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Fluorescence Lifetime Imaging of Molecular Rotors in Living Cells

Diffusion is often an important rate-determining step in chemical reactions or biological processes and plays a role in a wide range of intracellular ...

King's College London

We report the synthesis, spectroscopic properties and intracellular imaging of recombinant antibody single chain fragment (scFv) conjugates with photosensitizers used for photodynamic therapy of cancer (PDT). Two widely-studied photosensitizers have been selected: preclinical pyropheophorbide-a (PPa) and verteporfin (VP), which has been clinically approved for the treatment of acute macular degeneration (Visudyne). Pyropheophorbide-a and verteporfin have been conjugated to an anti-HER2 scFv containing on average ten photosensitizer molecules per scFv with a small contribution (<or=20%) from non-covalently bound molecules. Confocal fluorescence microscopy demonstrates good cellular uptake of PPa conjugate with the HER2-positive cell line, SKOV-3, while negligible cell uptake is demonstrated for the HER2-negative cell line, KB. For the VP conjugate, increased rate of cellular uptake and prolonged retention in SKOV-3 cells is observed compared to free photosensitizer. In clinical applications this could provide increased potency and desired selectivity towards malignant tissue, leaving surrounding healthy tissue unharmed and reducing skin photosensitivity. The present study highlights the usefulness of photosensitizer immunoconjugates with scFvs for targeted PDT.

Fluorescence characterisation of multiply-loaded anti-HER2 single chain Fv-photosensitizer conjugates suitable for photodynamic therapy.

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x5149;&#x8C31;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x80DE;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53; (&#x6297;&#x4F53;) &#x5171;&#x8F6D;&#x4E0E;&#x5149;&#x654F;&#x5242;&#x7528;&#x4E8E;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5; (PDT) &#x764C;&#x75C7;&#x3002;&#x5DF2;&#x9009;&#x5B9A;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7814;&#x7A76;&#x5149;&#x654F;&#x5242;&#xFF1A; &#x4E34;&#x5E8A;&#x524D; pyropheophorbide a (PPa) &#x548C;&#x7EF4; (VP) &#x5DF2;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x6CBB;&#x7597;&#x6025;&#x6027;&#x9EC4;&#x6591;&#x53D8;&#x6027; (Visudyne) &#x7684;&#x6279;&#x51C6;&#x3002;Pyropheophorbide-a &#x548C;&#x7EF4;&#x5DF2;&#x88AB;&#x5171;&#x8F6D;&#x4E9A;&#x5411;&#x6297; HER2 &#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x5E73;&#x5747;&#x542B; 10 &#x4E2A;&#x5149;&#x654F;&#x5242;&#x5206;&#x5B50;&#x6BCF;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x4E0E;&#x5C0F;&#x5C0F;&#x7684;&#x8D21;&#x732E; &#xFF08;&lt; &#x6216; = 20%) &#x4ECE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x975E;&#x5171;&#x4EF7;&#x952E;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x6280;&#x672F;&#x6F14;&#x793A;&#x597D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6444;&#x53D6;&#x7684; PPa &#x5171;&#x8F6D;&#x4E0E; HER2 &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#xFF0C;SKOV-3&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x4E3A; HER2 &#x9634;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x884C;&#xFF0C;KB&#xFF0C;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5FFD;&#x7565;&#x4E0D;&#x8BA1;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x526F;&#x603B;&#x88C1;&#x5171;&#x8F6D;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6444;&#x53D6;&#x548C;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728; SKOV-3 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7387;&#x88AB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x5149;&#x654F;&#x5242;&#x3002;&#x5728;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x4E2D;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x6548;&#x80FD;&#xFF0C;&#x548C;&#x6240;&#x9700;&#x5BF9;&#x6076;&#x6027;&#x7EC4;&#x7EC7;&#xFF0C;&#x79BB;&#x5F00;&#x5468;&#x56F4;&#x5065;&#x5EB7;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6CA1;&#x6709;&#x53D7;&#x5230;&#x4F24;&#x5BB3;&#xFF0C;&#x5E76;&#x51CF;&#x5C11;&#x76AE;&#x80A4;&#x5149;&#x654F;&#x6027;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x7A81;&#x51FA;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027; PDT &#x7684;&#x5149;&#x654F;&#x5242;&#x514D;&#x75AB;&#x4EA4;&#x8054;&#x5242;&#x4E0E; scFvs &#x7684;&#x7528;&#x5904;&#x3002;

&#x4E58;&#x6CD5;-&#x52A0;&#x8F7D;&#x6297; HER2 &#x5355;&#x94FE; Fv &#x5149;&#x654F;&#x5242;&#x8367;&#x5149;&#x5B9A;&#x6027;&#x5171;&#x8F6D;&#x9002;&#x5408;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;

Nous rapportons la synth&#xE8;se, les propri&#xE9;t&#xE9;s spectroscopiques et d&#x26;#39;imagerie intracellulaire de recombinaison fragment de cha&#xEE;ne d&#x26;#39;anticorps unique (scFv) se conjugue avec des photosensibilisateurs utilis&#xE9;s pour la th&#xE9;rapie photodynamique du cancer (HAP). Deux photosensibilisateurs largement &#xE9;tudi&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; s&#xE9;lectionn&#xE9;s: pr&#xE9;clinique pyropheophorbide-un (APP) et la vert&#xE9;porfine (VP), qui a &#xE9;t&#xE9; approuv&#xE9; cliniquement pour le traitement de la d&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rescence maculaire li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;aigu (Visudyne). Pyropheophorbide-a et la vert&#xE9;porfine ont &#xE9;t&#xE9; conjugu&#xE9;s &#xE0; un scFv anti-HER2 contenant en moyenne dix mol&#xE9;cules de photosensibilisateur par scFv avec une petite contribution ( &#x3C;or=20%) from non-covalently bound molecules. Confocal fluorescence microscopy demonstrates good cellular uptake of PPa conjugate with the HER2-positive cell line, SKOV-3, while negligible cell uptake is demonstrated for the HER2-negative cell line, KB. For the VP conjugate, increased rate of cellular uptake and prolonged retention in SKOV-3 cells is observed compared to free photosensitizer. In clinical applications this could provide increased potency and desired selectivity towards malignant tissue, leaving surrounding healthy tissue unharmed and reducing skin photosensitivity. The present study highlights the usefulness of photosensitizer immunoconjugates with scFvs for targeted PDT.

Caract&#xE9;risation par fluorescence de Multipliez-charg&#xE9;s anti-HER2 Fv &#xE0; cha&#xEE;ne unique-photosensibilisateur Conjugu&#xE9;s Convient pour la th&#xE9;rapie photodynamique

Wir berichten die Synthese, spektroskopischen Eigenschaften und intrazellul&auml;re Bildgebung der rekombinante Antik&ouml;rper einzelne Kette Fragment (ScFv) konjugiert mit Photosensitizer f&uuml;r photodynamische Therapie (PDT) Krebs verwendet. Zwei umfassend untersucht Photosensitizer ausgew&auml;hlt wurden: pr&auml;klinische Pyropheophorbide-a (PPa) und AMD (VP), der klinisch f&uuml;r die Behandlung von akuten Makula-Degeneration (Visudyne) angenommen wurde. Pyropheophorbide-a und AMD haben, wurde zu einer Anti-HER2-ScFv mit durchschnittlich zehn Photosensibilisator Molek&uuml;le pro ScFv mit einem kleinen Beitrag (&lt; oder = 20 %) von nicht-kovalent gebundenen Molek&uuml;len. Konfokale Fluoreszenzmikroskopie zeigt gute Aufnahme von PPa-Konjugat mit HER2-positivem-Zelllinie, SKOV-3, w&auml;hrend vernachl&auml;ssigbar Zelle Aufnahme f&uuml;r die Zelllinie HER2-negativen, KB nachgewiesen wird. F&uuml;r die VP-Konjugat wird erh&ouml;hte Rate von Aufnahme und l&auml;ngere Aufbewahrung in SKOV-3 Zellen im Vergleich zu freien Photosensibilisator beobachtet. In klinische Anwendungen k&ouml;nnten dies erh&ouml;hte Potenz und gew&uuml;nschte Selektivit&auml;t gegen&uuml;ber malignen Gewebes, verlassen umgebenden gesundes Gewebe unverletzt und Lichtempfindlichkeit der Haut zu verringern. Die vorliegende Studie unterstreicht die N&uuml;tzlichkeit der Photosensibilisator Immunoconjugates mit ScFvs f&uuml;r gezielte PDT.

Fluoreszenz-Charakterisierung der einzige multiplizieren geladenen Anti-HER2-Kette Fv-Photosensibilisator konjugiert geeignet f&uuml;r photodynamische Therapie.

Riportiamo la sintesi, propriet&agrave; spettroscopiche e imaging intracellulare del frammento di singola catena di anticorpo ricombinante (scFv) coniugati con fotosensibilizzanti utilizzati per la terapia fotodinamica (PDT) il cancro. Sono stati selezionati due ampiamente studiato fotosensibilizzanti: studi preclinici pyropheophorbide-a (PPa) e verteporfin (VP), che &egrave; stato clinicamente approvato per il trattamento della degenerazione maculare acuta (Visudyne). Pyropheophorbide-a e verteporfin hanno stato coniugato a un scFv anti-HER2 contenente mediamente dieci molecole fotosensibilizzatore per scFv con una piccola donazione (&lt; o = 20%) da molecole non covalentemente. Microscopia di fluorescenza confocale dimostra buon assorbimento cellulare del coniugato PPa con la linea cellulare HER2-positivo, SKOV-3, mentre &egrave; dimostrato uptake cellulare trascurabile per la linea cellulare HER2-negativo, KB. Per il coniugato di VP, tasso aumentato uptake cellulare e prolungata ritenzione in SKOV-3 celle &egrave; osservato rispetto al libero fotosensibilizzatore. In applicazioni cliniche, questo potrebbe fornire maggiore potenza e desiderata selettivit&agrave; verso il tessuto maligno, lasciando il tessuto sano incolumi e riducendo la fotosensibilit&agrave; della pelle circostante. Il presente studio evidenzia l&#39;utilit&agrave; del fotosensibilizzatore immunoconjugates con scFvs per PDT mirati.

Caratterizzazione di fluorescenza di moltiplicare-caricato anti-HER2 singola catena Fv-fotosensibilizzatore coniuga adatto per la terapia fotodinamica.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x764C;&#x306E;&#x5149;&#x7DDA;&#x529B;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#xFF08;PDT&#xFF09;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x611F;&#x5149;&#x3057;&#x3066;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x5206;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x3068;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x6297;&#x4F53;&#x3001;&#x5358;&#x9396;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;scFv&#xFF09;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 2&#x3064;&#x306E;&#x5E83;&#x304F;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x611F;&#x5149;&#x304C;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30D4;&#x30ED; - &#xFF08;PPA&#xFF09;&#x3068;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x6025;&#x6027;&#x9EC4;&#x6591;&#x5909;&#x6027;&#x75C7;&#xFF08;Visudyne&#xFF09;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x627F;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30D9;&#x30EB;&#x30C6;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#xFF08;VP&#xFF09;&#x3001;&#x3002;&#x30D4;&#x30ED;&#x3068;&#x30D9;&#x30EB;&#x30C6;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x5C11;&#x984D;&#x306E;&#x5BC4;&#x4ED8;&#x3067;scFv&#x3092;&#x5E73;&#x5747;10&#x5149;&#x5897;&#x611F;&#x5206;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x6297;HER2 scFv&#x3068;&#x306B;&#x63A5;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#xFF08; &#x3C;or=20%) from non-covalently bound molecules. Confocal fluorescence microscopy demonstrates good cellular uptake of PPa conjugate with the HER2-positive cell line, SKOV-3, while negligible cell uptake is demonstrated for the HER2-negative cell line, KB. For the VP conjugate, increased rate of cellular uptake and prolonged retention in SKOV-3 cells is observed compared to free photosensitizer. In clinical applications this could provide increased potency and desired selectivity towards malignant tissue, leaving surrounding healthy tissue unharmed and reducing skin photosensitivity. The present study highlights the usefulness of photosensitizer immunoconjugates with scFvs for targeted PDT.

&#x7A4D;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;HER2&#x5358;&#x9396;Fv-&#x611F;&#x5149;&#x4F53;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x89E3;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x7DDA;&#x529B;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xC131;, &#xBD84; &#xAD11; &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56D; &#xCCB4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC0AC;&#xC2AC; &#xC870;&#xAC01; (scFv)&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC554; (PDT)&#xC758; photodynamic &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; photosensitizers&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBCC0;&#xD654;. &#xB450; &#xB110;&#xB9AC; &#xACF5;&#xBD80; photosensitizers &#xC120;&#xD0DD;: &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; a pyropheophorbide (PPa) &#xBC0F; verteporfin (&#xBD80;&#xC0AC;&#xC7A5;), &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE09;&#xC131; &#xD669; &#xBC18; &#xBCC0;&#xC131; (Visudyne)&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2B9;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pyropheophorbide a verteporfin &#xD3C9;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC640; scFv &#xB2F9; 10 photosensitizer &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC548;&#xD2F0; HER2 Scfv&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xACE0; (&lt; &#xB610;&#xB294; = 20%) &#xBE44; &#x70AD; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C;. Confocal &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC88B;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC5D0; HER2 &#xC591;&#xC131; &#xC140; &#xB77C;&#xC778; PPa &#xACF5;&#xC561; SKOV 3, &#xBB34;&#xC2DC;&#xD560; &#xC218; &#xC140; &#xAE00;&#xADC0; HER2 &#xC74C;&#xC218;&#xAC00; &#xC140; &#xB77C;&#xC778;, KB&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548;. &#xBD80;&#xC0AC;&#xC7A5; &#xACF5;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00; &#xBC0F; SKOV 3 &#xC140;&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30;&#xAC04;&#xB41C; &#xBCF4;&#xC874;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBB34;&#xB8CC; photosensitizer&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAD00;&#xCC30; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xC120;&#xD0DD;&#xB3C4; &#xBB34;&#xC0AC; &#xD788; &#xD558; &#xACE0; &#xD53C;&#xBD80; &#xD587;&#xBE5B;&#xC744; &#xC904;&#xC774;&#xACE0; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xD2F0;&#xC288;&#xB97C; &#xC5D0;&#xC6CC;&#xC2F8;&#xB294; &#xB5A0;&#xB098; &#xC545;&#xC131; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB300;&#xC0C1;&#xB41C; &#xCD08;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; photosensitizer immunoconjugates&#xC640; Scfvs&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACF1;&#xD558;&#xAE30; &#xB85C;&#xB4DC; &#xC548;&#xD2F0; HER2 &#xB2E8;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; Fv photosensitizer&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xD2B9;&#xC131; &#xBCC0;&#xD654; photodynamic &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta la s&#xED;ntesis, propiedades espectrosc&#xF3;picas y de imagen intracelular de fragmento de anticuerpo recombinante de cadena &#xFA;nica (scFv) se conjuga con fotosensibilizadores utilizados para la terapia fotodin&#xE1;mica del c&#xE1;ncer (PDT). Dos fotosensibilizadores ampliamente estudiados han sido seleccionados: precl&#xED;nica pyropheophorbide-a (PPA) y la verteporfina (VP), que ha sido cl&#xED;nicamente aprobado para el tratamiento de la degeneraci&#xF3;n macular aguda (Visudyne). Pyropheophorbide-a y con verteporfina se han conjugado con un scFv anti-HER2 que contiene un promedio de diez mol&#xE9;culas de fotosensibilizador por scFv con una peque&#xF1;a contribuci&#xF3;n ( &#x3C;or=20%) from non-covalently bound molecules. Confocal fluorescence microscopy demonstrates good cellular uptake of PPa conjugate with the HER2-positive cell line, SKOV-3, while negligible cell uptake is demonstrated for the HER2-negative cell line, KB. For the VP conjugate, increased rate of cellular uptake and prolonged retention in SKOV-3 cells is observed compared to free photosensitizer. In clinical applications this could provide increased potency and desired selectivity towards malignant tissue, leaving surrounding healthy tissue unharmed and reducing skin photosensitivity. The present study highlights the usefulness of photosensitizer immunoconjugates with scFvs for targeted PDT.

Caracterizaci&#xF3;n de fluorescencia de m&#xFA;ltiplemente cargados anti-HER2 Fv de cadena &#xFA;nica-fotosensibilizador conjugados adecuados para la terapia fotodin&#xE1;mica

L&#39;intensit&agrave; di fluorescenza e la durata della 4,4&#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyl)phenyl-3a,4a-diaza-s-indacene (1) mostra una forte correlazione con la viscosit&agrave; del mezzo dovuto la viscosit&agrave; dipendente dalla torsione del gruppo 5-fenile, che d&agrave; accesso allo stato eccitato nonemissive scuro. Vi proponiamo un metodo sensibile e versatile per la misurazione della microviscosity locale nei sistemi biologici, basati sulla determinazione della durata di 1 fluorescenza. Vita di fluorescenza (FLIM) di imaging eseguiti su cellule vive incubate con 1 dimostra la vita intracellulare distinta del rotore molecolare di 1,6 + /-0,2 ns corrispondente alla viscosit&agrave; intracellulare di ca. 140 cP. Anisotropia di fluorescenza tempo-resolved di 1 nelle cellule conferma insignificante associazione del fluoroforo. Il valore di viscosit&agrave; ottenuto nel presente studio &egrave; notevolmente superiore a quella dell&#39;acqua e del citoplasma cellulare. L&#39;elevata viscosit&agrave; del compartimento intracellulare &egrave; probabile che gioca un ruolo importante nei processi intracellulari vitali, tra cui il tasso di diffusione di specie reattive dell&#39;ossigeno, causando la distruzione programmata delle cellule.

Rotore molecolare misure di viscosit&agrave; di cellule vive tramite immagini di vita di fluorescenza.

&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x5BFF;&#x547D;&#x306E;4,4 &#x26;#39; - &#x30B8;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;-4  - &#x30DC;&#x30E9;-5-&#xFF08;P-&#x30AA;&#x30AD;&#x30BD;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#xFF09;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;-3A&#x3001;4A-&#x30B8;&#x30A2;&#x30B6;-s-&#x30A4;&#x30F3;&#x30C0;&#x30BB;&#x30F3;&#xFF08;1&#xFF09;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3068;&#x5F37;&#x3044;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6697;&#x3044;nonemissive&#x52B1;&#x8D77;&#x72B6;&#x614B;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;5-&#x30D5;&#x30A7;&#x30CB;&#x30EB;&#x57FA;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x3078;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;1&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x304B;&#x3064;&#x6C4E;&#x7528;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002; 1&#x3067;&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;FLIM&#xFF09;1.6 + /&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; -  CA&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;0.2 ns&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 140 CP&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;1&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306E;&#x308F;&#x305A;&#x304B;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x5024;&#x306F;&#x3001;&#x6C34;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x9AD8;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x533A;&#x753B;&#x306E;&#x9AD8;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x7D30;&#x80DE;&#x7834;&#x58CA;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#x306E;&#x62E1;&#x6563;&#x901F;&#x5EA6;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x63AA;&#x7F6E;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;

&#x8367;&#x5149;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C; 4,4&#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyl)phenyl-3a,4a-diaza-s-indacene (1) &#x663E;&#x793A;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x6027;&#x4E0E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7684;&#x4ECB;&#x8D28;&#x5728;&#x7C98;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x626D; 5-&#x82EF;&#x57FA;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4F7F;&#x8BBF;&#x95EE;&#x7684;&#x9ED1; nonemissive &#x6FC0;&#x53D1;&#x6001;&#x7684;&#x5BFF;&#x547D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E; 1 &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5F53;&#x5730;&#x5FAE;&#x7C98;&#x5EA6;&#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x901A;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x5BF9;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5B75;&#x80B2; 1 &#x6267;&#x884C;&#x6F14;&#x793A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50;&#x7684; + /-0.2 1.6 &#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7684; ca.140 cP &#x7684; ns&#x3002;1 &#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x5FAE;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x9053;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#x83B7;&#x53D6;&#x7684;&#x7C98;&#x5EA6;&#x503C;&#x662F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7684;&#x5927;&#x5927;&#x9AD8;&#x4E8E;&#x6C34;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x9AD8;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x8F66;&#x53A2;&#x5185;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x5BF9;&#x7834;&#x574F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x901F;&#x5EA6;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50;&#x63AA;&#x65BD;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3002;

The fluorescence intensity and lifetime of the 4,4'-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyl)phenyl-3a,4a-diaza-s-indacene (1) show a strong correlation with the viscosity of the medium due to the viscosity-dependent twisting of the 5-phenyl group, which gives access to the dark nonemissive excited state. We propose a sensitive and versatile method for measuring the local microviscosity in biological systems, based on the determination of the fluorescence lifetime of 1. Fluorescence lifetime imaging (FLIM) performed on live cells incubated with 1 demonstrates the distinct intracellular lifetime of the molecular rotor of 1.6 +/- 0.2 ns corresponding to the intracellular viscosity of ca. 140 cP. Time-resolved fluorescence anisotropy of 1 in cells confirms insignificant binding of the fluorophore. The viscosity value obtained in the present study is considerably higher than that of water and of cellular cytoplasm. The high viscosity of intracellular compartments is likely to play an important role in vital intracellular processes, including the rate of diffusion of reactive oxygen species, causing programmed cell destruction.

Molecular rotor measures viscosity of live cells via fluorescence lifetime imaging.

L&#x26;#39;intensit&#xE9; de fluorescence et de dur&#xE9;e de vie du 4,4 &#x26;#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyle) ph&#xE9;nyl-3a, 4a-diaza-s-indac&#xE8;ne (1) montrent une forte corr&#xE9;lation avec la viscosit&#xE9; du milieu en raison &#xE0; la torsion viscosit&#xE9; d&#xE9;pendant du groupe 5-ph&#xE9;nyle, qui donne acc&#xE8;s &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat sombre excit&#xE9; non &#xE9;missives. On propose une m&#xE9;thode sensible et souple pour mesurer la microviscosit&#xE9; locale dans des syst&#xE8;mes biologiques, sur la base de la d&#xE9;termination de la dur&#xE9;e de vie de fluorescence de 1. Imagerie de vie de fluorescence (FLIM) r&#xE9;alis&#xE9;es sur des cellules vivantes incub&#xE9;es avec une montre la dur&#xE9;e de vie intracellulaire distinct du rotor mol&#xE9;culaire de 1,6 + / - 0,2 ns correspondant &#xE0; la viscosit&#xE9; d&#x26;#39;environ intracellulaire. 140 cP. R&#xE9;solue dans le temps anisotropie de fluorescence de 1 dans les cellules de liaison confirme insignifiante du fluorophore. La valeur de viscosit&#xE9; obtenue dans l&#x26;#39;&#xE9;tude est consid&#xE9;rablement plus &#xE9;lev&#xE9;e que celle de l&#x26;#39;eau et du cytoplasme cellulaire. La viscosit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e de compartiments intracellulaires est susceptible de jouer un r&#xF4;le important dans les processus vitaux intracellulaires, y compris le taux de diffusion des esp&#xE8;ces r&#xE9;actives de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne, provoquant la destruction programm&#xE9;e de la cellule.

Viscosit&#xE9; mol&#xE9;culaire rotor Mesures de cellules vivantes par imagerie de vie de fluorescence

Die Fluoreszenz-Intensit&auml;t und Lebensdauer der 4,4&#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyl)phenyl-3a,4a-diaza-s-indacene (1) zeigen eine starke Korrelation mit der Viskosit&auml;t des Mediums aufgrund der Viskosit&auml;t-abh&auml;ngige Verdrehen der 5-Phenyl-Gruppe, die Zugriff auf die dunklen nonemissive angeregten Zustand. Wir schlagen eine sensible und vielseitige Methode zur Messung der lokalen Microviscosity in biologischen Systemen, basierend auf die Bestimmung der Fluoreszenz-Lebensdauer von 1. Fluoreszenz-Lebensdauer imaging (FLIM) durchgef&uuml;hrt, die auf lebenden Zellen inkubiert mit 1 veranschaulicht die unterschiedliche intrazellul&auml;ren Lebensdauer des molekularen Rotors von 1,6 +/-0,2 ns, die intrazellul&auml;re Viskosit&auml;t von ca. 140 cP entspricht. Zeit aufgel&ouml;st Fluoreszenz Anisotropie 1 in Zellen best&auml;tigt unbedeutend Bindung der Fluorophor. Der in der vorliegenden Studie Viskosit&auml;t Wert ist deutlich h&ouml;her als die des Wassers und des zellularen Zytoplasma. Die hohe Viskosit&auml;t des intrazellul&auml;ren Depots wird voraussichtlich in wichtige intrazellul&auml;re Prozesse, einschlie&szlig;lich die Rate der Verbreitung der reaktive Sauerstoffspezies, Zerst&ouml;rungen von programmierten Zelle eine wichtige Rolle spielen.

Molekulare Rotor misst Viskosit&auml;t von lebenden Zellen &uuml;ber Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung.

&#xD615;&#xAD11; &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC810;&#xB3C4; &#xC885;&#xC18D; &#xC5B4;&#xB450;&#xC6B4; nonemissive &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; 5-&#xD398; &#xB2D0; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xC65C;&#xACE1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xC810;&#xB3C4;&#xC640; 4,4&#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalkyl)phenyl-3a,4a-diaza-s-indacene (1) &#xACF5;&#xC5F0;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xC0C1;&#xAD00; &#xAD00;&#xACC4;&#xC758; &#xC218;&#xBA85;. 1 &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xACB0;&#xC815;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB85C;&#xCEEC; microviscosity&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; 0.2 &plusmn; 1.6&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xD68C;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xACE0;&#xC720; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xBA85;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; 1 incubated &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; (FLIM) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; ca. 140 Cp&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC810;&#xC131;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; ns. &#xC140;&#xC5D0; 1 &#xC2DC;&#xAC04; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBC29;&#xC131;&#xC740; fluorophore&#xC758; &#xD558; &#xCC2E;&#xC740; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5BB;&#xC740; &#xC810;&#xB3C4; &#xAC12; &#xBB3C;&#xACFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4;&#xB294; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xB192;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAD6C;&#xD68D;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC810;&#xB3C4; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD30C;&#xAD34;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xBC18;&#xC751; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC885;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xC790; &#xD68C;&#xC804;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC758; &#xC810;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La intensidad de la fluorescencia y la duraci&#xF3;n de la 4,4 &#x26;#39;-difluoro-4-bora-5-(p-oxoalquil) fenil-3a, 4a-diaza-s-indacene (1) muestran una fuerte correlaci&#xF3;n con la viscosidad del medio, debido a la torsi&#xF3;n de la viscosidad depende del grupo 5-fenil, que da acceso a la oscuridad estado excitado nonemissive. Se propone un m&#xE9;todo sensible y vers&#xE1;til para la medici&#xF3;n de la microviscosidad local en sistemas biol&#xF3;gicos, basado en la determinaci&#xF3;n de la vida de fluorescencia de 1. Imagen vida de fluorescencia (Flim) efectuado en las c&#xE9;lulas vivas se incubaron con 1 muestra el tiempo de vida intracelular distinto del rotor molecular de 1,6 + / - 0,2 ns correspondiente a la viscosidad intracelular de ca. 140 cP. Tiempo de resolverse anisotrop&#xED;a de fluorescencia de 1 en c&#xE9;lulas confirma uni&#xF3;n insignificante del fluor&#xF3;foro. El valor de la viscosidad obtenida en el presente estudio es considerablemente mayor que la del agua y del citoplasma celular. La alta viscosidad de los compartimentos intracelulares es probable que jueguen un papel importante en los procesos vitales intracelulares, incluyendo la velocidad de difusi&#xF3;n de especies de ox&#xED;geno reactivas, causando la destrucci&#xF3;n celular programada.

Viscosidad molecular Medidas del rotor de c&#xE9;lulas vivas a trav&#xE9;s de im&#xE1;genes de fluorescencia vida

&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (GFP) &#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E73;&#x5747;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x662F;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x53CA;&#x5176;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x62A5;&#x544A;&#x8FD9;&#x4E5F;&#x662F;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x65F6;&#x95F4;&#x76F8;&#x5173;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x8BA1;&#x6570; &#xFF08;TCSPC&#xFF09;-&#x83B7;&#x5F97;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x4E0E;&#x5171;&#x7126;&#x626B;&#x63CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x5728;&#x4E0D;&#x540C;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4E2D;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x53D1;&#x73B0;&#x5E73;&#x5747;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x7814;&#x7A76;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x964D;&#x4F4E;&#x7518;&#x6CB9;&#x6216;&#x8517;&#x7CD6;&#x5BF9;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x6302;&#x8D77;&#x7684;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x52A0;&#x6CD5;&#x3002;&#x9006; GFP &#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x662F;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x5E73;&#x65B9;&#x6210;&#x6B63;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0E;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5185;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; GFP &#x6807;&#x8BB0;&#x4E3B;&#x8981;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x76F8;&#x5BB9;&#x6027;&#x590D;&#x6742; (MHC) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x819C;&#x5916;&#x7684; GPI &#x951A;&#x5B9A; GFP &#x7684;&#x6848;&#x4F8B;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x54EA;&#x91CC;&#x5173;&#x952E;&#x751F;&#x4EA7;&#x500F;&#x901D;&#x6CE2;&#x6FC0;&#x53D1;&#x8367;&#x5149;&#x73BB;&#x7483;&#x754C;&#x9762;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;) &#x6280;&#x672F;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A; GFP &#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x5C06;&#x7F29;&#x77ED;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;

&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x5BF9;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The average fluorescence lifetime of the green fluorescent protein (GFP) in solution is a function of the refractive index of its environment. We report that this is also the case for GFP-tagged proteins in cells. Using time-correlated single-photon counting (TCSPC)-based fluorescence lifetime imaging (FLIM) with a confocal scanning microscope, images of GFP-tagged proteins in cells suspended in different refractive index media are obtained. It is found that the average fluorescence lifetime of GFP decreases on addition of glycerol or sucrose to the media in which the fixed cells are suspended. The inverse GFP lifetime is proportional to the refractive index squared. This is the case for GFP-tagged major histocompatibility complex (MHC) proteins with the GFP located inside the cytoplasm, and also for GPI-anchored GFP that is located outside the cell membrane. The implications of these findings are discussed with regard to total internal reflection fluorescence (TIRF) techniques where the change in refractive index is crucial in producing an evanescent wave to excite fluorophores near a glass interface. Our findings show that the GFP fluorescence lifetime is shortened in TIRF microscopy in comparison to confocal microscopy.

Effect of refractive index on the fluorescence lifetime of green fluorescent protein.

La dur&eacute;e de vie moyenne de fluorescence de la prot&eacute;ine fluorescente verte (GFP) en solution est fonction de l&#39;indice de r&eacute;fraction de son environnement. Les auteurs rapportent que c&#39;est aussi le cas pour les prot&eacute;ines GFP-&eacute;tiquet&eacute;e dans les cellules. Le temps-corr&eacute;l&eacute; monophotonique par comptage (TCSPC)-imagerie de dur&eacute;e de vie de fluorescence bas&eacute; (FLIM) avec un microscope &agrave; balayage confocal, images de GFP-&eacute;tiquet&eacute;e de prot&eacute;ines dans les cellules en suspension dans l&#39;indice de r&eacute;fraction diff&eacute;rents m&eacute;dias sont obtenus. Il se trouve que la dur&eacute;e de vie moyenne de fluorescence de GFP diminue sur l&#39;addition de glyc&eacute;rol ou de saccharose aux m&eacute;dias dans lesquelles les cellules fixes sont suspendues. La dur&eacute;e de vie GFP inverse est proportionnelle &agrave; l&#39;indice de r&eacute;fraction au carr&eacute;. C&#39;est le cas pour des prot&eacute;ines GFP-&eacute;tiquet&eacute;e majeur d&#39;histocompatibilit&eacute; (MHC) complexes avec la GFP, situ&eacute; &agrave; l&#39;int&eacute;rieur du cytoplasme, ainsi que pour la GFP ancr&eacute;es &agrave; un GPI qui se trouve &agrave; l&#39;ext&eacute;rieur de la membrane cellulaire. Les implications de ces r&eacute;sultats sont discut&eacute;es en ce qui concerne les techniques de fluorescence (FRBR) de r&eacute;flexion totale interne o&ugrave; le changement de l&#39;indice de r&eacute;fraction est crucial dans la production d&#39;une onde &eacute;vanescente pour exciter des fluorophores pr&egrave;s d&#39;une interface de verre. Nos r&eacute;sultats montrent que la vie de fluorescence GFP est raccourcie en microscopie FRBR par rapport &agrave; la microscopie confocale.

Effet de l&#39;indice de r&eacute;fraction sur la dur&eacute;e de vie de fluorescence de la prot&eacute;ine fluorescente verte.

Die durchschnittliche Fluoreszenz-Lebensdauer des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins (GFP) in L&ouml;sung ist eine Funktion des Brechungsindexes von seiner Umgebung. Wir berichten, dass dies auch der Fall f&uuml;r GFP-etikettierten Proteine in den Zellen ist. Mit der Zeit korrelierte Single-Photon counting (TCSPC)-basierend Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung (FLIM) mit einem Konfokalmikroskop, Bilder von GFP-etikettierten Proteine in Zellen, die in unterschiedlichen Brechungsindex Medien ausgesetzt werden abgerufen. Es wird festgestellt, dass die durchschnittliche Fluoreszenz-Lebensdauer der GFP verringert sich auf Zusatz von Glycerin oder Saccharose zu den Medien, in denen die festen Zellen suspendiert sind. Die inverse GFP-Lebensdauer ist proportional zu den Brechungsindex kariert. Dies ist der Fall f&uuml;r GFP markiert major Histocompatibility komplexes (MHC) Proteine mit der GFP innerhalb des Zytoplasmas und auch f&uuml;r GPI-verankerte GFP, die sich au&szlig;erhalb der Zellmembran befindet. Die Folgerung aus diesen Erkenntnissen werden hinsichtlich der Totalreflexion Fluoreszenz (TIRF) Techniken diskutiert &Auml;nderung im Brechungsindex entscheidend ist bei der Herstellung einer fl&uuml;chtig Welle um Fluorophore in der N&auml;he ein Glas-Schnittstelle zu begeistern. Unsere Ergebnisse zeigen, dass die GFP-Fluoreszenz-Lebensdauer in der TIRF-Mikroskopie im Vergleich zu confocal Mikroskopie verk&uuml;rzt wird.

Wirkung der Brechungsindex auf der Fluoreszenz-Lebensdauer des gr&uuml;n fluoreszierenden Proteins.

La durata media di fluorescenza della proteina fluorescente verde (GFP) in soluzione &egrave; una funzione di indice di rifrazione del suo ambiente. Segnaliamo che questo &egrave; anche il caso di GFP-etichettato proteine nelle cellule. Utilizzando correlati nel tempo single-photon counting (TCSPC)-immagini di vita basato fluorescenza (FLIM) con un microscopio confocale, immagini di GFP-etichettato proteine in cellule sospese in media diverso indice di rifrazione sono ottenuti. Si &egrave; trovato che la durata media fluorescenza della GFP diminuisce su aggiunta di glicerolo o saccarosio ai media in cui sono sospese le cellule fisse. La durata GFP inversa &egrave; proporzionale all&#39;indice di rifrazione al quadrato. Questo &egrave; il caso per le GFP-etichettato di istocompatibilit&agrave; complesse (MHC) proteine con la GFP si trova all&#39;interno del citoplasma e anche per GFP GPI ancorate che si trova all&#39;esterno della membrana cellulare. Per quanto riguarda le tecniche di fluorescenza (TIRF) riflessione interna totale, dove il cambiamento di indice di rifrazione &egrave; cruciale nella produzione di un&#39;onda evanescente per eccitare i fluorophores vicino un interfaccia vetro sono discusse le implicazioni di queste scoperte. I nostri risultati mostrano che la durata della fluorescenza GFP &egrave; accorciata in microscopia TIRF rispetto al microscopia confocal.

Effetto dell&#39;indice di rifrazione sulla vita di fluorescenza della proteina fluorescente verde.

&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (GFP) &#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x304C;&#x307E;&#x305F; GFP &#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6642;&#x9593;&#x76F8;&#x95A2;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x8A08;&#x6570; &#xFF08;&#x30D4;&#x30B3;&#xFF09; &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;-&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; (FLIM) &#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;GFP &#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x5A92;&#x8CEA;&#x3067;&#x4E2D;&#x65AD;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GFP &#x306E;&#x5E73;&#x5747;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x56FA;&#x5B9A;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x4E2D;&#x65AD;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3078;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x7CD6;&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3067;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9006;&#x306E; GFP &#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x671F;&#x9593;&#x306F;&#x3001;&#x5C48;&#x6298;&#x306E; 2&#x4E57;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x4E8B;&#x4F8B;&#x3068;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x819C;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x3042;&#x308B; GPI &#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x578B; GFP &#x306E; GFP &#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7D44;&#x7E54;&#x9069;&#x5408;&#x6027;&#x8907;&#x5408; &#xFF08;MHC&#xFF09; &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5185;&#x306B;&#x3042;&#x308B; gfp &#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x542B;&#x610F;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; fluorophores &#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x754C;&#x9762;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x306B;&#x306F;&#x30A8;&#x30D0;&#x30CD;&#x30C3; &#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x6CE2;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x578B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067; GFP &#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x304C;&#x77ED;&#x304F;&#x306A;&#x308B;&#x3068;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x306E;&#x5C48;&#x6298;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3002;

&#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (GFP)&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xADF8; &#xD658;&#xACBD;&#xC758; &#xAD74;&#xC808;&#xB960;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC774; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; GFP &#xD0DC;&#xADF8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC774;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xAC04; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB2E8;&#xC77C; &#xAD11;&#xC790; &#xACC4;&#xC0B0; (TCSPC)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;-&#xAE30;&#xBC18;&#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; (FLIM) confocal &#xC2A4;&#xCE90;&#xB2DD; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;, &#xAD74;&#xC808;&#xB960;&#xC774; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; GFP &#xD0DC;&#xADF8;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. GFP&#xC758; &#xD3C9;&#xADE0; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85;&#xC5D0; &#xAE00;&#xB9AC;&#xC138;&#xB864; &#xB610;&#xB294; &#xACE0;&#xC815; &#xB41C; &#xC140; &#xC911;&#xB2E8; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4; &#xC790;&#xB2F9;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5ED; GFP &#xC77C;&#xC0DD;&#xC740; &#xAD74;&#xC808;&#xB960;&#xC758; &#xC81C;&#xACF1;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; GFP &#xD0DC;&#xADF8; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xC801;&#xD569;&#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (MHC)&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC548;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; GFP&#xC640;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; GPI &#xACE0;&#xC815; GFP &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9; &#xBC16;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xC758;&#xBBF8;&#xB294; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; (TIRF) &#xAE30;&#xBC95; &#xAD74;&#xC808;&#xB960;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC720;&#xB9AC; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; fluorophores&#xC744; &#xD765;&#xBD84; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xB77C;&#xC838;&#xAC00; &#xC6E8;&#xC774;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCF4;&#xC5EC; TIRF &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;&#xC5D0; GFP &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xB2E8;&#xCD95; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85;&#xC5D0; &#xAD74;&#xC808;&#xB960;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;.

La vida media de la fluorescencia de la prote&iacute;na fluorescente verde (GFP) en soluci&oacute;n es una funci&oacute;n de &iacute;ndice de refracci&oacute;n de su entorno. Se reporta que esto tambi&eacute;n es el caso de GFP-etiquetado de prote&iacute;nas en las c&eacute;lulas. Usando tiempo correlacionados del solo-fot&oacute;n contando (TCSPC)-se obtienen im&aacute;genes de la vida de la fluorescencia basado (FLIM) con un microscopio confocal, im&aacute;genes de prote&iacute;nas GFP-etiquetadas en c&eacute;lulas suspendidas en los medios de comunicaci&oacute;n diferente &iacute;ndice de refracci&oacute;n. Se encuentra que la vida media de la fluorescencia de GFP disminuye en la adici&oacute;n de glicerol o sacarosa al medio en que se suspenden las c&eacute;lulas fijas. La vida GFP inversa es proporcional al cuadrado del &iacute;ndice de refracci&oacute;n. &Eacute;ste es el caso de prote&iacute;nas del complejo del GFP-etiquetado de histocompatibilidad (MHC) con la GFP situado dentro del citoplasma y tambi&eacute;n para GFP GPI-ancladas que se encuentra fuera de la membrana celular. Se discuten las implicaciones de estos hallazgos con respecto a t&eacute;cnicas de reflexi&oacute;n interna total de fluorescencia (TIRF) donde el cambio en el &iacute;ndice de refracci&oacute;n es crucial en la producci&oacute;n de una onda evanescente para excitar fluor&oacute;foros cerca de una interfaz de vidrio. Nuestros resultados muestran que la vida de fluorescencia de la GFP se acorta en microscop&iacute;a TIRF en comparaci&oacute;n con microscop&iacute;a confocal.

Efecto del &iacute;ndice de refracci&oacute;n en la duraci&oacute;n de la fluorescencia de la prote&iacute;na verde fluorescente.

&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; (Src &#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x548C;&#x542B;&#x6709;&#x80F6;&#x539F;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;) &#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684; RTKs &#xFF08;&#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;) &#x8C03;&#x8282;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x9ECF;&#x9644;&#x3001; &#x8FC1;&#x79FB;&#x548C; mitogenesis &#x7B49;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x88AB;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x4E0B;&#x6E38;&#x7684; FGFR &#xFF08;&#x78B1;&#x6027;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;) &#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8BE5;&#x53D7;&#x4F53;&#x5BB6;&#x65CF;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x5DF2;&#x4E0D;&#x88AB;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x6240;&#x8FF0;&#x3002;&#x5404;&#x79CD;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x7279;&#x56F0; PTB &#x57DF; &#xFF08;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#xFF09; &#x548C; &#xFF08;&#x6216;&#xFF09; SH2 (Src &#x540C;&#x6E90; 2&#xFF09; &#x57DF;&#x4E0A; FGFR1&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F51;&#x7AD9;&#x6CA1;&#x6709;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5168;&#x957F;&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;&#x636E;&#x62A5;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x5927;&#x697C;&#x57DF;&#x4E2D;&#x62DB;&#x52DF;&#x5230; FGFR2(IIIc) &#x6765;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x548C; SH2 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x53D1;&#x73B0;&#x5927;&#x91CF;&#x4EA4;&#x611F;&#x795E;&#x7ECF;&#x4E0E; FGFR2 &#x7684;&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x5927;&#x697C;&#x57DF;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;&#x7684;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x819C;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4ECE;&#x80F6;&#x7247; (&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x663E;&#x5FAE;&#x672F;) &#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x56F0;&#x548C; FGFR2 &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x95F4;&#x63A5;&#x7684;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D;&#x6784;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x5305;&#x542B;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9;&#x975E; RTK &#x7684; Src &#x5217;&#x4E3A;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5982;&#x6B64;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x867D;&#x7136; Src &#x548C;&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x6709;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x7275;&#x8FDE;&#x7279;&#x56F0; SH2 &#x57DF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x8C03;&#x89E3;&#x4EBA;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5173;&#x8054;&#x3002;FGFR2 &#x5411;&#x7279;&#x56F0;&#x62DB;&#x8058;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E00;&#x79CD;&#x95F4;&#x63A5;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65B0;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x88C5;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x6B64; RTK &#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

&#x78B1;&#x6027;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53; 2 (FGFR2) &#x4FE1;&#x53F7;&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x7279;&#x56F0;&#x60C5;&#x51B5;&#x7684;&#x95F4;&#x63A5;&#x62DB;&#x8058;&#x3002;

The adaptor protein Shc (Src homology and collagen-containing protein) plays an important role in the activation of signalling pathways downstream of RTKs (receptor tyrosine kinases) regulating diverse cellular functions, such as differentiation, adhesion, migration and mitogenesis. Despite being phosphorylated downstream of members of the FGFR (fibroblast growth factor receptor) family, a direct interaction of Shc with this receptor family has not been described to date. Various studies have suggested potential binding sites for the Shc PTB domain (phosphotyrosine-binding domain) and/or the SH2 (Src homology 2) domain on FGFR1, but no interaction of full-length Shc with these sites has been reported in vivo. In the present study, we investigated the importance of the SH2 domain and the PTB domain in recruitment of Shc to FGFR2(IIIc) to characterize the interaction of these two proteins. Confocal microscopy revealed extensive co-localization of Shc with FGFR2. The PTB domain was identified as the critical component of Shc which mediates membrane localization. Results from FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy) revealed that the interaction between Shc and FGFR2 is indirect, suggesting that the adaptor protein forms part of a signalling complex containing the receptor. We identified the non-RTK Src as a protein which potentially mediates the formation of such a ternary complex. Although an interaction between Src and Shc has been described previously, in the present study we implicate the Shc SH2 domain as a novel mediator of this association. The recruitment of Shc to FGFR2 via an indirect mechanism provides new insight into the regulation of protein assembly and activation of various signalling pathways downstream of this RTK.

Indirect recruitment of the signalling adaptor Shc to the fibroblast growth factor receptor 2 (FGFR2).

La prot&eacute;ine adaptatrice Shc (homologie Src et contenant du collag&egrave;ne prot&eacute;ine) joue un r&ocirc;le important dans l&#39;activation de la signalisation des voies en aval de RTK (tyrosine kinase) r&eacute;glementant les diverses fonctions cellulaires, tels que la diff&eacute;renciation, adh&eacute;rence, migration et mitog&eacute;n&egrave;se. En d&eacute;pit d&#39;&ecirc;tre phosphoryl&eacute; en aval des membres de la famille FGFR (r&eacute;cepteur du facteur de croissance fibroblastique), une interaction directe de la Shc avec cette famille de r&eacute;cepteurs n&#39;a pas &eacute;t&eacute; d&eacute;crite &agrave; ce jour. Diverses &eacute;tudes ont sugg&eacute;r&eacute; des sites potentiels de liaison pour le domaine de la Shc PTB (domaine de liaison &agrave; phosphotyrosine) et/ou le domaine SH2 (Src homologie 2) FGFR1, mais aucune interaction de la Shc pleine longueur avec ces sites n&#39;a &eacute;t&eacute; rapport&eacute;e in vivo. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;importance du domaine SH2 et le domaine de la PTB dans le recrutement de la Shc &agrave; FGFR2(IIIc) pour caract&eacute;riser l&#39;interaction de ces deux prot&eacute;ines. Microscopie confocale a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une vaste colocalisation de la Shc avec FGFR2. Le domaine de la PTB a &eacute;t&eacute; identifi&eacute; comme l&#39;&eacute;l&eacute;ment essentiel de la Shc, qui intervient dans la localisation de la membrane. Les r&eacute;sultats de FLIM (microscopie imagerie de fluorescence lifetime) a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;interaction entre le Shc et FGFR2 est indirecte, ce qui sugg&egrave;re que la prot&eacute;ine adaptatrice fait partie d&#39;un complexe contenant les r&eacute;cepteurs de signalisation. Nous avons identifi&eacute; la Src de RTK - non comme une prot&eacute;ine qui potentiellement intervient dans la formation d&#39;un tel complexe ternaire. Bien qu&#39;une interaction entre la Src et le Shc a &eacute;t&eacute; d&eacute;crit pr&eacute;c&eacute;demment, dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous impliquer le domaine Shc SH2 comme nouveau m&eacute;diateur de cette association. Le recrutement de la Shc &agrave; FGFR2 via un m&eacute;canisme indirect donne une id&eacute;e nouvelle dans le r&egrave;glement de l&#39;Assembl&eacute;e de la prot&eacute;ine et l&#39;activation des diff&eacute;rentes voies de signalisation en aval de cette RTK.

Recrutement indirect de l&#39;adaptateur de signalisation Shc pour le r&eacute;cepteur de facteur de croissance fibroblastique 2 (FGFR2).

Das Adapterprotein Shc (Src Homologie und Kollagen-haltige Protein) spielt eine wichtige Rolle in der Aktivierung der Signalisierung Bahnen stromabw&auml;rts von RTKs (Rezeptor-Tyrosin-Kinasen) Regulierung diverse Zellfunktionen, wie Differenzierung, Adh&auml;sion, Migration und Mitogenesis. Trotz stromabw&auml;rts phosphoryliert wird von Mitgliedern der Familie FGFR-bedingten (Fibroblasten-Wachstumsfaktor-Rezeptor), ist eine direkte Interaktion der Shc mit dieser Rezeptor-Familie nicht bisher beschrieben worden. Verschiedene Studien haben m&ouml;glichen Bindungsstellen f&uuml;r den Shc PTB Dom&auml;ne (Phosphotyrosine-Bindung) und/oder die SH2 (Src Homologie 2) Domain auf FGFR1 vorgeschlagen, aber keine Interaktion des in Shc mit dieser Sites in-vivo gemeldet wurde. In der vorliegenden Studie untersuchten wir die Bedeutung der SH2-Dom&auml;ne und der PTB in Rekrutierung von Shc zu FGFR2(IIIc), das Zusammenspiel dieser beiden Proteine zu charakterisieren. Konfokale Mikroskopie deckte umfangreiche Doppelhybridisierung von Shc mit FGFR2. Die PTB-Dom&auml;ne wurde als die entscheidende Komponente des Shc identifiziert, die Membran Lokalisierung vermittelt. Ergebnisse von FLIM (Lebensdauer bildgebenden Fluoreszenzmikroskopie) ergab, dass die Interaktion zwischen Shc und FGFR2 indirekt ist, was darauf hindeutet, dass das Adapterprotein geh&ouml;rt eine Signalisierung Komplex mit den Rezeptor. Wir identifiziert nicht - RTK-Src als ein Protein, das potenziell die Bildung eines solchen tern&auml;ren komplexes vermittelt. Obwohl eine Interaktion zwischen Src und Shc zuvor beschrieben wurde, implizieren in der vorliegenden Studie wir die Shc SH2-Dom&auml;ne als neuartige Vermittler dieses Vereins. Die Rekrutierung von Shc zu FGFR2 &uuml;ber einen indirekten Mechanismus bietet neue Einblicke in die Regulierung der Protein-Versammlung und Aktivierung der verschiedenen Signalwege stromabw&auml;rts von diesem RTK.

Indirekte Einstellung von der Signalgebung Adapter Shc zu den Fibroblasten-Wachstumsfaktor-Rezeptor 2 (FGFR2).

La proteina dell&#39;adattatore Shc (Src homology e proteine contenenti collagene) svolge un ruolo importante nell&#39;attivazione di percorsi a valle di RTKs (chinasi di recettore tirosina) di segnalazione che regolano diverse funzioni cellulari, quali differenziazione, adesione, migrazione ed endoteliali. Malgrado essere fosforilato a valle dei membri della famiglia FGFR (fibroblast growth factor receptor), un&#39;interazione diretta di Shc con questa famiglia di recettori non &egrave; stato descritto finora. Vari studi hanno suggerito che potenziali siti di legame per il dominio PTB Shc (phosphotyrosine binding domain) e/o dominio SH2 (Src homology 2) su FGFR1, ma nessuna interazione di Shc full-length con questi siti &egrave; stata osservata in vivo. Nel presente studio, abbiamo studiato l&#39;importanza del dominio SH2 e il dominio PTB nel reclutamento di Shc per FGFR2(IIIc) per caratterizzare l&#39;interazione di queste due proteine. Microscopia confocale ha rivelato la vasta collocazione di Shc con FGFR2. Il dominio PTB &egrave; stato identificato come la componente fondamentale di Shc che media la localizzazione di membrana. Risultati da FLIM (la lifetime imaging microscopia di fluorescenza) ha rivelato che l&#39;interazione tra Shc e FGFR2 &egrave; indiretta, suggerendo che la proteina dell&#39;adattatore fa parte di un complesso contenente il recettore di segnalazione. Abbiamo identificato il non - RTK Src come una proteina che media potenzialmente la formazione di un tale complesso ternario. Anche se un&#39;interazione tra Src e Shc &egrave; stato descritto in precedenza, nel presente studio abbiamo coinvolgono il dominio Shc SH2 come mediatore romanzo di questa associazione. L&#39;assunzione di Shc per FGFR2 attraverso un meccanismo indiretto fornisce nuova visione del regolamento dell&#39;Assemblea di proteine e l&#39;attivazione di varie vie di segnalazione a valle di questo RTK.

Reclutamento indiretto dell&#39;adattatore segnalamento Shc per il recettore del fattore di crescita dei fibroblasti (FGFR2) 2.

&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Shc (Src &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B8;&#x30FC;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;) &#x306F;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x5BC6;&#x7740;&#x6027;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5236;&#x5FA1;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E; RTKs &#xFF08;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;) &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E0B;&#x6D41;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A; FGFR &#xFF08;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#xFF09; &#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306E; Shc &#x3053;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x65E5;&#x4ED8;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x7814;&#x7A76; Shc PTB &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;) &#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F; SH2 (Src &#x76F8;&#x540C; 2) &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; FGFR1&#x3001;&#x4E0A;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9; Shc in vivo &#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SH2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B; FGFR2(IIIc) Shc &#x306E;&#x52DF;&#x96C6; PTB &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; Shc FGFR2 &#x3068;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;PTB &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B; Shc &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x679C; FLIM (&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;) &#x304B;&#x3089; Shc &#x3068; FGFR2 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x76F4;&#x63A5;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; RTK Src &#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x4E09;&#x5143;&#x932F;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F; Src &#x3068; Shc &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5354;&#x4F1A;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x8ABF;&#x505C;&#x8005;&#x3068;&#x3057;&#x3066; Shc SH2 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5DFB;&#x304D;&#x8FBC;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FGFR2 Shc &#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x9593;&#x63A5;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x3092;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x3053;&#x306E; RTK &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x529B;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; 2 &#xFF08;FGFR2&#xFF09; &#x3059;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC; Shc &#x306E;&#x9593;&#x63A5;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Shc (Src homology &#xBC0F; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) &#xBD84;&#xD654;, &#xC811;&#xCC29;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; mitogenesis &#xB4F1;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC870;&#xC808; &#xC2E0;&#xD638; RTKs (&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; tyrosine kinases)&#xC758; &#xD558;&#xB958; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB958; phosphorylated &#xB418; &#xBD88;&#xAD6C; FGFR (&#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;) &#xAC00;&#xC871; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xAC00;&#xC871;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; Shc&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0; &#xB0A0;&#xC9DC;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC220; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; FGFR1, SH2 (Src homology 2) &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB610;&#xB294; Shc PTB &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (phosphotyrosine &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; Shc&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC740; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xCC44;&#xC6A9;&#xC774; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; fgfr2(iiic)&#xC5D0; Shc&#xC758; PTB &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; SH2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC;. Confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xACF5;&#xAC1C; Shc fgfr2&#xC640;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; co-localization. PTB &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; shc &#xB9C9; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. FLIM (&#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC601;&#xC0C1; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;) &#xACB0;&#xACFC; Shc FGFR2 &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xC9C1;&#xC811; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xC81C;&#xC548; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; 3 &#xC9C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; RTK Src&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Src&#xC640; Shc &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5F0;&#xB8E8; Shc SH2 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC774;&#xC774; &#xD611;&#xD68C;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;. &#xAC04;&#xC811; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; fgfr2&#xC5D0; Shc &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xADDC;&#xCE59; &#xBC0F; &#xD558;&#xB958;&#xC5D0;&#xC774; RTK&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; 2 (FGFR2)&#xC5D0; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130; Shc&#xC758; &#xAC04;&#xC811; &#xBAA8;&#xC9D1;.

La prote&iacute;na adaptadora Shc (homolog&iacute;a Src y prote&iacute;na que contiene col&aacute;geno) desempe&ntilde;a un papel importante en la activaci&oacute;n de v&iacute;as aguas abajo de RTKs (tirosina quinasas de receptor) de se&ntilde;alizaci&oacute;n que regulan diversas funciones celulares, como la diferenciaci&oacute;n, la adherencia, la migraci&oacute;n y la mitog&eacute;nesis. A pesar de ser fosforilado aguas abajo de los miembros de la familia FGFR (receptor del factor de crecimiento del fibroblasto), una interacci&oacute;n directa de Shc con esta familia del receptor no se ha descrito hasta la fecha. Varios estudios han sugerido posibles sitios de Uni&oacute;n para el dominio de Shc PTB (dominio phosphotyrosine-obligatorio) y/o dominio SH2 (homolog&iacute;a Src 2) en FGFR1, pero ninguna interacci&oacute;n de cuerpo entero Shc con estos sitios se ha divulgado en vivo. En el presente estudio, se investig&oacute; la importancia del dominio SH2 y el dominio PTB en contrataci&oacute;n de Shc a FGFR2(IIIc) para caracterizar la interacci&oacute;n de estas dos prote&iacute;nas. Microscop&iacute;a confocal revel&oacute; amplia co-localizaci&oacute;n de Shc con FGFR2. El dominio PTB fue identificado como el componente cr&iacute;tico de Shc que media la localizaci&oacute;n de la membrana. Resultados del FLIM (microscop&iacute;a im&aacute;genes de la vida de fluorescencia) revelaron que la interacci&oacute;n entre Shc y FGFR2 es indirecta, sugiriendo que la prote&iacute;na adaptadora forma parte de un complejo que contiene el receptor de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Identificamos la fuente de RTK - no como una prote&iacute;na que interviene en la formaci&oacute;n de un complejo ternario de tal potencialmente. Aunque una interacci&oacute;n entre fuente y Shc se ha descrito previamente, en el presente estudio nos implican el dominio Shc SH2 como nuevo mediador de esta asociaci&oacute;n. La contrataci&oacute;n de Shc a FGFR2 mediante un mecanismo indirecto ofrece nuevas perspectivas en el Reglamento de la Asamblea de la prote&iacute;na y la activaci&oacute;n de diferentes v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n aguas abajo de este RTK.

Contrataci&oacute;n indirecta del se&ntilde;alizaci&oacute;n adaptador Shc para el receptor del factor de crecimiento fibrobl&aacute;stico 2 (FGFR2).

&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x4E86;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x80DE;&#x5185;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x4EB2;&#x6C34;&#x5171;&#x8F6D;&#x535F;&#x5549;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6FC0;&#x70C8;&#x7EBF;&#x6027;&#x5438;&#x6536;&#x5728; 650-800 nm &#x548C;&#x9AD8;&#x7684;&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x6C27;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x7387; &#xFF08;&#x7532;&#x9187;&#x7684; 0.5-0.9&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x9AD8;&#x6548;&#x81F4;&#x654F;&#x5242;&#x7684;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5; (PDT)&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5C55;&#x793A;&#x5728; 700-800 nm &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x91CF;&#x5B50;&#x6536;&#x76CA;&#x7387;&#x8FBE; 0.13 &#x4E2D;&#x7532;&#x9187;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x6781;&#x5927;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x5438;&#x6536;&#x6781;&#x5927;&#x503C;&#x7684; 8,000 17,000 &#x901A;&#x7528;&#x6C7D;&#x8F66;&#x4E2D;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x805A;&#x5408;&#x5728;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#xFF0C;&#x4F46;&#x805A;&#x5408;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x725B;&#x8840;&#x6E05;&#x767D;&#x86CB;&#x767D; &#xFF08;BSA&#xFF09;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x6240;&#x4F53;&#x73B0;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x9510;&#x5316;&#x5728;&#x53D1;&#x5C04;&#x6CE2;&#x6BB5;&#x3002;&#x6B64;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5171;&#x7126;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7528;&#x6765;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7387;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6444;&#x53D6;&#x3001; &#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x5149;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3002;&#x535F;&#x5549;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E0E;&#x6B63;&#x7535;&#x8377;&#x53D6;&#x4EE3;&#x5206;&#x533A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#x8D1F;&#x7535;&#x8377;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x6BD4;&#x4EFB;&#x4F55;&#x65F6;&#x5019;&#x90FD;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5149;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x4F18;&#x4E8E;&#x4E34;&#x5E8A; photosensitiser &#x7EF4;&#x3002;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x53C2;&#x6570;&#x548C;&#x80DE;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x548C;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5;&#x662F;&#x6709;&#x5E0C;&#x671B;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x3002;

&#x7269;&#x7406;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x80DE;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x535F;&#x5549;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x53D1;&#x5149;&#x52A8;&#x529B;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;

We have investigated the photophysical properties and intracellular behaviour of a series of hydrophilic conjugated porphyrin dimers. All the dimers exhibit intense linear absorption at 650-800 nm and high singlet oxygen quantum yields (0.5-0.9 in methanol), as required for an efficient sensitiser for photodynamic therapy (PDT). They also exhibit fluorescence at 700-800 nm, with fluorescence quantum yields of up to 0.13 in methanol, and show extremely large two-photon absorption maxima of 8,000-17,000 GM in the near-IR. The dimers aggregate in aqueous solution, but aggregation is reduced by binding to bovine serum albumin (BSA), as manifested by an increase in fluorescence intensity and a sharpening in the emission bands. This process can be regarded as a model for the interaction with proteins under physiological conditions. Confocal fluorescence microscopy of live cells was used to monitor the rate of cellular uptake, intracellular localisation and photostability. Porphyrin dimers with positively charged substituents partition into cells more efficiently than the negatively charged dimers. The photostability of these dimers, in living cells, is significantly better than that of the clinical photosensitiser verteporfin. Analysis of the photophysical parameters and intracellular imaging data indicates that these dimers are promising candidates for one-photon and two-photon excited PDT.

Photophysical properties and intracellular imaging of water-soluble porphyrin dimers for two-photon excited photodynamic therapy.

Nous avons &eacute;tudi&eacute; les propri&eacute;t&eacute;s photophysiques et le comportement intracellulaire d&#39;une s&eacute;rie de dim&egrave;res de porphyrine conjugu&eacute;s hydrophiles. Tous les dim&egrave;res pr&eacute;sentent une absorption lin&eacute;aire intense &agrave; 650-800 nm et les haute singulet d&#39;oxyg&egrave;ne rendements quantiques (0,5 &agrave; 0,9 dans le m&eacute;thanol), tel que requis pour un sensibilisateur efficace pour la th&eacute;rapie photodynamique (PDT). Elles pr&eacute;sentent de fluorescence &agrave; 700-800 nm, avec quantique de la fluorescence des rendements de jusqu&#39;&agrave; 0,13 dans le m&eacute;thanol et pr&eacute;sentent des maxima de tr&egrave;s grande absorption biphotonique de 8 000-17 000 GM dans le pr&egrave;s-IR. Les dim&egrave;res agr&egrave;gent en solution aqueuse, mais agr&eacute;gation est r&eacute;duite par la liaison &agrave; l&#39;albumine s&eacute;rique bovine (BSA), qui se manifeste par une augmentation dans l&#39;intensit&eacute; de la fluorescence et une nettet&eacute; dans les bandes d&#39;&eacute;mission. Ce processus peut &ecirc;tre consid&eacute;r&eacute; comme un mod&egrave;le pour l&#39;interaction avec les prot&eacute;ines dans des conditions physiologiques. Microscopie Confocal fluorescence des cellules vivantes a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour surveiller le taux de capture cellulaire, localisation intracellulaire et la photostabilit&eacute;. Dim&egrave;res de porphyrine avec charge positive partition de substituants en cellules plus efficacement que les dim&egrave;res charg&eacute;s n&eacute;gativement. La photostabilit&eacute; de ces dim&egrave;res, dans les cellules vivantes, est nettement meilleure que celle de la vert&eacute;porfine clinique photosensibilisateur. Analyse des donn&eacute;es d&#39;imagerie intracellulaires et photophysiques param&egrave;tres indique que ces dim&egrave;res sont candidats prometteurs pour un photon et deux photons PDT excit&eacute;.

Propri&eacute;t&eacute;s photophysiques et imagerie intracellulaire des dim&egrave;res de porphyrine soluble dans l&#39;eau pour la th&eacute;rapie photodynamique excit&eacute;e deux photons.

Wir haben die photophysikalische Eigenschaften und intrazellul&auml;re Verhalten einer Reihe von hydrophilen konjugierte Porphyrin-Dimer untersucht. Die Dimere weisen intensive linearen Absorption bei 650-800 nm und hohe Singulett Sauerstoff Quanten Renditen (0,5-0,9 in Methanol), nach Bedarf f&uuml;r eine effiziente Sicherheitsvorkehrungen f&uuml;r photodynamische Therapie (PDT). Sie auch zeigen Fluoreszenz bei 700-800 nm mit Fluoreszenz-Quanten von bis zu 0,13 in Methanol ergibt, und zeigen Sie extrem gro&szlig;e zwei-Photonen-Absorptionsmaxima von 8.000-17.000 GM in das nahe-IR. Die Dimere zu aggregieren, in w&auml;ssriger L&ouml;sung, aber Aggregation wird durch Bindung an Rinderserumalbumin (BSA), verringert, da durch eine Steigerung in Fluoreszenz Intensit&auml;t und eine Versch&auml;rfung der Emission Bands manifestiert. Dieser Proze&szlig; kann als Modell f&uuml;r die Interaktion mit Proteinen unter physiologischen Bedingungen betrachtet werden. Konfokale Fluoreszenzmikroskopie von lebenden Zellen wurde verwendet, um die Rate der Aufnahme, intrazellul&auml;re Lokalisation und Photostabilit&auml;t zu &uuml;berwachen. Porphyrin-Dimer mit Zahlen effizienter als die negativ geladenen Dimere positiv Substituenten Partition in die Zellen. Die Photostabilit&auml;t diese Dimere, in lebenden Zellen, ist deutlich besser als die von der klinischen Photosensitiser AMD. Analyse der photophysikalische Parameter und intrazellul&auml;re Bilddaten zeigt, dass diese Dimere vielversprechende Kandidaten f&uuml;r ein Photon und zwei-Photonen aufgeregt PDT.

Photophysikalische Eigenschaften und intrazellul&auml;ren Imaging von wasserl&ouml;slichen Porphyrin-Dimer f&uuml;r zwei-Photonen aufgeregt photodynamische Therapie.

Abbiamo studiato la photophysical propriet&agrave; e comportamenti intracellulari di una serie di dimeri idrofilo porfirina coniugati. Tutti i dimeri esibiscono intenso assorbimento lineare a 650-800 nm e singoletto alto ossigeno quantum rese (0,5-0,9 in metanolo), come richiesto per un&#39;efficiente sensibilizzante per la terapia fotodinamica (PDT). Inoltre esibiscono fluorescenza a 700-800 nm, con quantum fluorescenza rendimenti di fino a 0,13 in metanolo e visualizza maxima estremamente elevato assorbimento del due-fotone di 8.000-17.000 GM nel vicino-IR. I dimeri di aggregazione in soluzione acquosa, ma aggregazione &egrave; ridotto dal legame con albumina di siero bovino (BSA), come si manifesta con un aumento nella intensit&agrave; di fluorescenza e un affilatura nelle bande di emissione. Questo processo pu&ograve; essere considerato come un modello per l&#39;interazione con le proteine in condizioni fisiologiche. Microscopia di fluorescenza confocale di cellule vive &egrave; stata utilizzata per monitorare il tasso di assorbimento cellulare, localizzazione intracellulare e fotostabilit&agrave;. Dimeri di porfirina con carica positiva partizione sostituenti nelle celle in modo pi&ugrave; efficiente rispetto i dimeri caricati negativamente. La fotostabilit&agrave; di questi dimeri, in cellule viventi, &egrave; significativamente migliore di quella della verteporfin clinica photosensitiser. Analisi dei parametri di photophysical e dati di imaging intracellulari indicano che questi dimeri sono promettenti candidati per uno-fotone e due-fotone eccitato PDT.

Photophysical propriet&agrave; e imaging intracellulare dei dimeri di porfirina solubile in acqua per due-fotone eccitato la terapia fotodinamica.

&#x5149;&#x7269;&#x6027;&#x3068;&#x306E;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5171;&#x5F79;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x6319;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5F37;&#x70C8;&#x306A;&#x7DDA;&#x5F62;&#x5438;&#x53CE; 650-800 nm &#x5E2F;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x3044;&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x9178;&#x7D20;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387; (&#x30E1;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB; 0.5-0.9)&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x5149;&#x7DDA;&#x529B;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5; (PDT) &#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A; sensitiser &#x306F;&#x3001;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x86CD;&#x5149; 700-800 nm, &#x86CD;&#x5149;&#x91CF;&#x5B50; 0.13 &#x30E1;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5229;&#x56DE;&#x308A;&#x3067;&#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x5438;&#x53CE;&#x6975;&#x5927; 8,000 17,000 GM &#x306E; IR &#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x3067;&#x96C6;&#x8A08;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3001;&#x767A;&#x5149;&#x30D0;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x660E;&#x793A;&#x3068;&#x30A6;&#x30B7;&#x8840;&#x6E05;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3; (BSA) &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x96C6;&#x8A08;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x307F;&#x306A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7D30;&#x80DE;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3068;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x7387;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3068;&#x7F6E;&#x63DB;&#x57FA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x8CA0;&#x8377;&#x96FB;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3088;&#x308A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x3002;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x6CC9;&#x6EF2;&#x51FA;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x826F;&#x597D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; 1 &#x5149;&#x5B50;&#x53CA;&#x3073; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77; PDT &#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x5019;&#x88DC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5149;&#x7269;&#x6027;&#x30FB; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x52B1;&#x8D77;&#x5149;&#x7DDA;&#x529B;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x30DD;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EA;&#x30F3;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; photophysical &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xD65C;&#xC6A9;&#xB41C; &#xD3EC; &#xB974; &#xD53C; &#xB9B0; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD589;&#xB3D9; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; photodynamic &#xCE58;&#xB8CC; (PDT)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; sensitiser&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC15;&#xB82C;&#xD55C; &#xC120;&#xD615; &#xD761;&#xC218; 650-800 nm &#xBC0F; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB192;&#xC740; &#xB0B4;&#xC758; &#xC0B0;&#xC18C; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728; (0.5-0.9 &#xBA54;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC5D0;&#xC11C;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC2DC;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; 700-800 nm, &#xD615;&#xAD11; &#xC591;&#xC790; &#xBA54;&#xD0C4;&#xC62C;&#xC5D0; 0.13 &#xCD5C;&#xB300;&#xC758; &#xC218;&#xC728;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC801;&#xC678;&#xC120;&#xC5D0; 8000 17000 GM&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD070; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xD761;&#xC218; &#xB9E5;&#xC2DC; &#xB9C8;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC218;&#xC131; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xAD11; &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBC29;&#xCD9C; &#xBC34;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xC120;&#xBA85; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC01; &#xC131; &#xC18C; &#xD608; &#xCCAD; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; (BSA)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC740; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Confocal &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;, &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD604;&#xC9C0;&#xD654; &#xBC0F; photostability&#xC758; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD3EC; &#xB974; &#xD53C; &#xB9B0; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC640; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xCE58;&#xD658; &#xD30C;&#xD2F0;&#xC158; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD80;&#xC815; &#xCCAD;&#xAD6C; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; photostability &#xC784;&#xC0C1; photosensitiser verteporfin&#xC758; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AB;&#xB2E4;. Photophysical &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC774;&#xC774; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xB294; &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xAD11;&#xC790;&#xC640; &#xAD11;&#xC790; &#xB450; &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; PDT &#xC704;&#xD55C; &#xC720;&#xB9DD;&#xD55C; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC790;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Photophysical &#xC18D;&#xC131; &#xBC0F; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xD765;&#xBD84;&#xB41C; photodynamic &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xD3EC; &#xB974; &#xD53C; &#xB9B0; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Hemos investigado las propiedades fotof&iacute;sicas y el comportamiento intracelular de una serie de d&iacute;meros de porfirina conjugado hidrof&iacute;lico. Todos los d&iacute;meros exhibici&oacute;n intensa absorci&oacute;n lineal en 650-800 nm y rendimientos de cu&aacute;ntica de ox&iacute;geno singlete alta (0.5-0.9 en metanol), seg&uacute;n sea necesario para una eficiente activador para la terapia fotodin&aacute;mica (PDT). Tambi&eacute;n exhiben fluorescencia en 700-800 nm, con cu&aacute;ntica de fluorescencia rendimientos de hasta 0,13 en metanol y muestran gran de dos fotones de absorci&oacute;n m&aacute;xima de 8.000-17.000 GM en la cerca-IR. Los d&iacute;meros agregan en soluci&oacute;n acuosa, pero agregaci&oacute;n se reduce al unirse a la alb&uacute;mina s&eacute;rica bovina (BSA), como se manifiesta por un aumento en la intensidad de fluorescencia y un afilado en las bandas de emisi&oacute;n. Este proceso puede considerarse como un modelo para la interacci&oacute;n con las prote&iacute;nas en condiciones fisiol&oacute;gicas. Microscop&iacute;a de fluorescencia confocal de c&eacute;lulas vivas fue utilizada para supervisar la tasa de absorci&oacute;n celular, localizaci&oacute;n intracelular y fotoestabilidad. D&iacute;meros de porfirina con cargado positivamente partici&oacute;n sustituyentes en c&eacute;lulas m&aacute;s eficientemente que los d&iacute;meros cargados negativamente. La medici&oacute;n de estos d&iacute;meros, en c&eacute;lulas vivas, es significativamente mejor que la de la cl&iacute;nica fotosensitizador verteporfina. An&aacute;lisis de los datos de imagen intracelulares y fotof&iacute;sicas par&aacute;metros indican que estos d&iacute;meros son candidatos prometedores para un fot&oacute;n y dos fotones PDT emocionado.

Propiedades fotof&iacute;sicas y proyecci&oacute;n de imagen intracelular de d&iacute;meros de porfirina soluble en agua para dos fotones excitaron la terapia fotodin&aacute;mica.

Immagini di vita di fluorescenza (FLIM) e formazione immagine di polarizzazione di fluorescenza sono tecniche complementari che possono essere utilizzati per estrarre informazioni su macromolecole da campioni biologici. A causa della sensibilit&agrave; di fluorescenza per l&#39;ambiente fisico e interazioni su scala nanometrica via F&ouml;rster resonance energy transfer (FRET), FLIM &egrave; stata implementata in molti laboratori per numerose applicazioni nel campo delle scienze della vita e oltre. Questa rassegna mira a fornire che una breve panoramica di alcune delle recenti progressi e le tecniche pi&ugrave; pertinentemente loro applicazioni nella cellula e tessuto imaging. Sono evidenziati i particolari meriti di misurazioni risolto polarizzazione di fluorescenza, compreso la capacit&agrave; unica di delucidare la ricorrenza dell&#39;homo-FRET.

Vita di fluorescenza e polarizzazione-risolto imaging in biologia cellulare.

&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; (FLIM) &#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x504F;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x88DC;&#x5B8C;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7269;&#x7406;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x74B0;&#x5883;&#x3068;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5; (FRET) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF; &#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x611F;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;FLIM &#x306F;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x5916;&#x306E;&#x6570;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x6240;&#x3067;&#x5B9F;&#x88C5;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x6982;&#x8981;&#x30C6;&#x30AF;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3084;&#x3088;&#x308A;&#x9069;&#x5207;&#x30BB;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x52AA;&#x3081;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30E2; FRET &#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x504F;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E1;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x304C;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3068;&#x504F;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;

Fluoreszenz-Lebensdauer-Imaging (FLIM) und Fluoreszenz-Polarisation-Imaging sind erg&auml;nzende Techniken, die verwendet werden k&ouml;nnen, um Informationen zu Makromolek&uuml;len aus biologischen Proben zu extrahieren. Aufgrund der Sensibilit&auml;t der Fluoreszenz f&uuml;r die physikalisch-chemischen Umwelt und Nanometerbereich Interaktionen &uuml;ber F&ouml;rster-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) wurde in vielen Laboratorien f&uuml;r zahlreiche Anwendungen in den Life Sciences und dar&uuml;ber hinaus FLIM umgesetzt. Diese Bewertung soll bieten ein kurzer &Uuml;berblick &uuml;ber einige der j&uuml;ngsten Fortschritte bei den Techniken und vieles mehr passendere ihre Anwendungen in Zellen und Gewebe-Imaging. Die besonderen Verdienste der Polarisation gel&ouml;st Fluoreszenzmessungen werden hervorgehoben, darunter die einzigartige F&auml;higkeit, das Auftreten von Homo-FRET zu erhellen.

Fluoreszenz-Lebensdauer und Polarisation gel&ouml;st Bildgebung in der Zellbiologie.

&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x504F;&#x632F;&#x6210;&#x50CF;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x6765;&#x4ECE;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x63D0;&#x53D6;&#x4FE1;&#x606F;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x7531;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7406;&#x5316;&#x73AF;&#x5883;&#xFF0C;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7; F&ouml;rster &#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; (&#x97F3;&#x54C1;) &#x7EB3;&#x7C73;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x4EA4;&#x5F80;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#xFF0C;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5728;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x53CA;&#x4EE5;&#x540E;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x5B9E;&#x65BD;&#x4E86;&#x80F6;&#x7247;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5BA1;&#x67E5;&#x65E8;&#x5728;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7B80;&#x8981;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x8FDB;&#x5C55;&#x66F4;&#x8D34;&#x5207;&#x5730;&#x53CA;&#x5176;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x3002;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x504F;&#x632F;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4F18;&#x70B9;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6F84;&#x6E05;&#x53D1;&#x751F;&#x7684;&#x76F4;&#x7ACB;&#x4EBA;&#x70E6;&#x607C;&#x7684;&#x72EC;&#x7279;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x548C;&#x504F;&#x632F;&#x5206;&#x8FA8;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3002;

Fluorescence lifetime imaging (FLIM) and fluorescence polarization imaging are complementary techniques that can be used to extract information about macromolecules from biological samples. Owing to the sensitivity of fluorescence to the physicochemical environment, and nanometer-scale interactions via FÃ¶rster resonance energy transfer (FRET), FLIM has been implemented in many laboratories for numerous applications in the life sciences and beyond. This review seeks to provide a brief overview of some of the recent advances in the techniques and more pertinently their applications in cell and tissue imaging. The particular merits of polarization-resolved fluorescence measurements are highlighted, including the unique ability to elucidate the occurrence of homo-FRET.

Fluorescence lifetime and polarization-resolved imaging in cell biology.

Imagerie de fluorescence lifetime (FLIM) et imagerie de polarisation de fluorescence sont des techniques compl&eacute;mentaires qui peuvent &ecirc;tre utilis&eacute;s pour extraire des informations sur des macromol&eacute;cules d&#39;&eacute;chantillons biologiques. En raison de la sensibilit&eacute; de la fluorescence pour l&#39;environnement physicochimique et les interactions de nanom&eacute;trique par transfert d&#39;&eacute;nergie de r&eacute;sonance F&ouml;rster (FRET), FLIM a &eacute;t&eacute; mis en place dans de nombreux laboratoires pour de nombreuses applications dans les sciences de la vie et au-del&agrave;. Cette r&eacute;vision vise &agrave; fournir qu&#39;un bref aper&ccedil;u de certains des r&eacute;cents progr&egrave;s dans les techniques et plus pertinemment leurs applications dans la cellule et l&#39;imagerie des tissus. Les m&eacute;rites particuliers des mesures de fluorescence r&eacute;solue en polarisation sont mises en &eacute;vidence, y compris la capacit&eacute; unique d&#39;&eacute;lucider l&#39;apparition de l&#39;homo-FRET.

Dur&eacute;e de vie de fluorescence et r&eacute;solue en polarisation de l&#39;imagerie en biologie cellulaire.

&#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; (FLIM) &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; &#xD3B8;&#xAD11; &#xC601;&#xC0C1; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559; &#xACAC;&#xBCF8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xCD94;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC644; &#xAE30;&#xC220;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xBB3C;&#xB9AC; &#xD654;&#xD559;&#xC801; &#xD658;&#xACBD;&#xACFC; F&ouml;rster &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB098;&#xB178;&#xBBF8;&#xD130; &#xC2A4;&#xCF00;&#xC77C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4;, FLIM &#xC0DD;&#xBA85; &#xACFC;&#xD559;&#xC744; &#xB118;&#xC5B4; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xD604; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC77C;&#xBD80;&#xC758; &#xAC04;&#xB7B5; &#xD55C; &#xAC1C;&#xC694; &#xAE30;&#xC220;&#xACFC; &#xB354; &#xBC1C;&#xC804; pertinently &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD568;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC591;&#xADF9; &#xD654; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xAC15;&#xC870; &#xD638;&#xBAA8; &#xBB34;&#xC11C; &#xC6CC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC591;&#xADF9; &#xD654; &#xD574;&#xACB0;.

Im&aacute;genes de la vida de fluorescencia (FLIM) y la proyecci&oacute;n de imagen de polarizaci&oacute;n de la fluorescencia son t&eacute;cnicas complementarias que pueden utilizarse para extraer informaci&oacute;n sobre macromol&eacute;culas de muestras biol&oacute;gicas. Debido a la sensibilidad de fluorescencia al ambiente fisicoqu&iacute;mica y las interacciones de escala nanom&eacute;trica mediante la transferencia de energ&iacute;a de resonancia F&ouml;rster (traste), FLIM se ha implementado en muchos laboratorios para numerosas aplicaciones en Ciencias de la vida y m&aacute;s all&aacute;. Este informe pretende ofrecer que una breve rese&ntilde;a de algunos de los recientes avances en las t&eacute;cnicas y m&aacute;s pertinentemente sus aplicaciones en el celular y tisular. Se destacan los m&eacute;ritos particulares de las mediciones de fluorescencia resuelta en polarizaci&oacute;n, incluyendo la capacidad de aclarar la ocurrencia de homo-FRET.

Vida de fluorescencia y proyecci&oacute;n de imagen de polarizaci&oacute;n-resuelto en biolog&iacute;a celular.

Das Adapterprotein Grb2 ist f&uuml;r intrazellul&auml;re fr&uuml;h komplexe vieler Rezeptor-Tyrosin-Kinasen und spielt eine wichtige Rolle, die transducing Signale, die zur Aktivierung der MAP-Kinase signalisieren angeworben. Die SH2 bisher ergab Dom&auml;ne des Grb2 Rezeptor-Interaktionen mit phosphorylierten Tyrosin R&uuml;ckst&auml;nde befindet sich direkt auf den Rezeptor oder zus&auml;tzliche docking-Proteine zu vermitteln. Hier berichten wir, dass FGFR2 Grb2 durch seine C-terminalen SH3-Dom&auml;ne rekrutiert. Die Bindungsstelle in diesem Bereich wurde die Prolin-reiche C-Terminus des Rezeptors zugeordnet. L&ouml;schung der letzten 10 Aminos&auml;uren von FGFR2 hebt Interaktion mit Grb2. synthetische Peptide, die basierend auf der C-Terminus von FGFR2 an voller L&auml;nge Grb2 mit niedrige micromolar Affinit&auml;t zu binden. Die Funktion dieses neuartigen Modus Grb2 Bindung bietet Widerstand gegen standortspezifische Shp2-vermittelte Rezeptor Dephosphorylierung.

Direkte Bindung des Grb2 SH3-Dom&auml;ne FGFR2 regelt SHP2-Funktion.

La proteina dell&#39;adattatore Grb2 &egrave; reclutata per intracellulare presto segnalazione complessi di molti del recettore tirosina chinasi e gioca un ruolo importante transducing i segnali che portano all&#39;attivazione della chinasi di mappa. Ad oggi il SH2 dominio di Grb2 ha dimostrato di mediare le interazioni recettore con residui di tirosina fosforilata situati direttamente sul recettore o sulle proteine di ancoraggio ausiliarie. Qui riportiamo che FGFR2 reclute Grb2 attraverso il dominio C-terminale SH3. Il sito di legame di questo dominio &egrave; stato mappato il ricco di prolina C-terminale del recettore. Eliminazione degli ultimi 10 amminoacidi del FGFR2 abroga interazione con Grb2. peptidi sintetici basati su C-terminale del FGFR2 associare a piena lunghezza Grb2 con bassa affinit&agrave; micromolari. La funzione di questa modalit&agrave; di romanzo di Grb2 associazione fornisce resistenza alla defosforilazione del recettore mediata Shp2 site-specific.

Legame diretto tra dominio SH3 di Grb2 FGFR2 regola SHP2 funzione.

&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; Grb2 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x521D;&#x671F;&#x932F;&#x4F53;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x6F14;&#x5287;&#x306E;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SH2 &#x3092;&#x65E5;&#x306B;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; Grb2 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3084;&#x88DC;&#x52A9;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053; FGFR2 Grb2 &#x305D;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x5074; SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x52DF;&#x96C6;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306F;&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x524A;&#x9664; FGFR2 &#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306E; 10 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068; Grb2&#x3002; &#x5168;&#x9577; Grb2 &#x4F4E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x89AA;&#x548C;&#x6027; FGFR2 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x5408;&#x6210;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x8B70;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E; Grb2 &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x95A2;&#x6570; Shp2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8131;&#x71D0;&#x9178;&#x5316;&#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

FGFR2 Grb2 SH3 &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;SHP2 &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Grb2 &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCD08;&#xAE30; &#xC2E0;&#xD638; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; tyrosine kinases&#xC640; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC758; &#xB2E8;&#xC9C0; transducing &#xC2E0;&#xD638; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB0A0;&#xC9DC;&#xB294; SH2 grb2&#xC758; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC911;&#xC7AC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xC870; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; sited phosphorylated &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; fgfr2&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; grb2&#xC744; &#xC2E0;&#xBCD1; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD504;&#xB864;&#xB9B0; &#xBD80;&#xC720;&#xD55C; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xD551;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Fgfr2&#xC758; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9; 10 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xB294; &#xC0C1;&#xD638; Grb2. &#xD569;&#xC131; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; fgfr2&#xC758; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB0AE;&#xC740; micromolar &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC640; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; grb2&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC18C;&#xC124; Grb2 &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBAA8;&#xB4DC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xBCC4; Shp2 &#xC911;&#xC7AC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; dephosphorylation&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

FGFR2 Grb2 SH3 &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; SHP2 &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC870;&#xC808;.

La prote&iacute;na adaptadora Grb2 es reclutada a intracelular temprano se&ntilde;alizaci&oacute;n complejos de muchos receptor tirosina quinasas y juega un papel importante en la transducci&oacute;n de se&ntilde;ales hacia la activaci&oacute;n de la cinasa del mapa. Hasta la fecha el SH2 ha demostrado dominio de Grb2 para mediar la interacci&oacute;n del receptor con residuos de tirosina fosforilados situados directamente sobre el receptor o en prote&iacute;nas para auxiliares. Aqu&iacute; divulgamos que FGFR2 recluta Grb2 a trav&eacute;s de su dominio SH3 c-terminal. El sitio de uni&oacute;n de este dominio fue trazado a los ricos en prolina c-terminal del receptor. Eliminaci&oacute;n de los &uacute;ltimos 10 amino&aacute;cidos de FGFR2 abroga interacci&oacute;n con Grb2. p&eacute;ptidos sint&eacute;ticos basados en el c-terminal de FGFR2 se unen a Grb2 completas con baja afinidad micromolar. La funci&oacute;n de este nuevo modo de Grb2 enlace proporciona resistencia a la desfosforilaci&oacute;n de site-specific Shp2 mediada por receptor.

Atascamiento directo del dominio SH3 de Grb2 a FGFR2 regula SHP2 funci&oacute;n.

&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x86CB;&#x767D; Grb2 &#x88AB;&#x62DB;&#x8058;&#x5230;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4FE1;&#x53F7;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x53D7;&#x4F53;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176;&#x548C;&#x91CD;&#x5934;&#x620F;&#x6362;&#x5411;&#x4FE1;&#x53F7;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5730;&#x56FE;&#x6FC0;&#x9176;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7740;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62; SH2 Grb2 &#x57DF;&#x8868;&#x660E;&#x8C03;&#x89E3;&#x4E0E;&#x653E;&#x7F6E;&#x6216;&#x8F85;&#x52A9;&#x575E;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E0A;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x901A;&#x8FC7;&#x5176; C &#x7EC8;&#x7AEF; SH3 &#x57DF; FGFR2 &#x65B0;&#x5175; Grb2&#x3002;&#x6B64;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#x6620;&#x5C04;&#x5230;&#x5BCC;&#x542B;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x7684; C-&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x53D7;&#x4F53;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x6700;&#x540E; 10 &#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684; FGFR2 &#x7684;&#x5E9F;&#x9664;&#x4E0E; Grb2.&#x57FA;&#x4E8E; FGFR2 C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x80BD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5168;&#x957F; Grb2 &#x4E0E;&#x4F4E; micromolar &#x4EB2;&#x548C;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684; Grb2 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x51FD;&#x6570;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x8131;&#x6C2E;&#x9664;&#x78F7; Shp2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7279;&#x5B9A;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6297;&#x6027;&#x3002;

&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; FGFR2 Grb2 SH3 &#x57DF;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1; SHP2 &#x529F;&#x80FD;&#x3002;

The adaptor protein Grb2 is recruited to intracellular early signalling complexes of many receptor tyrosine kinases and plays an important role transducing signals leading to MAP kinase activation. To date the SH2 domain of Grb2 has been shown to mediate receptor interactions with phosphorylated tyrosine residues sited directly on the receptor or on auxiliary docking proteins. Here we report that FGFR2 recruits Grb2 through its C-terminal SH3 domain. The binding site of this domain was mapped to the proline-rich C-terminus of the receptor. Deletion of the last 10 amino acids of FGFR2 abrogates interaction with Grb2. Synthetic peptides based on the C-terminus of FGFR2 bind to full length Grb2 with low micromolar affinity. The function of this novel mode of Grb2 binding provides resistance to site-specific Shp2-mediated receptor dephosphorylation.

Direct binding of Grb2 SH3 domain to FGFR2 regulates SHP2 function.

La prot&eacute;ine adaptatrice Grb2 est recrut&eacute;e &agrave; l&#39;intracellulaire de signalisation t&ocirc;t complexes de nombreux r&eacute;cepteurs tyrosine kinases et joue un r&ocirc;le important, transduction de signaux conduisant &agrave; l&#39;activation de la kinase carte. &Agrave; ce jour le SH2 domaine de Grb2 s&#39;est av&eacute;r&eacute; de r&eacute;cepteurs les interactions avec les r&eacute;sidus de tyrosine phosphoryl&eacute;es situ&eacute;s directement sur le r&eacute;cepteur ou sur les prot&eacute;ines d&#39;ancrage auxiliaires. Nous rapportons ici que FGFR2 recrute Grb2 &agrave; travers son domaine C-terminal SH3. Le site de liaison de ce domaine a &eacute;t&eacute; mapp&eacute; &agrave; la proline-riche C-terminale du r&eacute;cepteur. Suppression des 10 derniers acides amin&eacute;s de FGFR2 abroge interaction avec Grb2. peptides synth&eacute;tiques bas&eacute;s sur l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C-terminale de FGFR2 lient &agrave; pleine longueur Grb2 avec faible affinit&eacute; micromolaire. La fonction de ce nouveau mode de Grb2 liaison fournit la r&eacute;sistance &agrave; la d&eacute;phosphorylation de r&eacute;cepteurs de Shp2 v&eacute;hicul&eacute;e par in situ.

Liaison directe du domaine SH3 Grb2 FGFR2 r&eacute;gule la fonction SHP2.

&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x504F;&#x632F;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50; 9-(2-&#x7FA7;&#x57FA;-2-cyanovinyl) julolidine (CCVJ)&#x3001; 9-(2&#xFF0C;2-dicyanovinyl) julolidine (DCVJ) &#x548C;&#x7EC6;&#x89C2;&#x53D6;&#x4EE3;&#x787C; dipyrromethene &#xFF08;BODIPY-C(12))&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x6027;&#x8D28;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x4F9D;&#x8D56;&#x5468;&#x56F4;&#x6EB6;&#x5242;&#x7684;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3002;&#x7531;&#x65B9;&#x7A0B;&#x9996;&#x5148;&#x63CF;&#x8FF0;&#x548C; F&ouml;rster &#x548C;&#x970D;&#x592B;&#x66FC;&#x63D0;&#x51FA;&#x7ED9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x7387;&#x4E0E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7684;&#x5468;&#x56F4;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A;&#x8367;&#x5149;&#x5468;&#x56F4;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x5FAE;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x7C98;&#x5EA6;&#x5728;&#x5FAE;&#x89C2;&#x57FA;&#x4E8E;&#x5176;&#x7C98;&#x5EA6;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x63A2;&#x9488;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x7406;&#x8BBA;&#x6846;&#x67B6;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x4E0E;&#x4F69;&#x6797;&#x65B9;&#x7A0B; F&ouml;rster-&#x970D;&#x592B;&#x66FC;&#x65B9;&#x7A0B;&#x548C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x548C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x67D3;&#x6599;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7684;&#x63AA;&#x65BD;&#x5229;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5236;&#x5EA6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x504F;&#x632F;&#x5206;&#x8FA8;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x80DE;&#x5185;&#x7C98;&#x5EA6;&#x6D4B;&#x91CF;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x7A33;&#x6001;&#x8367;&#x5149;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8367;&#x5149;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; CCVJ &#x548C; DCVJ &#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x662F;&#x5927;&#x5927;&#x4F4E;&#x4E8E; BODIPY-C(12) &#x7684;&#x7C98;&#x5EA6;&#x8303;&#x56F4; 0.6 &#x4E2D; &lt; &eta; &lt; 600 cP&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7A33;&#x6001;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x6D4B;&#x91CF;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5FAE;&#x4F4E;&#x7C98;&#x5EA6; &#xFF08;&lt; 3 cP) &#x7C98;&#x5EA6;&#x653F;&#x6743;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x597D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x76F8;&#x6BD4;&#x521A;&#x6027;&#x67D3;&#x6599;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x5FAE;&#x7C98;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x548C;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x52A8;&#x6001;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x7C98;&#x5EA6;&#x9AD8;&#x603B;&#x5171;&#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x8F6C;&#x5B50;&#x7684;&#x5404;&#x5411;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;

We present polarization-resolved fluorescence measurements of fluorescent molecular rotors 9-(2-carboxy-2-cyanovinyl)julolidine (CCVJ), 9-(2,2-dicyanovinyl)julolidine (DCVJ), and a meso-substituted boron dipyrromethene (BODIPY-C(12)). The photophysical properties of these molecules are highly dependent on the viscosity of the surrounding solvent. The relationship between their quantum yields and the viscosity of the surrounding medium is given by an equation first described and presented by FÃ¶rster and Hoffmann and can be used to determine the microviscosity of the environment around a fluorophore. Herein we evaluate the applicability of molecular rotors as probes of apparent viscosity on a microscopic scale based on their viscosity dependent fluorescence depolarization. We develop a theoretical framework, combining the FÃ¶rster-Hoffmann equation with the Perrin equation and compare the dynamic ranges and usable working regimes for these dyes in terms of utilising fluorescence anisotropy as a measure of viscosity. We present polarization-resolved fluorescence spectra and steady-state fluorescence anisotropy imaging data for measurements of intracellular viscosity. We find that the dynamic range for fluorescence anisotropy for CCVJ and DCVJ is significantly lower than that of BODIPY-C(12) in the viscosity range 0.6<Î·<600 cP. Moreover, using steady-state anisotropy measurements to probe microviscosity in the low (<3 cP) viscosity regime, the molecular rotors can offer a better dynamic range in anisotropy compared with a rigid dye as a probe of microviscosity, and a higher total working dynamic range in terms of viscosity.

Fluorescence anisotropy of molecular rotors.

On pr&#xE9;senter polarisation r&#xE9;gl&#xE9;e mesures de fluorescence de fluorescents rotors mol&#xE9;culaires 9 - (2-carboxy-2-cyanovinyl) julolidine (CCVJ), 9 - (2,2-dicyanovinyl) julolidine (DCVJ), et un m&#xE9;so-substitu&#xE9;e de bore dipyrrom&#xE9;th&#xE8;ne (BODIPY -C (12)). Les propri&#xE9;t&#xE9;s photophysiques de ces mol&#xE9;cules sont fortement tributaires de la viscosit&#xE9; du solvant environnant. La relation entre leurs rendements quantiques et la viscosit&#xE9; du milieu environnant est donn&#xE9;e par une &#xE9;quation d&#xE9;crite pour la premi&#xE8;re et pr&#xE9;sent&#xE9; par F&#xF6;rster et Hoffmann et peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour d&#xE9;terminer la microviscosit&#xE9; de l&#x26;#39;environnement autour d&#x26;#39;un fluorophore. Ici, nous &#xE9;valuons l&#x26;#39;applicabilit&#xE9; de rotors mol&#xE9;culaires en tant que sondes de viscosit&#xE9; apparente &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle microscopique en fonction de leur viscosit&#xE9; d&#xE9;polarisation par fluorescence d&#xE9;pendante. On &#xE9;laborer un cadre th&#xE9;orique, combinant l&#x26;#39;&#xE9;quation F&#xF6;rster-Hoffmann avec l&#x26;#39;&#xE9;quation Perrin et comparer les plages dynamiques et utilisables r&#xE9;gimes de travail de ces colorants en termes de anisotropie de fluorescence en utilisant comme mesure de la viscosit&#xE9;. Nous pr&#xE9;sentons &#xE0; la polarisation des spectres de fluorescence r&#xE9;solue et l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre de fluorescence des donn&#xE9;es d&#x26;#39;imagerie anisotropie pour les mesures de viscosit&#xE9; intracellulaire. Nous constatons que la plage dynamique de l&#x26;#39;anisotropie de fluorescence pour CCVJ et DCVJ est nettement inf&#xE9;rieur &#xE0; celui de BODIPY-C (12) dans la plage de viscosit&#xE9; 0,6 &#x26;lt;&#x3B7; &#x26;lt;600 cP. En outre, en utilisant des mesures d&#x26;#39;anisotropie l&#x26;#39;&#xE9;tat d&#x26;#39;&#xE9;quilibre pour sonder microviscosit&#xE9; dans le r&#xE9;gime de la viscosit&#xE9; (&#x26;lt;3 cP) faible, les rotors mol&#xE9;culaires peuvent offrir une meilleure gamme dynamique d&#x26;#39;anisotropie par rapport &#xE0; un colorant rigide comme une sonde de microviscosit&#xE9;, et un total plus &#xE9;lev&#xE9; de travail dynamique gamme en termes de viscosit&#xE9;.

Anisotropie de fluorescence des rotors mol&#xE9;culaires

Wir pr&auml;sentieren Polarisation gel&ouml;st Fluoreszenz-Messungen von fluoreszierenden molekularen Rotoren 9-(2-Carboxy-2-Cyanovinyl) Julolidine (CCVJ), 9-(2,2-Dicyanovinyl) Julolidine (DCVJ) und eine Meso-substituierte Bor-Dipyrromethene (BODIPY-C(12)). Die photophysikalische Eigenschaften dieser Molek&uuml;le sind stark abh&auml;ngig von der Viskosit&auml;t des L&ouml;sungsmittels umliegenden. Die Beziehung zwischen die Quanten-Renditen und die Viskosit&auml;t des umgebenden Mediums ist gegeben durch eine Gleichung zuerst beschrieben und dargestellt von F&ouml;rster und Hoffmann und kann verwendet werden, um zu bestimmen, die Microviscosity der Umgebung um ein Fluorophor. Hierin bewerten wir die Anwendbarkeit der molekularen Rotoren als Sonden der scheinbare Viskosit&auml;t auf einer mikroskopischen Skala basierend auf ihre Viskosit&auml;t abh&auml;ngige Fluoreszenz Depolarisierung. Wir entwickeln einen theoretischen Rahmen kombiniert die F&ouml;rster-Hoffmann-Gleichung mit der Gleichung Perrin und vergleichen die Dynamikbereiche und nutzbare arbeiten-Regime f&uuml;r diese Farbstoffe in Bezug auf die Nutzung von Fluoreszenz Anisotropie als Ma&szlig; f&uuml;r die Viskosit&auml;t. Wir pr&auml;sentieren Polarisation gel&ouml;st Fluoreszenz-Spektren und station&auml;ren Fluoreszenz Anisotropie imaging Daten zur Messung der intrazellul&auml;ren Viskosit&auml;t. Wir finden, dass der Dynamikumfang f&uuml;r Fluoreszenz-Anisotropie f&uuml;r CCVJ und DCVJ deutlich geringer als die der BODIPY-C(12) in den Viskosit&auml;tsbereich 0.6 ist &lt; &eta; &lt; 600 cP. Im &uuml;brigen station&auml;ren Anisotropie Ma&szlig;angaben verwenden, um Microviscosity in den niedrigen Pr&uuml;fpunkt (&lt; 3 cP) Viskosit&auml;t Regime, die molekularen Rotoren bieten einen besser Dynamikbereich Anisotropie im Vergleich zu einer starren F&auml;rbung als Sonde Microviscosity und insgesamt h&ouml;heren Dynamikbereich in Bezug auf die Viskosit&auml;t zu arbeiten.

Fluoreszenz-Anisotropie der molekularen Rotoren.

Vi presentiamo le misure di fluorescenza risolta polarizzazione dei rotori molecolari fluorescenti 9-(2-carboxy-2-cyanovinyl) julolidine (CCVJ), 9-(2,2-dicyanovinyl) julolidine (DCVJ) e un dipyrromethene di boro meso-sostituiti (BODIPY-C(12)). La propriet&agrave; photophysical di queste molecole sono altamente dipende la viscosit&agrave; del solvente circostante. Il rapporto tra il loro rendimento quantico e la viscosit&agrave; del mezzo circostante &egrave; dato da un&#39;equazione in primo luogo descritto e presentato da F&ouml;rster e Hoffmann e pu&ograve; essere utilizzato per determinare il microviscosity dell&#39;ambiente intorno un fluoroforo. Qui valutiamo l&#39;applicabilit&agrave; dei rotori molecolari come sonde di viscosit&agrave; apparente su scala microscopica, basata sulla loro depolarizzazione di fluorescenza dipendente dalla viscosit&agrave;. Sviluppiamo un quadro teorico, combinando l&#39;equazione di F&ouml;rster-Hoffmann con l&#39;equazione di Perrin e confrontare gli intervalli dinamici e regimi di lavoro utilizzabili per questi coloranti in termini utilizzando anisotropia di fluorescenza come misura della viscosit&agrave;. Vi presentiamo gli spettri di fluorescenza risolta di polarizzazione e anisotropia di fluorescenza steady-state dati per misurazioni di viscosit&agrave; intracellulare di imaging. Troviamo che la gamma dinamica per anisotropia di fluorescenza per CCVJ e DCVJ &egrave; notevolmente inferiore a quello di BODIPY-C(12) nella gamma di viscosit&agrave; 0.6 &lt; &eta; &lt; 600 cP. Inoltre, utilizzando misure di anisotropia di steady-state per sonda microviscosity nella bassa (&lt; 3 cP) regime di viscosit&agrave;, i rotori molecolari in grado di offrire una migliore gamma dinamica nell&#39;anisotropia confrontato con un colorante rigido come una sonda di microviscosity e un totale pi&ugrave; alto working range dinamico in termini di viscosit&agrave;.

Anisotropia di fluorescenza di rotori molecolari.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x504F;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;9&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x6E2C;&#x5B9A; - &#xFF08;2  - &#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;-2  -  cyanovinyl&#xFF09;&#x3092;julolidine&#xFF08;CCVJ&#xFF09;&#x3001;9  - &#xFF08;2,2  - &#x30B8;&#x30B7;&#x30A2;&#x30CE;&#x30D3;&#x30CB;&#x30EB;&#xFF09;julolidine&#xFF08;DCVJ&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E1;&#x30BD;&#x7F6E;&#x63DB;&#x30DB;&#x30A6;&#x7D20;dipyrromethene&#xFF08;BODIPY -C&#xFF08;12&#xFF09;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x6EB6;&#x5A92;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x3068;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x5A92;&#x4F53;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3068;&#x63D0;&#x793A;&#x30C6;&#x30A3;&#x30FC;&#x30F3;&#x30D6;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x30DB;&#x30D5;&#x30DE;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A9;&#x30A2;&#x306E;&#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5F0F;&#x3067;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x504F;&#x5149;&#x89E3;&#x6D88;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x5FAE;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x898B;&#x639B;&#x3051;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DA;&#x30E9;&#x30F3;&#x5F0F;&#x3067;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#xB7;&#x30DB;&#x30D5;&#x30DE;&#x30F3;&#x5F0F;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x7406;&#x8AD6;&#x7684;&#x67A0;&#x7D44;&#x307F;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x70B9;&#x3067;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x4F5C;&#x696D;&#x4F53;&#x5236;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x504F;&#x5149;&#x5206;&#x89E3;&#x86CD;&#x5149;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;CCVJ&#x3068;DCVJ&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x306F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x7BC4;&#x56F2;0.6 &#x26;lt;&#x3B7;&#x26;lt;600 CP&#x306E;BODIPY-C&#xFF08;12&#xFF09;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x4F4E;&#xFF08;&#x26;lt;3 cP&#xFF09;&#x306E;&#x7C98;&#x5EA6;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5024;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x53B3;&#x683C;&#x306A;&#x67D3;&#x6599;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x3001;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306A;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x5408;&#x8A08;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7C98;&#x5EA6;&#x306E;&#x89B3;&#x70B9;&#x304B;&#x3089;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3002;

&#x5206;&#x5B50;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x7570;&#x65B9;&#x6027;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC591;&#xADF9; &#xD654; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790; &#xD130; 9-(2-carboxy-2-cyanovinyl) julolidine (CCVJ), 9-&#xD604;&#xC7AC; (2, 2-dicyanovinyl) julolidine (DCVJ)&#xC640; meso &#xB300;&#xCCB4; &#xBD95; &#xC18C; dipyrromethene (BODIPY-C(12)). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; photophysical &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xC8FC;&#xBCC0;&#xC758; &#xC6A9; &#xB9E4;&#xC758; &#xC810;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728;&#xACFC; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC911;&#xAC04; &#xC810;&#xB3C4; &#xAD00;&#xACC4; &#xBA3C;&#xC800; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; F&ouml;rster&#xC640; &#xD638;&#xD504;&#xB9CC; &#xC5EC; &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xB2E4;&#xB294; fluorophore &#xC8FC;&#xC704; &#xD658;&#xACBD;&#xC758; microviscosity&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xC810;&#xB3C4; &#xC810;&#xB3C4; &#xC885;&#xC18D; &#xD615;&#xAD11; depolarization &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBBF8;&#xC138;&#xD55C; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC;&#xB85C; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xD130;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; Perrin &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD; F&ouml;rster &#xD638;&#xD504;&#xB9CC; &#xBC29;&#xC815;&#xC2DD;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB860;&#xC801; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704; &#xBC0F; &#xC810;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBC29;&#xC131; &#xD65C;&#xC6A9; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC791;&#xC5C5; &#xC815;&#xAD8C; &#xBE44;&#xAD50;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC591;&#xADF9; &#xD654; &#xD574;&#xACB0; &#xD615;&#xAD11; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xBC0F; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBC29;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC810;&#xC131;&#xC758; &#xCE21;&#xC815; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC81C;&#xC2DC;. CCVJ&#xC640; DCVJ&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBC29;&#xC131;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xB294; &#xC810;&#xB3C4; &#xBC94;&#xC704; 0.6&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; BODIPY-C(12)&#xC758; &#xADF8;&#xAC83; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AE;&#xC740; &lt; &eta; &lt; 600 cP. &#xB610;&#xD55C;, &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC758; &#xC774;&#xBC29;&#xC131; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB0AE;&#xC740; microviscosity &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; (&lt; 3 cP) &#xC810;&#xB3C4; &#xC815;&#xAD8C; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xD130; microviscosity, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xCD1D; &#xC810;&#xB3C4; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704; &#xC791;&#xC5C5;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB85C; &#xACBD;&#xC9C1; &#xB41C; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC774;&#xBC29;&#xC131;&#xC5D0; &#xB354; &#xB3D9;&#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xD130;&#xC758; &#xC774;&#xBC29;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se presenta la polarizaci&#xF3;n resuelto medidas de fluorescencia de rotores moleculares fluorescentes 9 - (2-carboxi-2-cianovinil) julolidina (CCVJ), 9 - (2,2-dicyanovinyl) julolidina (DCVJ), y un meso-boro sustituido dipyrromethene (BODIPY -C (12)). Las propiedades fotof&#xED;sicas de estas mol&#xE9;culas son altamente dependientes de la viscosidad del disolvente circundante. La relaci&#xF3;n entre sus rendimientos cu&#xE1;nticos y la viscosidad del medio circundante est&#xE1; dada por una ecuaci&#xF3;n descrita por primera vez y presentada por F&#xF6;rster y Hoffmann y se puede utilizar para determinar el microviscosidad del medio ambiente en torno a un fluor&#xF3;foro. Aqu&#xED; se eval&#xFA;a la aplicabilidad de los rotores moleculares como sondas de viscosidad aparente a una escala microsc&#xF3;pica en base a su viscosidad fluorescencia despolarizaci&#xF3;n dependiente. Se desarrolla un marco te&#xF3;rico, combinando la ecuaci&#xF3;n F&#xF6;rster-Hoffmann con la ecuaci&#xF3;n Perrin y comparar los rangos din&#xE1;micos y utilizables reg&#xED;menes de trabajo para estos colorantes en t&#xE9;rminos de utilizaci&#xF3;n de anisotrop&#xED;a de fluorescencia como una medida de la viscosidad. Se presenta la polarizaci&#xF3;n resolver espectros de fluorescencia y en estado constante de datos de im&#xE1;genes de fluorescencia de anisotrop&#xED;a para la medici&#xF3;n de la viscosidad intracelular. Se encuentra que el rango din&#xE1;mico de la anisotrop&#xED;a de fluorescencia para CCVJ y DCVJ es significativamente menor que la de BODIPY-C (12) en el rango de viscosidad 0,6 &#x26;lt;&#x3B7; &#x26;lt;600 cP. Por otra parte, utilizando las mediciones de estado estable de anisotrop&#xED;a para investigar microviscosidad en el r&#xE9;gimen de baja viscosidad (&#x26;lt;3 CP), los rotores moleculares pueden ofrecer un mejor rango din&#xE1;mico de la anisotrop&#xED;a en comparaci&#xF3;n con un tinte r&#xED;gida como una sonda de microviscosidad, y un total m&#xE1;s alto de trabajo din&#xE1;mico rango en t&#xE9;rminos de viscosidad.

James A. Levitt

Department of Physics

King's College London

Fluorescence Lifetime Imaging of Molecular Rotors in Living Cells