x5BFC;&#x81F4; 1&#xFF09; &#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x89E3;&#x4F53;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80DE;&#x8D28;&#x5206;&#x88C2;&#x635F;&#x5BB3;&#x548C; 2&#xFF09; &#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x6210;&#x969C;&#x788D; &#xFF08;&#x4F38;&#x957F;&#x548C;&#x542F;&#x52A8;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728;&#x9AD8;&#x5242;&#x91CF;&#x53EA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x51CB;&#x4EA1; &#xFF08;&ge;200 nM&#xFF09;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x5BF9;&#x63A5;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x548C;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x5316;&#x8BC1;&#x5B9E; narciclasine &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x91CD;&#x7EC4;&#x4EBA;&#x548C;&#x9175;&#x6BCD;&#x51C0;&#x5316; eEF1A &#x5728; nanomolar &#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E3A;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6216;&#x4F38;&#x957F;&#x56E0;&#x7D20; 2&#xFF0C;&#x4E0E; 5 nM narciclasine &#x662F;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E0E; eEF1A &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6346;&#x7ED1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;eEF1A &#x662F;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6253;&#x51FB;&#x6076;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x65E0;&#x8BBA;&#x5176;&#x51CB;&#x4EA1;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#x8C03;&#x8282; narciclasine &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x591A;&#x6548;&#x6027;&#x3002;-

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x9879;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x6253;&#x51FB;&#x6076;&#x6027;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x77F3;&#x849C;&#x79D1; isocarbostyrils &#x4E0E; eEF1A &#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Melanomas display poor response rates to adjuvant therapies because of their intrinsic resistance to proapoptotic stimuli. This study indicates that such resistance can be overcome, at least partly, through the targeting of eEF1A elongation factor with narciclasine, an Amaryllidaceae isocarbostyril controlling plant growth. Narciclasine displays IC(50) growth inhibitory values between 30-100 nM in melanoma cell lines, irrespective of their levels of resistance to proapoptotic stimuli. Normal noncancerous cell lines are much less affected. At nontoxic doses, narciclasine also significantly improves (P=0.004) the survival of mice bearing metastatic apoptosis-resistant melanoma xenografts in their brain. The eEF1A targeting with narciclasine (50 nM) leads to 1) marked actin cytoskeleton disorganization, resulting in cytokinesis impairment, and 2) protein synthesis impairment (elongation and initiation steps), whereas apoptosis is induced at higher doses only (â‰¥200 nM). In addition to molecular docking validation and identification of potential binding sites, we biochemically confirmed that narciclasine directly binds to human recombinant and yeast-purified eEF1A in a nanomolar range, but not to actin or elongation factor 2, and that 5 nM narciclasine is sufficient to impair eEF1A-related actin bundling activity. eEF1A is thus a potential target to combat melanomas regardless of their apoptosis-sensitivity, and this finding reconciles the pleiotropic cytostatic of narciclasine. -

Targeting of eEF1A with Amaryllidaceae isocarbostyrils as a strategy to combat melanomas.

Les m&eacute;lanomes affichent les fr&eacute;quences de mauvaise r&eacute;ponse aux traitements adjuvants en raison de leur r&eacute;sistance aux stimuli pro-apoptotique. Cette &eacute;tude indique que cette r&eacute;sistance peut &ecirc;tre surmont&eacute;e, au moins en partie, &agrave; travers le ciblage du facteur d&#39;&eacute;longation eEF1A avec narciclasine, un isocarbostyril Amaryllidac&eacute;es contr&ocirc;lant la croissance des plantes. Narciclasine affiche IC (50) valeurs inhibitrices de croissance entre 30-100 nM dans des lign&eacute;es de cellules de m&eacute;lanome, quel que soit leur niveau de r&eacute;sistance aux stimuli pro-apoptotique. Lign&eacute;es de cellules non canc&eacute;reuses normaux sont beaucoup moins affect&eacute;es. &Agrave; des doses non toxiques, narciclasine am&eacute;liore &eacute;galement de mani&egrave;re significative (P = 0,004) la survie des souris porteuses de x&eacute;nogreffes d&#39;un m&eacute;lanome m&eacute;tastatique r&eacute;sistant &agrave; l&#39;apoptose dans leur cerveau. Le ciblage d&#39;eEF1A avec narciclasine (50 nM) conduit &agrave; 1) marqu&eacute; actine cytosquelette d&eacute;sorganisation, aboutissant &agrave; la d&eacute;ficience de la cytokin&egrave;se et insuffisance de synth&egrave;se 2) prot&eacute;ine (allongement et initiation &eacute;tapes), tandis que l&#39;apoptose est induite uniquement &agrave; des doses &eacute;lev&eacute;es (&ge;200 nM). En plus de la validation d&#39;amarrage mol&eacute;culaire et l&#39;identification des sites potentiels de liaison, nous avons confirm&eacute; biochimiquement que narciclasine se lie directement &agrave; humaine recombinante et eEF1A levure purifi&eacute; dans un nanomolaire, mais pas &agrave; l&#39;actine ou facteur d&#39;&eacute;longation 2 et que 5 nM narciclasine suffit &agrave; alt&eacute;rer l&#39;activit&eacute; au groupement d&#39;actine li&eacute;es &agrave; eEF1A. eEF1A est donc une cible potentielle pour lutter contre les m&eacute;lanomes, quel que soit leur sensibilit&eacute; l&#39;apoptose, et cette constatation r&eacute;concilie les cytostatiques pl&eacute;iotrope de narciclasine. -

Ciblage des eEF1A avec isocarbostyriles Amaryllidaceae comme une strat&eacute;gie de lutte contre le m&eacute;lanome.

Melanome zeigen schlechte Response-Raten f&uuml;r adjuvante Therapien wegen ihres inneren Widerstandes auf Proapoptotischen Reize. Diese Studie zeigt, dass dieser Widerstand kann, zumindest teilweise, &uuml;berwunden werden durch die gezielte eEF1A Dehnung Faktor mit Narciclasine, ein Amaryllidaceae Isocarbostyril Pflanzenwachstum steuern. Narciclasine zeigt IC (50) Wachstum hemmenden Werte zwischen 30-100 nM in Melanom-Zelllinien, unabh&auml;ngig von ihrer unterschiedlichen Widerstand gegen Proapoptotischen Reize. Normale noncancerous Zelllinien sind viel weniger betroffen. Bei Dosen ungiftig, Narciclasine auch erheblich verbessert (P = 0,004) das &Uuml;berleben der M&auml;use mit metastasiertem Melanom der Apoptose-resistenten Xenografts in ihrem Gehirn. Die eEF1A-targeting mit Narciclasine (50 nM) f&uuml;hrt zu 1) markierte Aktin Zytoskeletts Desorganisation, was Zellteilung Wertminderung und 2) Protein-Synthese-Wertminderungen (Dehnung und Initiation Schritte), w&auml;hrend bei h&ouml;heren Dosen nur Apoptose induziert wird (&ge;200 nM). Neben molekularen docking-Validierung und Identifizierung von m&ouml;glichen Bindungsstellen best&auml;tigten wir biochemisch, dass Narciclasine direkt an menschlichen rekombinante und Hefe-gereinigt eEF1A in einem Nanomolar-Bereich bindet, aber reicht es nicht 5 nM Narciclasine Aktin oder Dehnung Faktor 2, Finanz-und eEF1A-bezogene Aktin B&uuml;ndelung Aktivit&auml;t zu beeintr&auml;chtigen. eEF1A ist somit ein potenzielles Ziel zur Bek&auml;mpfung der Melanome unabh&auml;ngig von deren Apoptose-Sensitivit&auml;t, und dieser Befund stimmt der pleiotropen zytostatisch Narciclasine. -

Ausrichtung der eEF1A mit Amaryllidaceae Isocarbostyrils als Strategie zur Bek&auml;mpfung der Melanome.

Melanomi visualizzare tariffe di scarsa risposta alle terapie adiuvanti a causa della loro intrinseca resistenza agli stimoli Miselli. Questo studio indica che tale resistenza pu&ograve; essere superata, almeno in parte, attraverso il targeting di fattore di allungamento eEF1A con narciclasine, un isocarbostyril Amaryllidaceae controllando la crescita della pianta. Narciclasine Visualizza IC(50) crescita inibitori valori tra 30-100 nM in linee di cellule di melanoma, indipendentemente dal loro livello di resistenza agli stimoli Miselli. Linee di cellule non tumorali normali sono molto meno colpiti. A dosi non tossici, narciclasine migliora anche significativamente (P = 0,004) la sopravvivenza dei topi cuscinetto xenotrapianti di melanoma metastatico resistente all&#39;apoptosi nel loro cervello. Il targeting per eEF1A con narciclasine (50 nM) conduce al citoscheletro actina 1) marcata disorganizzazione, con conseguente compromissione Citocinesi in e 2) proteina sintesi svalutazione (allungamento e iniziazione passi), considerando che l&#39;apoptosi sono indotta a dosi elevate solo (&ge; 200 nM). Oltre alla convalida docking molecolare e l&#39;identificazione di potenziali siti di legame, abbiamo confermato biochimicamente che narciclasine associa direttamente all&#39;umana ricombinante e purificato di lievito eEF1A in una gamma di nanomolari, ma non di actina o fattore di allungamento 2 e che 5 nM narciclasine &egrave; sufficiente per compromettere attivit&agrave; impacchettante actina eEF1A-correlati. eEF1A &egrave; quindi un potenziale bersaglio per combattere melanomi indipendentemente dal loro apoptosi-sensibilit&agrave;, e questa constatazione riconcilia i citostatici pleiotropico di narciclasine. -

Targeting di eEF1A con isocarbostyrils Amaryllidaceae come una strategia per combattere i melanomi.

&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x8853;&#x5F8C;&#x88DC;&#x52A9;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x8CA7;&#x3057;&#x3044;&#x53CD;&#x5FDC;&#x7387;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x62B5;&#x6297;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;eEF1A &#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; narciclasine&#x3001;&#x690D;&#x7269;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30D2;&#x30AC;&#x30F3;&#x30D0;&#x30CA;&#x79D1; isocarbostyril &#x3068;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x514B;&#x670D;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Narciclasine 30-100 nM &#x60AA;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x81EA;&#x5206;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x304F;&#x9593; ic50 &#x5024; &#xFF08;50 &#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x5024;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x901A;&#x5E38;&#x975E;&#x764C;&#x6027;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x884C;&#x306F;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7121;&#x6BD2;&#x306A;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x3001;narciclasine &#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5411;&#x4E0A; &#xFF08;P p=0.004) &#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x8133;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x8EE2;&#x79FB;&#x6027;&#x7570;&#x7A2E;&#x79FB;&#x690D;&#x7247;&#x3092;&#x8EF8;&#x53D7;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3002;EEF1A narciclasine &#x3068;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8; &#xFF08;50 nM&#xFF09; &#x9AD8;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5206;&#x88C2;&#x306E;&#x6E1B;&#x640D;&#x3068; 2&#xFF09; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x6E1B;&#x640D; (&#x624B;&#x9806;) &#x4F38;&#x9577;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x958B;&#x59CB;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; 1) &#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x89E3;&#x4F53;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#xFF08;200 nM&#xFF09; &#x3092;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x691C;&#x8A3C;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684; narciclasine &#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x7CBE;&#x88FD; eEF1A &#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;&#x7BC4;&#x56F2;&#x5185;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3084;&#x4F38;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; 2 &#x65E5;&#x306B; 5 nM narciclasine &#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E; eEF1A &#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EB;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x306B;&#x306F;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3002;eEF1A &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x306E;&#x30A2;&#x30DD;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x611F;&#x5EA6;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306A;&#x304F;&#x6226;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B; narciclasine &#x306E;&#x591A;&#x9762; cytostatic &#x8ABF;&#x6574;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;-

&#x30D2;&#x30AC;&#x30F3;&#x30D0;&#x30CA;&#x79D1; isocarbostyrils &#x3068; eEF1A &#x306E;&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x3068;&#x6226;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3002;

&#xC815;&#xBA74;&#xC744; proapoptotic &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC800;&#xD56D; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC870; &#xC694;&#xBC95;&#xC744; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC800;&#xD56D; &#xADF9;&#xBCF5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;, &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, narciclasine, &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC120;&#xD654;&#xACFC; isocarbostyril&#xC640; eEF1A &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xB300;&#xC0C1; &#xC9C0;&#xC815;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Narciclasine IC(50) proapoptotic &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0; 30-100 nM &#xC0AC;&#xC774; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xAC12;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; noncancerous &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB35C; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Narciclasine &#xBB34; &#xB3C5;&#xC131; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xB610;&#xD55C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xD5A5;&#xC0C1; (P = 0.004) &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB1CC;&#xC5D0; &#xC804;&#xC774;&#xC131; apoptosis &#xBC29;&#xC9C0; &#xD751;&#xC0C9; xenografts &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xC0DD;&#xC874;. Narciclasine&#xC640; eEF1A &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; (50 nM) 1) &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xD574;&#xCCB4;, apoptosis &#xB192;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xB9CC; &#xC720;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; 2) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC7A5;&#xC560; (&#xC2E0;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xB2E8;&#xACC4;) &#xBC0F; cytokinesis &#xC7A5;&#xC560;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB85C; (&ge;200 nM)&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC640; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD654;&#xD559;&#xC801; narciclasine &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC0F; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC815;&#xD654; eEF1A nanomolar &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xB610;&#xB294; &#xC5F0;&#xC2E0; &#xC728; &#xACC4;&#xC218; 2&#xC640; &#xD558; &#xD558; 5 nM narciclasine&#xB294; eEF1A &#xAD00;&#xB828; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC88;&#xB4E4; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC545;&#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC904; &#xC218;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. Eef1a&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; apoptosis &#xAC10;&#xB3C4; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xC815;&#xBA74;&#xC744; &#xB300;&#xCC98; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C;&#xAC00; &#xACE0;&#xC774; &#xCC3E;&#xB294; narciclasine&#xC758; &#xB2E4; &#xBA74; &#xBC1C;&#xD604; &#xC131; cytostatic &#xD654;&#xD574;. -

&#xC218;&#xC120;&#xD654;&#xACFC; isocarbostyrils&#xC640; Eef1a&#xC758; &#xC815;&#xBA74;&#xC744; &#xB300;&#xCC98; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Melanomas muestran tasas de respuesta pobre a terapias adyuvantes debido a su resistencia intr&iacute;nseca a los est&iacute;mulos proapopt&oacute;ticas. Este estudio indica que tal resistencia puede ser superada, al menos en parte, mediante la selecci&oacute;n del factor de elongaci&oacute;n de eEF1A con narciclasine, un isocarbostyril de Amaryllidaceae controlar el crecimiento de las plantas. Narciclasine muestra IC(50) crecimiento inhibitorios valores entre 30-100 nM en l&iacute;neas celulares de melanoma, independientemente de sus niveles de resistencia a los est&iacute;mulos proapopt&oacute;ticas. L&iacute;neas de c&eacute;lulas no cancerosas normal son mucho menos afectadas. En dosis no t&oacute;xicos, narciclasine tambi&eacute;n mejora de forma significativa (P = 0.004) la supervivencia de ratones xenoinjertos melanoma metast&aacute;sico resistente a la apoptosis en su cerebro. La selecci&oacute;n de eEF1A con narciclasine (50 nM) conduce a la actinia 1) marcada citoesqueleto desorganizaci&oacute;n, resultando en el deterioro de la citocinesis y deterioro de s&iacute;ntesis 2) prote&iacute;na (pasos de alargamiento y de iniciaci&oacute;n), mientras que se induce apoptosis en dosis m&aacute;s altas s&oacute;lo (&ge;200 nM). Adem&aacute;s de validaci&oacute;n acoplamiento molecular e identificaci&oacute;n de sitios potenciales de Uni&oacute;n, bioqu&iacute;micamente confirmamos que narciclasine se une directamente a recombinante humano y eEF1A levadura purificado en un rango nanomolar, pero no a actina o factor 2 de elongaci&oacute;n y 5 nM narciclasine es suficiente para afectar la actividad liar actina relacionados con eEF1A. eEF1A es un objetivo potencial para combatir los melanomas independientemente de su sensibilidad a la apoptosis, y este hallazgo reconcilia los citost&aacute;ticos pleiotr&oacute;pico de narciclasine. -

Jenna Hutton

Department of Molecular Genetics,
Microbiology,
and Immunology,
Department of Molecular Genetics, Microbiology, and Immunology

University of Medicine and Dentistry of New Jersey, Robert Wood Johnson Medical School

Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

Jenna Hutton

Department of Molecular Genetics,Microbiology,and Immunology,Department of Molecular Genetics, Microbiology, and Immunology

University of Medicine and Dentistry of New Jersey, Robert Wood Johnson Medical School

Eukaryotic Polyribosome Profile Analysis

Department of Molecular Genetics,
Microbiology,
and Immunology,
Department of Molecular Genetics, Microbiology, and Immunology