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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

New York University Langone School of Medicine

Marty and Helen Kimmel Center for Biology and Medicine and Skirball Institute for Biomolecular Medicine

Il virus Ebola proteine VP35 (EBOV) antagonizza la risposta iniziale di interferone (IFN-alfa/beta) antivirale alfa/beta. Abbiamo precedentemente dimostrato che VP35 inibisce l&#39;attivazione indotta dal virus del promotore IFN-beta bloccando la fosforilazione del fattore IFN-regolatore 3 (IRF-3), un fattore di trascrizione che &egrave; cruciale per l&#39;induzione dell&#39;espressione di IFN-alfa/beta. Inoltre, attivazione di promotore blocchi IFN-beta VP35 indotta da uno qualsiasi dei diversi componenti di retinoic acid inducible gene I (RIG-I) / gene associato al differenziazione melanoma 5 (MDA-5) - attivati percorsi di segnalazione tra cui RIG - I, stimolatore di promotore di IFN-beta 1 (IPS-1), chinasi serbatoio-associazione 1 (TBK-1) ed epsilon di IkappaB kinase (IKKepsilon). Questi risultati ha suggerito che VP35 pu&ograve; indirizzare la chinasi IRF TBK-1 e IKKepsilon. Coimmunoprecipitation esperimenti ora dimostrano interazioni fisiche di VP35 con IKKepsilon e TBK-1, e l&#39;uso di un costrutto di eliminazione IKKepsilon ulteriormente dimostra che il dominio amino-terminale chinasi di IKKepsilon &egrave; sufficiente per le interazioni con IRF-3 o VP35. In vitro, IKKepsilon o TBK-1 tirosine IRF-3, ma anche VP35. Inoltre, VP35 sovraespressione altera interazioni IKKepsilon-IRF-3, 7-IKKepsilon-IRF e IPS-IKKepsilon-1. Infine, lisati di cellule con sovraesprimono relativa IKKepsilon contengono l&#39;attivit&agrave; della chinasi che pu&ograve; fosforilare IRF-3 in vitro. Quando VP35 &egrave; espresso nelle cellule che esprimono IKKepsilon, questa attivit&agrave; della chinasi &egrave; soppressa. Questi dati suggeriscono che VP35 esercita la sua funzione di IFN-antagonista, almeno in parte, bloccando le necessarie interazioni tra la chinasi IKKepsilon e TBK-1 e i loro partner normale interazione, compresi i loro substrati, IRF-3 e IRF-7.

Proteine di virus Ebola VP35 altera la funzione dell&#39;interferone normativo fattore attivando chinasi IKKepsilon e TBK-1.

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;EBOV&#xFF09; VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x62EE;&#x6297;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269; &alpha;/&beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; (&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7248;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha;) &#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4EE5;&#x524D;&#x8868;&#x660E; VP35 &#x6291;&#x5236;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x8C03;&#x8282;&#x56E0;&#x5B50; 3 (IRF-3&#xFF09;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha;/&beta; &#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;VP35 &#x5757;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x89C6;&#x9EC4;&#x9178;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EFB;&#x4F55;&#x6211; (&#x94BB;&#x673A;-&#x6211;) / &#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624;&#x5206;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0; (MDA-5)-&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x5305;&#x62EC;&#x94BB;&#x673A;-5 &#x4E00;&#x3001; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &beta; 1 (IPS-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x5766;&#x514B;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6FC0;&#x9176; 1 (TBK-1&#xFF09;&#xFF0C;&#x548C; IkappaB &#x6FC0;&#x9176; epsilon &#xFF08;IKKepsilon&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; VP35 &#x53EF;&#x80FD;&#x76EE;&#x6807;&#x7684; IRF &#x6FC0;&#x9176; TBK-1 &#x548C; IKKepsilon&#x3002;Coimmunoprecipitation &#x5B9E;&#x9A8C;&#x73B0;&#x5728;&#x8BC1;&#x660E; VP35 &#x4E0E; IKKepsilon &#x548C; TBK-1 &#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528; IKKepsilon &#x5220;&#x9664;&#x6784;&#x9020;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6F14;&#x793A; IKKepsilon &#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x6FC0;&#x9176;&#x57DF;&#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92; IRF 3 &#x6216; VP35&#x3002;&#x5728;&#x8BD5;&#x7BA1;&#x91CC;&#xFF0C;IKKepsilon &#x6216; TBK 1 phosphorylates &#x516C;&#x8DEF; 3 &#x4E0D;&#x4EC5; VP35&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;VP35 &#x8868;&#x8FBE;&#x635F;&#x5BB3; IKKepsilon-&#x516C;&#x8DEF;-3&#x3001; IKKepsilon-&#x516C;&#x8DEF;-7 &#x548C; IKKepsilon-IPS-1 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x8D85;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE; IKKepsilon &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88C2;&#x89E3;&#x5305;&#x542B;&#x53EF;&#x4EE5; phosphorylate IRF-3 &#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;VP35 IKKepsilon &#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#xFF0C;&#x5F53;&#x6B64;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5373;&#x88AB;&#x9690;&#x542B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; VP35 &#x65BD;&#x52A0;&#x5B83;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5C11;&#x5728;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x963B;&#x6B62;&#x6FC0;&#x9176; IKKepsilon &#x548C; TBK-1 &#x548C;&#x5176;&#x6B63;&#x5E38;&#x4E92;&#x52A8;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5176;&#x57FA;&#x677F;&#xFF0C;IRF 3 &#x548C; IRF 7 &#x4E4B;&#x95F4;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D; VP35 &#x635F;&#x5BB3;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x8C03;&#x63A7;&#x56E0;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6FC0;&#x9176; IKKepsilon &#x548C; TBK-1 &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

The Ebola virus (EBOV) VP35 protein antagonizes the early antiviral alpha/beta interferon (IFN-alpha/beta) response. We previously demonstrated that VP35 inhibits the virus-induced activation of the IFN-beta promoter by blocking the phosphorylation of IFN-regulatory factor 3 (IRF-3), a transcription factor that is crucial for the induction of IFN-alpha/beta expression. Furthermore, VP35 blocks IFN-beta promoter activation induced by any of several components of the retinoic acid-inducible gene I (RIG-I)/melanoma differentiation-associated gene 5 (MDA-5)-activated signaling pathways including RIG-I, IFN-beta promoter stimulator 1 (IPS-1), TANK-binding kinase 1 (TBK-1), and IkappaB kinase epsilon (IKKepsilon). These results suggested that VP35 may target the IRF kinases TBK-1 and IKKepsilon. Coimmunoprecipitation experiments now demonstrate physical interactions of VP35 with IKKepsilon and TBK-1, and the use of an IKKepsilon deletion construct further demonstrates that the amino-terminal kinase domain of IKKepsilon is sufficient for interactions with either IRF-3 or VP35. In vitro, either IKKepsilon or TBK-1 phosphorylates not only IRF-3 but also VP35. Moreover, VP35 overexpression impairs IKKepsilon-IRF-3, IKKepsilon-IRF-7, and IKKepsilon-IPS-1 interactions. Finally, lysates from cells overexpressing IKKepsilon contain kinase activity that can phosphorylate IRF-3 in vitro. When VP35 is expressed in the IKKepsilon-expressing cells, this kinase activity is suppressed. These data suggest that VP35 exerts its IFN-antagonist function, at least in part, by blocking necessary interactions between the kinases IKKepsilon and TBK-1 and their normal interaction partners, including their substrates, IRF-3 and IRF-7.

Ebola virus protein VP35 impairs the function of interferon regulatory factor-activating kinases IKKepsilon and TBK-1.

Le virus Ebola (EBOV) VP35 prot&eacute;ines antagonise la r&eacute;ponse de l&#39;interf&eacute;ron (IFN-alpha/b&ecirc;ta) alpha/b&ecirc;ta antiviral pr&eacute;coce. Nous avons d&eacute;montr&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment que le VP35 inhibe l&#39;activation induite par le virus du promoteur IFN-b&ecirc;ta en bloquant la phosphorylation de l&#39;IFN-r&eacute;glementation facteur 3 (IRF-3), un facteur de transcription qui est cruciale pour l&#39;induction de l&#39;expression de l&#39;IFN-alpha/b&ecirc;ta. En outre, VP35 activation de blocs IFN-b&ecirc;ta promoteur induit par un de plusieurs composants du g&egrave;ne inductible par l&#39;acide r&eacute;tino&iuml;que je (RIG-je) / g&egrave;ne associ&eacute;e &agrave; la diff&eacute;renciation de m&eacute;lanome 5 (MDA-5) - activ&eacute;s voies de signalisation dont RIG - I, stimulateur de promoteur d&#39;IFN-b&ecirc;ta 1 (IPS-1), kinase de liaison r&eacute;servoir 1 (TBK-1) et epsilon de kinase de IkappaB (IKKepsilon). Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les VP35 peuvent cibler les kinases IRF TBK-1 et IKKepsilon. Co-immunopr&eacute;cipitation exp&eacute;riences montrent maintenant des interactions physiques de VP35 avec IKKepsilon et TBK-1, et l&#39;utilisation d&#39;une construction de suppression de IKKepsilon plus loin montre que le domaine de la kinase amino-terminale de IKKepsilon est suffisant pour les interactions avec IRF-3 ou VP35. In vitro, soit IKKepsilon, soit TBK-1 phosphoryle non seulement IRF-3, mais aussi VP35. En outre, VP35 surexpression alt&egrave;re les interactions IKKepsilon-IRF-3, 7-FIR-IKKepsilon et IKKepsilon-IPS-1. Enfin, lysats de cellules surexprimant IKKepsilon contiennent l&#39;activit&eacute; kinase qui peut phosphoryler l&#39;IRF-3 in vitro. Quand VP35 est exprim&eacute;e dans les cellules exprimant le IKKepsilon, cette activit&eacute; kinase est supprim&eacute;e. Ces donn&eacute;es sugg&egrave;rent que la VP35 exerce sa fonction IFN-antagoniste, au moins en partie, en bloquant les interactions n&eacute;cessaires entre les kinases IKKepsilon et TBK-1 et leurs partenaires de l&#39;interaction normale, y compris leurs substrats, IRF-3 et IRF-7.

Prot&eacute;ine du virus Ebola VP35 d&eacute;t&eacute;riore le fonctionnement de l&#39;interf&eacute;ron r&eacute;glementaire-activating factor kinases IKKepsilon et TBK-1.

Das Ebola-Virus (EBOV) VP35 Protein antagonizes die fr&uuml;hen antiviralen Alpha/Beta-Interferon (IFN-Alpha/Beta)-Antwort. Wir zuvor nachweislich VP35 verhindert die Virus-induzierte Aktivierung des Projekttr&auml;gers IFN-Beta durch die Blockierung der Phosphorylierung von IFN-ordnungspolitischen Faktor 3 (IRF-3), ein Transkriptionsfaktor, der f&uuml;r die Induktion von IFN-Alpha/Beta-Ausdruck von entscheidender Bedeutung ist. Dar&uuml;ber hinaus induziert VP35 Bl&ouml;cke IFN-Beta Projekttr&auml;ger Aktivierung durch mehrere Komponenten des Gens Retinoic S&auml;ure-inducible ich (RIG-ich) / Melanom Differenzierung-assoziierte Gen 5 (MDA-5) - aktivierte Signalwege einschlie&szlig;lich RIG - ich, IFN-Beta Projekttr&auml;ger Stimulator 1 (IPS-1), TANK-Bindung Kinase 1 (TBK-1), und IkappaB Kinase Epsilon (IKKepsilon). Diese Ergebnisse erweckten die VP35 die IRF Kinasen TBK-1 und IKKepsilon Ziel kann. Coimmunoprecipitation Experimente zeigen jetzt physikalische Wechselwirkungen von VP35 mit IKKepsilon und TBK-1, und der Einsatz von einem IKKepsilon-L&ouml;schung-Konstrukt weiter zeigt, dass die amino-Terminal Kinase-Dom&auml;ne des IKKepsilon f&uuml;r Interaktionen mit IRF-3 oder VP35 ausreicht. In-vitro-phosphorylates entweder IKKepsilon oder TBK-1 nicht nur IRF-3, sondern auch VP35. Dar&uuml;ber hinaus beeintr&auml;chtigt VP35 &Uuml;berexpression IKKepsilon-IRF-3, IKKepsilon-IRF-7 und IKKepsilon-IPS-1 Interaktionen. Schlie&szlig;lich enthalten Lysates aus Zellen &uuml;berexprimierenden IKKepsilon Kinaseaktivit&auml;t, die in-vitro-IRF-3 phosphoryliert werden kann. Wenn VP35 in den IKKepsilon-Ausdruck Zellen ausgedr&uuml;ckt wird, wird diese Kinaseaktivit&auml;t unterdr&uuml;ckt. Diese Daten legen nahe, dass VP35 seine IFN-Antagonist-Funktion, mindestens im Teil, &uuml;bt durch Sperrung notwendige Interaktionen zwischen der Kinasen, IKKepsilon und TBK-1 und ihre normale Interaktion-Partner, einschlie&szlig;lich ihrer Substrate, IRF-3 und IRF-7.

Ebola-Virus-Protein VP35 beeintr&auml;chtigt die Funktion des Interferon ordnungspolitischen Faktor-Aktivierung Kinasen IKKepsilon und TBK-1.

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (EBOV) VP35 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;/&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &#xFF08;IFN-&alpha;/&beta;) &#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x62EE;&#x6297;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;VP35 &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x5236;&#x5FA1;&#x56E0;&#x5B50; 3 &#xFF08;IRF-3), IFN-&alpha;/&beta; &#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x5927;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x8A3C;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;VP35 &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x8A98;&#x8D77;&#x6D3B;&#x6027;&#x30EC;&#x30C1;&#x30CE;&#x30A4;&#x30F3;&#x9178;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x79C1;&#x306F; &#xFF08;&#x30EA;&#x30B0;-&#x79C1;&#x306F;&#xFF09;/&#x9ED2;&#x8272;&#x816B;&#x5206;&#x5316;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; 5 (MDA-5&#xFF09; - &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30EA;&#x30B0;&#x3092;&#x542B;&#x3080; - &#x79C1;&#x3001;IFN &#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x523A;&#x6FC0; 1 (IPS-1)&#x3001;TANK &#x7D50;&#x5408;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; 1 &#xFF08;TBK-1), &#x3068; IkappaB &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30A4;&#x30D7;&#x30B7;&#x30ED;&#x30F3; (IKKepsilon)&#x3002;IRF &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; TBK 1 &#x3068; IKKepsilon VP35 &#x304C;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Coimmunoprecipitation &#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x4ECA; IKKepsilon &#x3068; TBK 1 &#x3068; VP35 &#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3057;&#x3001;IKKepsilon &#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C; IRF 3 &#x307E;&#x305F;&#x306F; VP35 &#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;IKKepsilon &#x524A;&#x9664;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;In vitro IKKepsilon &#x307E;&#x305F;&#x306F; TBK 1 IRF 3 &#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F; VP35 &#x3092;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x30EA;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;VP35 &#x904E;&#x5270;&#x767A;&#x73FE; IKKepsilon IRF 3&#x3001;IKKepsilon-IRF-7 IKKepsilon IPS 1 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x904E;&#x5270; IKKepsilon &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E; lysates IRF 3 in vitro &#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;VP35 IKKepsilon &#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x3067;&#x8868;&#x3059;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;VP35 &#x305D;&#x306E; IFN &#x62EE;&#x6297;&#x95A2;&#x6570;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; IKKepsilon &#x3068; TBK 1 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3001;IRF 3 &#x3068; irf-7 &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x76F8;&#x624B;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x51FA;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; VP35 &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x898F;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; IKKepsilon &#x3068; TBK-1 &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBOV) VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCD08;&#xAE30; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN-&#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0;) &#xC751;&#xB2F5; &#xBC18;&#xAC10;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; VP35 &#xC778;&#xC740; &#xC0B0;&#xD654;&#xC758; IFN &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC778; 3 (IRF-3), IFN-&#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC2DD;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xB97C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC720;&#xB3C4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD55C;&#xB2E4;&#xC744; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, VP35 &#xBE14;&#xB85D; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4; retinoic &#xC0B0;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB098; (&#xC720; &#xC815;-&#xB098;) / &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; &#xBD84;&#xD654; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790; 5 (MDA-5)-&#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC7A5;&#xBE44;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC;-&#xB098; IFN-&#xBCA0;&#xD0C0; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC790;&#xADF9; &#xAE30; 1 (IPS-1) &#xD0F1;&#xD06C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD0A4; 1 (TBK-1)&#xC640; IkappaB kinase &#xC5E1;&#xC2E4;&#xB860; (IKKepsilon). &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; IRF kinases TBK-1 &#xBC0F; IKKepsilon VP35 &#xB300;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. Coimmunoprecipitation &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC9C0;&#xAE08; TBK-1, Ikkepsilon&#xC640; vp35&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xACE0; &#xCD94;&#xAC00; IKKepsilon &#xC0AD;&#xC81C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; Ikkepsilon&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xD0A4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; IRF 3 &#xB610;&#xB294; vp35&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCCB4; &#xC678;, IKKepsilon &#xB610;&#xB294; TBK 1 IRF 3 &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; VP35 phosphorylates. &#xB610;&#xD55C;, VP35 overexpression IKKepsilon-IRF-3, IKKepsilon-IRF-7, IKKepsilon-IPS-1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC140; IKKepsilon overexpressing&#xC5D0;&#xC11C; lysates IRF 3 &#xCCB4; &#xC678; phosphorylate &#xC218; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;. VP35 IKKepsilon &#xD45C;&#xD604; &#xC140; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C;, &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; VP35 &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; IFN-&#xC801;&#xC5D0; &#xAC8C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; IKKepsilon &#xBC0F; TBK 1 kinases&#xC640; IRF 3&#xC640; IRF-7 &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xAC04;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; VP35 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC18C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; kinases IKKepsilon &#xBC0F; TBK 1&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC190;&#xC0C1;.

El virus del &Eacute;bola (EBOV) VP35 prote&iacute;na antagoniza la respuesta de interfer&oacute;n (IFN-alfa/beta) antiviral Alfa/beta temprana. Hemos demostrado previamente que VP35 inhibe la activaci&oacute;n inducida por virus del promotor IFN-beta mediante el bloqueo de la fosforilaci&oacute;n de IFN-regulador factor 3 (IRF-3), un factor de transcripci&oacute;n que es crucial para la inducci&oacute;n de la expresi&oacute;n de IFN-alfa/beta. Adem&aacute;s, VP35 bloques IFN-beta promotor activaci&oacute;n inducida por cualquiera de los varios componentes del gen inducible por &aacute;cido retinoico I (RIG-me) / gen de diferenciaci&oacute;n asociada de melanoma 5 (MDA-5) - activadas v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n como RIG - I, estimulador de promotor de IFN-beta 1 (IPS-1), cinasa de tanque vinculante 1 (TBK-1) y epsilon de IkappaB kinasa (IKKepsilon). Estos resultados sugirieron que VP35 puedan dirigir el IRF quinasas TBK-1 y IKKepsilon. Coimmunoprecipitation experimentos demuestran interacciones f&iacute;sicas de VP35 con IKKepsilon y TBK-1, y el uso de una construcci&oacute;n de eliminaci&oacute;n de IKKepsilon m&aacute;s demuestra que el dominio quinasa amino-terminal de IKKepsilon es suficiente para las interacciones con IRF-3 o VP35. In vitro, ya sea IKKepsilon o TBK-1 fosforila no s&oacute;lo IRF-3 sino tambi&eacute;n VP35. Por otra parte, VP35 sobreexpresi&oacute;n deteriora las interacciones IKKepsilon-IRF-3, 7-IRF-IKKepsilon y IKKepsilon-IPS-1. Finalmente, lisados de c&eacute;lulas overexpressing IKKepsilon contienen quinasa que puede fosforilan IRF-3 in vitro. Cuando VP35 se expresa en las c&eacute;lulas IKKepsilon-expresi&oacute;n, se suprime esta quinasa. Estos datos sugieren que VP35 ejerce su funci&oacute;n de IFN-antagonista, al menos en parte, mediante el bloqueo de las interacciones necesarias entre las quinasas IKKepsilon y TBK-1 y sus socios de interacci&oacute;n normal, incluyendo sus sustratos, IRF-3 y 7-IRF.

Prote&iacute;na del virus Ebola VP35 deteriora la funci&oacute;n de interfer&oacute;n regulador factor-activar quinasas IKKepsilon y TBK-1.

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;EBOV&#xFF09; &#x86CB;&#x767D; VP35 &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x53CC;&#x94FE; RNA (dsRNA) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E3B;&#x673A;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &#xFF08;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#xFF09;-&#x4E5F;&#x53EF;&#x7528;&#x4F5C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;/&#x8D1D;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x786E;&#x5B9A;&#x5173;&#x952E;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6240;&#x9700;&#x7684; VP35 dsRNA &#x7ED3;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x4E2D;&#x592E;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E9B; VP35 EBOV &#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3001; &#x4E24;&#x4E2A;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x610F;&#x4E49;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86; K319A/R322A&#xFF0C;&#x5E9F;&#x9664; VP35 dsRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x4E25;&#x91CD;&#x635F;&#x5BB3;&#x4E86;&#x5176;&#x6291;&#x5236;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha;/&beta; &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x89E3;&#x51B3;&#x65B9;&#x6848;&#x6838;&#x78C1;&#x5171;&#x632F; (NMR) &#x5149;&#x8C31;&#x548C; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x63ED;&#x793A;&#x5728; K319A/R322A VP35 &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x7ED3;&#x6784;&#x6270;&#x52A8;&#x53CA;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6536;&#x8D39;&#x635F;&#x5931;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6539;&#x53D8;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4; EBOVs &#x7F16;&#x7801; VP35 &#x7A81;&#x53D8;&#x5C55;&#x793A;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x75C5;&#x6BD2; VP35&#x3001; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x7F3A;&#x9677; Vero &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x589E;&#x957F;&#x8870;&#x51CF;&#x4F46;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E25;&#x91CD;&#x635F;&#x5BB3;&#x3002;&#x8C5A;&#x9F20;&#xFF0C;VP35 &#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53D1;&#x73B0;&#x6BD2;&#x529B;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E27;&#x5931;&#x3002;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;VP35 &#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6709;&#x6548;&#x514D;&#x75AB;&#x52A8;&#x7269;&#x5BF9;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; EBOV &#x6311;&#x6218;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F53;&#x5185;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x91CD;&#x7EC4; EBOV &#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x52A0;&#x4E0A;&#x6240;&#x9644;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x76F4;&#x63A5;&#x5173;&#x8054; VP35 dsRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x804C;&#x80FD;&#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x9488;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E; EBOV &#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;

&#x5E9F;&#x9664;&#x4E0E;&#x53CC;&#x94FE; RNA VP35 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5448;&#x73B0;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8C5A;&#x9F20;&#x65E0;&#x6BD2;&#x3002;

Ebola virus (EBOV) protein VP35 is a double-stranded RNA (dsRNA) binding inhibitor of host interferon (IFN)-alpha/beta responses that also functions as a viral polymerase cofactor. Recent structural studies identified key features, including a central basic patch, required for VP35 dsRNA binding activity. To address the functional significance of these VP35 structural features for EBOV replication and pathogenesis, two point mutations, K319A/R322A, that abrogate VP35 dsRNA binding activity and severely impair its suppression of IFN-alpha/beta production were identified. Solution nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy and X-ray crystallography reveal minimal structural perturbations in the K319A/R322A VP35 double mutant and suggest that loss of basic charge leads to altered function. Recombinant EBOVs encoding the mutant VP35 exhibit, relative to wild-type VP35 viruses, minimal growth attenuation in IFN-defective Vero cells but severe impairment in IFN-competent cells. In guinea pigs, the VP35 mutant virus revealed a complete loss of virulence. Strikingly, the VP35 mutant virus effectively immunized animals against subsequent wild-type EBOV challenge. These in vivo studies, using recombinant EBOV viruses, combined with the accompanying biochemical and structural analyses directly correlate VP35 dsRNA binding and IFN inhibition functions with viral pathogenesis. Moreover, these studies provide a framework for the development of antivirals targeting this critical EBOV virulence factor.

Mutations abrogating VP35 interaction with double-stranded RNA render Ebola virus avirulent in guinea pigs.

Prot&eacute;ine du virus Ebola virus (EBOV) VP35 est un inhibiteur de liaison RNA (dsRNA) double brin de l&#39;h&ocirc;te interf&eacute;ron (IFN)-r&eacute;ponses alpha/b&ecirc;ta qui fonctionne aussi comme un cofacteur de la polym&eacute;rase virale. R&eacute;centes &eacute;tudes structurales identifi&eacute;es caract&eacute;ristiques principales, y compris un patch de base central, n&eacute;cessaire &agrave; l&#39;activit&eacute; de liaison de dsRNA VP35. Pour r&eacute;pondre &agrave; la signification fonctionnelle de ces caract&eacute;ristiques structurelles de la VP35 pour la r&eacute;plication de EBOV et de pathog&eacute;n&egrave;se, deux mutations ponctuelles, K319A/R322A, qui abroge l&#39;activit&eacute; de liaison VP35 dsRNA et nuire gravement &agrave; sa suppression de la production d&#39;IFN-alpha/b&ecirc;ta ont &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Spectroscopie de r&eacute;sonance magn&eacute;tique nucl&eacute;aire (RMN) de solution et de la cristallographie aux rayons x r&eacute;v&egrave;lent des perturbations structurelles minimes chez le mutant double VP35 K319A/R322A et sugg&egrave;rent que la perte de charge de base conduit &agrave; fonction alt&eacute;r&eacute;e. EBOVs recombinants codant le mutant VP35 pr&eacute;sentent, par rapport au type sauvage VP35 virus, att&eacute;nuation minimale de croissance dans les cellules Vero IFN-d&eacute;fectueux mais une d&eacute;ficience s&eacute;v&egrave;re en cellules capables d&#39;IFN. Chez le cobaye, le virus mutant de VP35 a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une perte compl&egrave;te de la virulence. &Eacute;tonnamment, le virus mutant VP35 vaccin&eacute;s efficacement animaux contre ult&eacute;rieur d&eacute;fi EBOV de type sauvage. Ces &eacute;tudes in vivo, en utilisant des virus recombinants EBOV, combin&eacute;e avec l&#39;accompagnement biochimiques et les analyses structurelles sont directement corr&egrave;lent VP35 dsRNA liaison et fonctions d&#39;inhibition IFN avec pathog&eacute;n&egrave;se virale. En outre, ces &eacute;tudes fournissent un cadre pour le d&eacute;veloppement d&#39;antiviraux ciblant ce facteur de virulence critique EBOV.

Mutations abrogeant VP35 interaction avec l&#39;ARN bicat&eacute;naire rendent virus Ebola non virulente chez les cobayes.

Ebola-Virus (EBOV)-Protein VP35 ist ein doppelstr&auml;ngige RNA (sequenzspezifischen) Bindung Inhibitor der Host-Interferon (IFN)-Alpha/Beta-Antworten, die auch als Kofaktor virale Polymerase fungiert. Aktuelle strukturelle Studien identifiziert wichtige Features, einschlie&szlig;lich eines zentralen grundlegenden Patches, f&uuml;r VP35 sequenzspezifischen Bindung Aktivit&auml;t erforderlich. Um die funktionelle Bedeutung dieser VP35 strukturelle Funktionen f&uuml;r EBOV-Replikation und Pathogenese, zwei Punktmutationen, beheben wurden K319A/R322A, das hebt VP35 sequenzspezifischen Bindung Aktivit&auml;t und stark beeintr&auml;chtigen seine Unterdr&uuml;ckung der IFN-Alpha/Beta-Produktion identifiziert. L&ouml;sung Kernspinresonanz (NMR) Spektroskopie und Kristallstrukturanalyse minimale strukturelle St&ouml;rungen in den K319A/R322A-VP35-Doppel-Mutanten zu offenbaren und schlagen vor, da&szlig; Verlust der Grundgeb&uuml;hr zu ver&auml;nderten Funktion f&uuml;hrt. Rekombinante EBOVs Codierung der Mutant VP35 weisen im Vergleich zu Wildtyp VP35 Viren, geringes Wachstum D&auml;mpfung in IFN-Genen Vero-Zellen aber schwere Beeintr&auml;chtigung der IFN-kompetente Zellen. Meerschweinchen offenbart das VP35 mutierte Virus einen vollst&auml;ndigen Verlust der Virulenz. Auff&auml;llig ist, geimpft VP35 mutierte Virus effektiv Tiere gegen nachfolgende Wildtyp EBOV Herausforderung. Diese in-vivo-Studien, mit rekombinante EBOV Viren, kombiniert mit den zugeh&ouml;rigen biochemischen und Strukturanalysen korrelieren direkt VP35 sequenzspezifischen Bindung und IFN-Hemmung-Funktionen mit virale Pathogenese. Diese Studien bieten dar&uuml;ber hinaus einen Rahmen f&uuml;r die Entwicklung von Virostatika Zielen dieser kritischen EBOV Virulenzfaktoren.

Mutationen, die zur Aufhebung der VP35 Interaktion mit doppelstr&auml;ngige RNA Rendern Ebolavirus avirulent bei Meerschweinchen.

Ebola virus (EBOV) proteine VP35 &egrave; un inibitore di double-stranded RNA (dsRNA) associazione di interferone (IFN) di host-risposte alfa/beta che funziona anche come cofattore della polimerasi virale. Recenti studi strutturali identificate caratteristiche chiave, tra cui una patch base centrale, necessaria per l&#39;attivit&agrave; di associazione dsRNA VP35. Per affrontare il significato funzionale di queste caratteristiche strutturali VP35 EBOV replica e patogenesi, due mutazioni puntiformi, K319A/R322A, che abolisce VP35 dsRNA attivit&agrave; vincolante e compromettere gravemente la sua soppressione della produzione di IFN-alfa/beta sono stati identificati. Spettroscopia di risonanza magnetica nucleare (NMR) soluzione e cristallografia a raggi x rivelano minime perturbazioni strutturali in K319A/R322A VP35 doppio mutante e suggeriscono che la perdita del canone di base conduce alla funzione alterata. EBOVs ricombinante codifica il mutante VP35 presentano, rispetto al virus del selvaggio-tipo VP35, attenuazione minima crescita in cellule Vero IFN-difettoso ma grave compromissione nelle cellule IFN-competente. Nelle cavie, il virus mutante VP35 ha rivelato una completa perdita di virulenza. Sorprendentemente, il virus mutante VP35 immunizzati efficacemente gli animali contro la successiva sfida EBOV wild-type. Questi studi in vivo, utilizzando virus EBOV ricombinante, combinata con la biochimica di accompagnamento e analisi strutturali correlano direttamente vincolante dsRNA VP35 e IFN inibizione funzioni con patogenesi virale. Inoltre, questi studi forniscono un quadro per lo sviluppo di farmaci antivirali targeting per questo fattore di virulenza EBOV critico.

Mutazioni abrogazione VP35 interazione con RNA double-stranded rendono Ebola virus avirulente in cavie.

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (EBOV) &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; VP35 &#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA (dsRNA) &#x7D50;&#x5408;&#x963B;&#x5BB3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; (IFN)-&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3082;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;/&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76; VP35 dsRNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x30AD;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; VP35 &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6A5F;&#x80FD; EBOV &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x75C5;&#x56E0;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x610F;&#x7FA9;&#x3092;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;K319A/R322A&#x3001;VP35 dsRNA &#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x53B3;&#x3057;&#x304F; IFN-&alpha;/&beta; &#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x640D;&#x306A;&#x3046;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x6838;&#x78C1;&#x6C17;&#x5171;&#x9CF4; &#xFF08;NMR&#xFF09; &#x5206;&#x5149;&#x3068; x &#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x69CB;&#x9020;&#x6442;&#x52D5; K319A/R322A VP35 &#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x6599;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x95A2;&#x6570;&#x306B;&#x5C0E;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; EBOVs &#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53; VP35 &#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; VP35 &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;IFN &#x6B20;&#x9665; Vero &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E; IFN &#x6709;&#x80FD;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; VP35 &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3001;VP35 &#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; EBOV &#x30C1;&#x30E3;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B8;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x52D5;&#x7269;&#x514D;&#x75AB;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; EBOV &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x7814;&#x7A76;&#x3001;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790; VP35 dsRNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; IFN &#x6291;&#x5236;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x306B;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A; EBOV &#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x306B;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x85AC;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA &#x3068; VP35 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5951;&#x7D04;&#x5909;&#x7570;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x30E2;&#x30EB;&#x30E2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBOV) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; vp35&#xB294; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN)&#xC758; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA (dsRNA) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;-&#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC751;&#xB2F5;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; cofactor&#xB85C; &#xC791;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; VP35 dsRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC911;&#xC559; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. EBOV &#xBCF5;&#xC81C; &#xBC0F; pathogenesis, &#xB450; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; VP35 &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; K319A/R322A VP35 dsRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xD30C;&#xAE30; &#xD558; &#xACE0; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xC190;&#xC0C1; IFN-&#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC758; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC194;&#xB8E8;&#xC158; &#xD575; &#xC790;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; (NMR) &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBB3C;&#xACB0; K319A/R322A VP35 &#xC774;&#xC911; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC694;&#xAE08; &#xC190;&#xC2E4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB048;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; VP35 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, IFN-&#xACB0;&#xD568; Vero &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; IFN &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xC7A5;&#xC560;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; VP35 &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; EBOVs &#xC804;&#xC2DC;. &#xAE30;&#xB2C8; &#xD53C;&#xADF8; VP35 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB3C5;&#xC131;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC2E4;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30; &#xB9C9;&#xD788;&#xAC8C;, VP35 &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6C4;&#xC18D; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; EBOV &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xC811;&#xC885;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; EBOV &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; in vivo &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD568;&#xAED8; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCD1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC5F0;&#xACB0; VP35 dsRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; IFN &#xC5B5;&#xC81C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; antivirals&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; EBOV &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Abrogating VP35 &#xC0C1;&#xD638; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBCC0;&#xC774; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAE30;&#xB2C8; &#xD53C;&#xADF8;&#xC5D0; avirulent &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1;.

Ebola virus (EBOV) prote&iacute;na VP35 es un inhibidor de enlace double-stranded RNA (dsRNA) del interfer&oacute;n (IFN) de host-respuestas Alfa/beta que tambi&eacute;n funciona como un cofactor de la polimerasa viral. Recientes estudios estructurales identifican caracter&iacute;sticas clave, incluyendo un parche b&aacute;sico central, necesario para la actividad VP35 dsARN. Para hacer frente a la significaci&oacute;n funcional de estas caracter&iacute;sticas estructurales VP35 para replicaci&oacute;n de EBOV y la patogenesia, dos mutaciones de punto, se identificaron K319A/R322A, que derogar VP35 dsARN actividad y perjudicar seriamente su supresi&oacute;n de la producci&oacute;n de IFN-alfa/beta. Espectroscopia de resonancia magn&eacute;tica nuclear (RMN) de soluci&oacute;n y Cristalograf&iacute;a de rayos x revelan m&iacute;nimas perturbaciones estructurales en el mutante doble K319A/R322A VP35, sugieren que la p&eacute;rdida de carga b&aacute;sica conduce a la alteraci&oacute;n de la funci&oacute;n. EBOVs recombinantes codificaci&oacute;n al mutante VP35 exposici&oacute;n, en relaci&oacute;n con el virus de la VP35 del tipo salvaje, atenuaci&oacute;n de m&iacute;nimo crecimiento en c&eacute;lulas Vero IFN-defectuoso pero debilitaci&oacute;n severa en c&eacute;lulas IFN-competentes. En conejillos de Indias, el virus mutante VP35 revel&oacute; una p&eacute;rdida completa de virulencia. Sorprendentemente, el virus mutante VP35 efectivamente hab&iacute;a inmunizado animales contra posterior challenge EBOV de tipo salvaje. Estos estudios in vivo, utilizando virus recombinantes de EBOV, combinaron con el acompa&ntilde;amiento bioqu&iacute;micos y an&aacute;lisis estructurales correlacionan directamente VP35 dsARN vinculante y funciones de inhibici&oacute;n de IFN con Patog&eacute;nesis viral. Por otra parte, estos estudios proporcionan un marco para el desarrollo de antivirales dirigidos a este factor de virulencia EBOV cr&iacute;tico.

Mutaciones abrogar VP35 interacci&oacute;n con ARN bicatenario representan el virus del &Eacute;bola avirulentas en conejillos de Indias.

Prot&eacute;ine virale &agrave; virus Ebola 35 (VP35), cod&eacute;e par le virus hautement pathog&egrave;ne du virus Ebola, facilite &eacute;vasion immunitaire h&ocirc;te par antiviral efficament signaling pathways, y compris celles initi&eacute;es par les r&eacute;cepteurs RIG-I-like. Nous pr&eacute;sentons la structure cristalline du domaine Ebola VP35 interf&eacute;ron inhibitrice (IID) li&eacute;e &agrave; la courte ARN &agrave; double brin (dsRNA), qui, avec les r&eacute;sultats in vivo, r&eacute;v&egrave;le comment les interactions VP35-dsRNA contribuent &agrave; &eacute;vasion immunitaire. Les r&eacute;sidus basiques conserv&eacute;s dans VP35 IID reconnaissent l&#39;&eacute;pine dorsale de dsRNA, tandis que les extr&eacute;mit&eacute;s ARNdb sont &laquo; fin-capped &raquo; par une poche de r&eacute;sidus hydrophobes qui imitent la reconnaissance de RIG-I-like r&eacute;cepteurs d&#39;ARNdb &eacute;mouss&eacute;-fin. R&eacute;sidus critiques pour la liaison de RNA sont &eacute;galement importants pour l&#39;inhibition in vivo de l&#39;interf&eacute;ron, mais pas pour fonction de cofacteur de la polym&eacute;rase virale de VP35. Ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que la reconnaissance simultan&eacute;e de dsRNA &eacute;pine dorsale et les extr&eacute;mit&eacute;s fournit un m&eacute;canisme par lequel Ebola VP35 antagonise h&ocirc;te dsRNA capteurs et des r&eacute;ponses immunitaires.

Base structurale pour l&#39;antagonisme de reconnaissance et de l&#39;interf&eacute;ron dsRNA par Ebola VP35.

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x86CB;&#x767D; 35 &#xFF08;VP35&#xFF09;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7531;&#x9AD8;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7684;&#x4F0A;&#x6CE2;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x90A3;&#x4E9B;&#x53D1;&#x8D77;&#x7684;&#x94BB;&#x673A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x53D7;&#x4F53;&#x62EE;&#x6297;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35 &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x57DF; (IID) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x77ED;&#x53CC;&#x94FE; RNA (dsRNA)&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4F53;&#x5185;&#x7ED3;&#x679C;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86; VP35 dsRNA &#x4E92;&#x52A8;&#x5982;&#x4F55;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;VP35 IID &#x5B88;&#x6052;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x627F;&#x8BA4; dsRNA &#x9AA8;&#x5E72;&#xFF0C;&#x800C; dsRNA &#x949D;&#x7AEF;&#x662F; &#39;&#x5C01;&#x7AEF;&#39; &#x7531;&#x6A21;&#x4EFF;&#x94BB;&#x673A;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x53D7;&#x4F53;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x949D;&#x7AEF; dsRNA &#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#x3002;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; RNA &#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x4E5F;&#x4E3A;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x4F53;&#x5185;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; VP35 &#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x8F85;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x5F88;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x540C;&#x65F6;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684; dsRNA &#x9AA8;&#x5E72;&#x548C;&#x949D;&#x7AEF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35 &#x62EE;&#x6297;&#x5BBF;&#x4E3B; dsRNA &#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

DsRNA &#x627F;&#x8BA4;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x7684;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35 &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x57FA;&#x7840;&#x3002;

Ebola viral protein 35 (VP35), encoded by the highly pathogenic Ebola virus, facilitates host immune evasion by antagonizing antiviral signaling pathways, including those initiated by RIG-I-like receptors. Here we report the crystal structure of the Ebola VP35 interferon inhibitory domain (IID) bound to short double-stranded RNA (dsRNA), which together with in vivo results reveals how VP35-dsRNA interactions contribute to immune evasion. Conserved basic residues in VP35 IID recognize the dsRNA backbone, whereas the dsRNA blunt ends are 'end-capped' by a pocket of hydrophobic residues that mimic RIG-I-like receptor recognition of blunt-end dsRNA. Residues critical for RNA binding are also important for interferon inhibition in vivo but not for viral polymerase cofactor function of VP35. These results suggest that simultaneous recognition of dsRNA backbone and blunt ends provides a mechanism by which Ebola VP35 antagonizes host dsRNA sensors and immune responses.

Structural basis for dsRNA recognition and interferon antagonism by Ebola VP35.

Ebola viral Protein 35 (VP35), durch das hoch pathogenen Ebola-Virus kodiert erleichtert Host immun ausweichen von Nguyens antivirale Signalisierung Wege, einschlie&szlig;lich derer von RIG-&auml;hnliche Rezeptoren initiiert. Hier berichten wir &uuml;ber die Kristallstruktur der Ebola VP35 Interferon hemmenden Dom&auml;ne (IID) verpflichtet, kurze doppelstr&auml;ngige RNA (sequenzspezifischen), die zusammen mit der in-vivo-Ergebnisse zeigt, wie VP35-sequenzspezifischen Interaktionen zu immun ausweichen beitragen. Konservierte grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde in VP35 IID erkennen sequenzspezifischen R&uuml;ckgrat, w&auml;hrend die sequenzspezifischen stumpfen Enden &#39;End-capped&#39; durch eine Tasche von hydrophoben R&uuml;ckst&auml;nden, die RIG-Like-Rezeptor Anerkennung der Stumpf-End sequenzspezifischen nachahmen. R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r RNA-Bindung entscheidend sind auch wichtig f&uuml;r Interferon-Hemmung in Vivo jedoch nicht f&uuml;r virale Polymerase-Cofaktor-Funktion des VP35. Diese Ergebnisse legen nahe, dass die gleichzeitige Erkennung sequenzspezifischen R&uuml;ckgrat und stumpfen Enden einen Mechanismus bietet mit dem Ebola VP35 Host sequenzspezifischen Sensoren und Immunantworten an.

Strukturelle Grundlage f&uuml;r sequenzspezifischen Anerkennung und Interferon Antagonismus von Ebola VP35.

Proteina virale Ebola 35 (VP35), codificata dal virus Ebola ad alta patogenicit&agrave;, facilita l&#39;evasione immune ospite da antagonizzando antivirale signaling pathways, compresi quelli iniziata dai recettori RIG-I-like. Qui riportiamo la struttura cristallina del dominio inibitorio di interferone Ebola VP35 (IID) associata a breve RNA double-stranded (dsRNA), che insieme ai risultati in vivo rivela come le interazioni VP35-dsRNA contribuiscono all&#39;evasione immune. Residui conservati base VP35 IID riconoscono la spina dorsale del dsRNA, considerando che l&#39;estremit&agrave; smussata dsRNA sono &#39;fine-capped&#39; da una tasca dei residui idrofobi che imitano RIG-io-come riconoscimento del recettore di dsRNA smussato-fine. Sono importanti per l&#39;inibizione dell&#39;interferone in vivo, ma non per la funzione di cofattore della polimerasi virale di VP35 anche residui critici per l&#39;associazione di RNA. Questi risultati suggeriscono che riconoscimento simultaneo di dsRNA backbone ed estremit&agrave; smussata fornisce un meccanismo mediante il quale Ebola VP35 antagonizza host dsRNA sensori e risposte immunitarie.

Base strutturale per dsRNA riconoscimento e interferone antagonismo di Ebola VP35.

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x9AD8;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; 35 (VP35)&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x30EA;&#x30B0;&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x958B;&#x59CB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x542B;&#x3080;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D1;&#x30B9;&#x62EE;&#x6297;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306F; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x5171;&#x306B;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x3059;&#x308B; VP35 dsRNA &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x77ED;&#x3044;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA (dsRNA) &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; VP35 &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (IID) &#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;DsRNA &#x920D;&#x7AEF;&#x306F; &#39;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#39; &#x30EA;&#x30B0;&#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x8A8D;&#x8B58;&#x920D;&#x7D42;&#x308A; dsRNA &#x306E;&#x6A21;&#x5023;&#x3059;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; VP35 IID &#x3067;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B; dsRNA &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;RNA &#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3082;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x963B;&#x5BB3; in vivo &#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x88DC;&#x95A2;&#x6570; VP35 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;DsRNA &#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x3068;&#x920D;&#x7AEF;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x8A8D;&#x8B58;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; dsRNA &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; VP35 &#x62EE;&#x6297;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; VP35 &#x306B;&#x3088;&#x308B; dsRNA &#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x62EE;&#x6297;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x57FA;&#x76E4;

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; 35 (VP35), &#xB192;&#xC740; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; antagonizing &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C;, &#xC7A5;&#xBE44; &#xD615; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2DC;&#xC791;&#xC744; &#xBE44;&#xB86F; &#xD558; &#xC5EC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C; &#xC6A9;&#xC774;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; VP35 dsRNA &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA (dsRNA)&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; VP35 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (IID)&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; VP35 IID dsRNA &#xBB34;&#xB518; &#xB05D; &#39; &#xB05D;-&#39;&#xB85C; &#xB4A4;&#xB36E;&#xC778; &#xBE14;&#xB7F0;&#xD2B8; &#xC5D4;&#xB4DC; Dsrna&#xC758; &#xC7A5;&#xBE44; &#xD615; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC778;&#xC2DD;&#xC744; &#xBAA8;&#xBC29; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8;&#xB294; dsRNA &#xBC31;&#xBCF8; &#xC778;&#xC2DD;. RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xB3C4; &#xBE44;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; vp35&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD6A8;&#xC18C; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; dsRNA &#xBC31;&#xBCF8; &#xBC0F; &#xBB34;&#xB518; &#xB05D;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC778;&#xC2DD; &#xC788;&#xB294; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; VP35 &#xBC18;&#xAC10; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; dsRNA &#xC13C;&#xC11C;&#xC640; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; vp35&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; dsRNA &#xC778;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC801;&#xAC1C;&#xC2EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;.

Prote&iacute;na viral Ebola 35 (VP35), codificada por el virus de &Eacute;bola altamente pat&oacute;geno, facilita evasi&oacute;n inmune del anfitri&oacute;n suscitado antiviral v&iacute;as, los iniciados por RIG-yo-como receptores incluidos de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Presentamos la estructura cristalina del dominio inhibitorio del interfer&oacute;n de Ebola VP35 (IID) obligada a corto ARN bicatenario (dsRNA), que junto con los resultados en vivo revela c&oacute;mo las interacciones VP35-dsARN contribuyan a evasi&oacute;n inmune. Residuos conservados b&aacute;sicos en VP35 IID reconocen la columna vertebral de dsRNA, mientras que los extremos romos dsARN &#39;tap&oacute;n final&#39; por una bolsa de residuos hidrof&oacute;bicos que imitan RIG-yo-como reconocimiento de receptor de dsRNA blunt-final. Residuos cr&iacute;ticos para la Uni&oacute;n de la RNA tambi&eacute;n son importantes para la inhibici&oacute;n de interfer&oacute;n en vivo pero no para la funci&oacute;n de cofactor de polimerasa viral de VP35. Estos resultados sugieren que el reconocimiento simult&aacute;neo de la columna vertebral de dsARN y extremos embotados proporciona un mecanismo por el cual Ebola VP35 antagoniza anfitri&oacute;n dsARN sensores y las respuestas inmunitarias.

Base estructural para dsARN reconocimiento e interfer&oacute;n antagonismo por Ebola VP35.

Ebolaviruses &#x662F;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x975E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x81F4;&#x547D;&#x51FA;&#x8840;&#x70ED;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x4E3A;&#x7279;&#x70B9;&#x7684; filoviruses&#xFF0C;&#x8D56;&#x65AF;&#x987F;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; (REBOV) &#x662F;&#x552F;&#x4E00;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF0C;&#x662F;&#x5BF9;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5C3D;&#x7BA1; REBOV &#x53EF;&#x4EE5;&#x5BFC;&#x81F4;&#x975E;&#x4EBA;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x81F4;&#x547D;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x75C5;&#x6E90;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x4E5F;&#x8868;&#x660E; REBOV &#x90A3;&#x4E48;&#x6709;&#x6548;&#x6291;&#x5236;&#x6BD4;&#x624E;&#x4F0A;&#x5C14;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; (ZEBOV) &#x6216;&#x9A6C;&#x5C14;&#x5821;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x56FA;&#x6709;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F0F;&#x7F16;&#x7801; VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#xFF0C;&#x4F46;&#x76EE;&#x524D;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E86;&#x89E3;&#x4ECE; REBOV &#x548C;&#x5176;&#x4ED6; filoviruses VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7279;&#x70B9; REBOV VP35 &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236; (IID) &#x4F7F;&#x7528;&#x57DF;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x751F;&#x5316;&#x3001; &#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x663E;&#x793A;&#x53CC;&#x94FE; RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x548C;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x5728; REBOV VP35 IID&#xFF0C;&#x635F;&#x5931;&#x70ED;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;REBOV VP35 IID &#x7684; 1.71 A &#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684; ZEBOV VP35 IID&#xFF0C;&#x4E0E;&#x6574;&#x4F53;&#x7684;&#x9AA8;&#x5E72; r.m.s.d.&#x7684; 0.64 A&#xFF0C;&#x4F46;&#x5305;&#x542B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9644;&#x52A0;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x5143;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5B50;&#x57DF;&#xFF0C;VP35 IID &#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x5728;&#x3002;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4EA4;&#x6362;&#x5E8F;&#x5217;&#x4E4B;&#x95F4; REBOV &#x548C; ZEBOV&#xFF0C;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x63ED;&#x793A;&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x5E8F;&#x5217;&#x5177;&#x6709;&#x6709;&#x9650;&#x53D8;&#x5F02;&#x6027;&#x7684;&#x5BBD;&#x5BB9;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x89E3;&#x51B3;&#x65E0;&#x914D;&#x4F53;&#x548C;&#x53CC;&#x94FE; RNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; ZEBOV VP35 IID &#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9; REBOV VP35 IID &#x7684;&#x5F53;&#x524D;&#x7814;&#x7A76;&#x52A0;&#x5F3A;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x7684; VP35 &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; REBOV &#x548C; ZEBOV VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x5728;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x90FD;&#x4E0D;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5E8F;&#x5217;&#x53D8;&#x5F02;&#xFF0C;&#x52A0;&#x4E0A;&#x4F0A;&#x6CE2;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x591A;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x4F4E;&#x5BB9;&#x5DEE;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x7684;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7A81;&#x51FA;&#x663E;&#x793A; VP35 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6CBB;&#x7597;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

&#x8D56;&#x65AF;&#x987F;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35 &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;

Ebolaviruses are causative agents of lethal hemorrhagic fever in humans and nonhuman primates. Among the filoviruses characterized thus far, Reston Ebola virus (REBOV) is the only Ebola virus that is nonpathogenic to humans despite the fact that REBOV can cause lethal disease in nonhuman primates. Previous studies also suggest that REBOV is less effective at inhibiting host innate immune responses than Zaire Ebola virus (ZEBOV) or Marburg virus. Virally encoded VP35 protein is critical for immune suppression, but an understanding of the relative contributions of VP35 proteins from REBOV and other filoviruses is currently lacking. In order to address this question, we characterized the REBOV VP35 interferon inhibitory domain (IID) using structural, biochemical, and virological studies. These studies reveal differences in double-stranded RNA binding and interferon inhibition between the two species. These observed differences are likely due to increased stability and loss of flexibility in REBOV VP35 IID, as demonstrated by thermal shift stability assays. Consistent with this finding, the 1.71-A crystal structure of REBOV VP35 IID reveals that it is highly similar to that of ZEBOV VP35 IID, with an overall backbone r.m.s.d. of 0.64 A, but contains an additional helical element at the linker between the two subdomains of VP35 IID. Mutations near the linker, including swapping sequences between REBOV and ZEBOV, reveal that the linker sequence has limited tolerance for variability. Together with the previously solved ligand-free and double-stranded-RNA-bound forms of ZEBOV VP35 IID structures, our current studies on REBOV VP35 IID reinforce the importance of VP35 in immune suppression. Functional differences observed between REBOV and ZEBOV VP35 proteins may contribute to observed differences in pathogenicity, but these are unlikely to be the major determinant. However, the high level of similarity in structure and the low tolerance for sequence variability, coupled with the multiple critical roles played by Ebola virus VP35 proteins, highlight the viability of VP35 as a potential target for therapeutic development.

Structural and functional characterization of Reston Ebola virus VP35 interferon inhibitory domain.

Ebolaviruses sont les agents responsables de la fi&egrave;vre h&eacute;morragique mortelle chez les humains et les primates non humains. Parmi les filovirus caract&eacute;ris&eacute;s jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent, le virus Ebola Reston (REBOV) est le seul virus Ebola qui est non pathog&egrave;ne pour les humains malgr&eacute; le fait que REBOV peut provoquer la maladie mortelle chez les primates non humains. Des &eacute;tudes ant&eacute;rieures sugg&egrave;rent aussi que REBOV est moins efficace pour inhiber l&#39;h&ocirc;te des r&eacute;ponses immunitaires inn&eacute;es que le virus Ebola Za&iuml;re (ZEBOV) ou le virus de Marburg. Virally cod&eacute; VP35 prot&eacute;ine est cruciale pour l&#39;immunod&eacute;pression, mais une compr&eacute;hension de la contribution relative des prot&eacute;ines VP35 de REBOV et autres filovirus fait actuellement d&eacute;faut. Afin de r&eacute;pondre &agrave; cette question, nous avons caract&eacute;ris&eacute; la REBOV VP35 interf&eacute;ron domaine inhibitrice (IID) &agrave; l&#39;aide structurelle, biochimique et &eacute;tudes virologiques. Ces &eacute;tudes de r&eacute;v&egrave;lent des diff&eacute;rences dans les double-brin ARN contraignantes et inhibition de l&#39;interf&eacute;ron entre les deux esp&egrave;ces. Ces diff&eacute;rences sont probables dues &agrave; une stabilit&eacute; accrue et une perte de souplesse dans la REBOV VP35 IID, tel que d&eacute;montr&eacute; par des essais de stabilit&eacute; thermique Maj. Conform&eacute;ment &agrave; cette conclusion, la structure cristalline de 1,71-A de REBOV VP35 IID r&eacute;v&egrave;le qu&#39;il est tr&egrave;s semblable &agrave; celle du ZEBOV VP35 IID, avec un ensemble r.m.s.d. d&#39;&eacute;pine dorsale de 0,64 A, mais qu&#39;il contient un &eacute;l&eacute;ment h&eacute;lico&iuml;dal suppl&eacute;mentaire &agrave; l&#39;&eacute;diteur de liens entre les deux sous-domaines de VP35 IID. Mutations pr&egrave;s de l&#39;&eacute;diteur de liens, y compris l&#39;&eacute;change de s&eacute;quences entre REBOV et ZEBOV, r&eacute;v&egrave;lent que la s&eacute;quence de l&#39;&eacute;diteur de liens a limit&eacute; la tol&eacute;rance de la variabilit&eacute;. Ainsi que les formes sans ligand et de double-brin-RNA-bound d&eacute;j&agrave; r&eacute;solus de structures ZEBOV VP35 IID, nos &eacute;tudes actuelles sur l&#39;IID VP35 REBOV renforcent l&#39;importance des VP35 dans l&#39;immunosuppression. Diff&eacute;rences fonctionnelles observ&eacute;es entre les prot&eacute;ines REBOV et VP35 ZEBOV peuvent contribuer aux diff&eacute;rences observ&eacute;es dans la pathog&eacute;nicit&eacute;, mais ceux-ci ne risquent pas d&#39;&ecirc;tre le facteur d&eacute;terminant. Toutefois, le niveau &eacute;lev&eacute; de similarit&eacute; dans la structure et la faible tol&eacute;rance pour la variabilit&eacute; de s&eacute;quence, coupl&eacute;e avec les multiples r&ocirc;les critiques prot&eacute;ines de VP35 virus Ebola, mettez en surbrillance la viabilit&eacute; du VP35 comme une cible potentielle pour le d&eacute;veloppement de th&eacute;rapeutique.

Caract&eacute;risation structurale et fonctionnelle du domaine inhibitrice de virus Ebola Reston virus VP35 interf&eacute;ron.

Ebolaviruses sind Erreger der t&ouml;dlichen h&auml;morrhagisches Fieber bei Mensch und nicht-menschlichen Primaten. Unter den Filoviruses bisher charakterisiert ist Reston-Ebolavirus (REBOV) das einzige Ebola-Virus, die nonpathogenic auf den Menschen trotz der Tatsache, dass REBOV bei nicht-menschlichen Primaten t&ouml;dliche Krankheit ausl&ouml;sen kann. Fr&uuml;here Studien suggerieren, dass REBOV zur Hemmung Host angeborenen Immunantwort als Zaire-Ebola-Virus (ZEBOV) oder Marburg-Virus weniger effektiv ist. Viral codierte VP35 Protein ist wichtig f&uuml;r die Immunsuppression, ein Verst&auml;ndnis f&uuml;r die relative Beitr&auml;ge der VP35 Proteine von REBOV und andere Filoviruses derzeit fehlt allerdings. Um diese Frage zu adressieren, gekennzeichnet wir REBOV VP35 Interferon hemmenden Dom&auml;ne (IID) mit strukturellen, biochemischen und virologische Untersuchungen. Diese Studien zeigen Unterschiede in doppelstr&auml;ngige RNA Bindung und Interferon Hemmung zwischen den zwei Arten. Diese beobachteten Unterschiede werden durch erh&ouml;hte Stabilit&auml;t und Verlust der Flexibilit&auml;t in REBOV VP35 IID, wie thermische Verschiebung Stabilit&auml;t Proben zeigen. In &Uuml;bereinstimmung mit dieser Feststellung, offenbart die 1,71-A Kristallstruktur von REBOV VP35 IID, sehr der ZEBOV VP35 IID, mit einer allgemeinen R&uuml;ckgrat-r.m.s.d. von 0.64 A &auml;hnelt, sondern ein zus&auml;tzliches spiralf&ouml;rmiges Element an den Linker zwischen den zwei Subdomains von VP35 IID enth&auml;lt. Mutationen in der N&auml;he der Linker, einschlie&szlig;lich Swappen Sequenzen zwischen REBOV und ZEBOV, zeigen, dass die Linker-Sequenz Toleranz f&uuml;r die Variabilit&auml;t beschr&auml;nkt hat. Zusammen mit den zuvor gel&ouml;sten Ligand-frei und Double-Stranded RNA-gebundene ZEBOV VP35 IID Strukturen verst&auml;rken unsere aktuellen Studien &uuml;ber REBOV VP35 IID die Bedeutung der VP35 in Immunsuppression. Funktionale Unterschiede zwischen REBOV und ZEBOV VP35 Proteine zum beobachteten Unterschiede in der Pathogenit&auml;t beitragen k&ouml;nnen, aber diese sind unwahrscheinlich, dass die wichtigsten Determinante. Jedoch die hohe &Auml;hnlichkeit in der Struktur und der geringe Toleranz f&uuml;r Sequenz Variabilit&auml;t, gepaart mit der mehrere kritischen Rollen gespielt von Ebola-Virus-VP35-Proteine, markieren die Lebensf&auml;higkeit der VP35 als m&ouml;gliches Angriffsziel f&uuml;r therapeutische Entwicklung.

Strukturelle und Funktionelle Charakterisierung von Reston Ebola Virus VP35 Interferon hemmenden Dom&auml;ne.

Ebolaviruses sono gli agenti eziologici della febbre emorragica mortale in esseri umani e primati. Tra il filoviruses caratterizzato finora, Reston Ebola virus (REBOV) &egrave; il virus Ebola solo che &egrave; parte di esseri umani, nonostante il fatto che REBOV pu&ograve; causare malattia letale in nonhuman primates. Precedenti studi suggeriscono anche che REBOV &egrave; meno efficace inibizione host risposta immunitaria innata di virus Ebola Zaire (ZEBOV) o virus di Marburg. Codificate virally proteine VP35 sono critica per la soppressione immunitaria, ma la comprensione dei relativi contributi di proteine VP35 da REBOV e altri filoviruses &egrave; attualmente carente. Al fine di rispondere a questa domanda, abbiamo caratterizzato il REBOV VP35 interferone inibitorio dominio (IID) utilizzando strutturali, biochimiche e studi virologici. Questi studi rivelano differenze in double-stranded RNA binding e interferone inibizione tra le due specie. Queste differenze osservate sono probabilmente a causa della maggiore stabilit&agrave; e la perdita di flessibilit&agrave; in REBOV VP35 IID, come dimostrato da analisi stabilit&agrave; termica MAIUSC. Coerente con questa scoperta, la struttura di cristallo 1,71-A di REBOV VP35 IID rivela che &egrave; molto simile a quella di ZEBOV VP35 IID, con un complessivo r.m.s.d. spina dorsale di 0,64 A, ma contiene un ulteriore elemento elicoidale al linker tra le due sottodomini di VP35 IID. Mutazioni nei pressi del linker, compreso lo scambio di sequenze tra REBOV e ZEBOV, rivelano che la sequenza del linker ha limitato la tolleranza per la variabilit&agrave;. Insieme con le forme precedentemente risolte ligando-free e con double-stranded RNA-associazione di strutture ZEBOV VP35 IID, i nostri attuali studi su REBOV VP35 IID rafforzano l&#39;importanza di VP35 in soppressione immunitaria. Funzionale le differenze osservate tra le proteine REBOV e ZEBOV VP35 possono contribuire alle differenze osservate nella patogenicit&agrave;, ma queste sono improbabile da essere la determinante. Tuttavia, l&#39;alto livello di somiglianza nella struttura e la scarsa tolleranza per la variabilit&agrave; di sequenza, accoppiate con i ruoli critici pi&ugrave; giocati da proteine VP35 del virus Ebola, evidenziare la redditivit&agrave; di VP35 come un potenziale bersaglio per lo sviluppo terapeutico.

Caratterizzazione strutturale e funzionale del dominio di interferone Reston Ebola virus VP35 inibitorio.

Ebolaviruses &#x30D2;&#x30C8;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81F4;&#x6B7B;&#x6027;&#x51FA;&#x8840;&#x71B1;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30ED;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; &#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (REBOV) REBOV &#x304C;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x306B;&#x81F4;&#x6B7B;&#x7684;&#x306A;&#x75C5;&#x6C17;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x4EBA;&#x9593;&#x306B;&#x975E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x524D;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x307E;&#x305F; REBOV &#x304C;&#x30B6;&#x30A4;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (ZEBOV) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30FC;&#x30EB;&#x30D6;&#x30EB;&#x30AF; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D0;&#x30A4;&#x30E9;&#x30EB; &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F; VP35 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3001;VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; REBOV &#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30ED;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x8CA2;&#x732E;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x304C;&#x73FE;&#x5728;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;, &#x751F;&#x5316;&#x5B66;, &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066; REBOV VP35 &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (IID) &#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA &#x7D50;&#x5408;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6291;&#x5236; 2 &#x7A2E;&#x9593;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x5411;&#x4E0A;&#x3068; REBOV VP35 IID &#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;REBOV VP35 IID &#x306E; 1.71 A &#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; VP35 IID &#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9593;&#x3067;&#x8FFD;&#x52A0;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x8981;&#x7D20;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B; ZEBOV VP35 IID &#x306B;&#x4F3C;&#x305F;&#x3001;0.64 &#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3; r.m.s.d. &#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5909;&#x7570; REBOV &#x3068; ZEBOV&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x8FD1;&#x304F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x5909;&#x52D5;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x8A31;&#x5BB9;&#x7BC4;&#x56F2;&#x304C;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4EE5;&#x524D;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x7121;&#x6599;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396; RNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; ZEBOV VP35 IID &#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061; REBOV VP35 IID &#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x514D;&#x75AB;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; VP35 &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; REBOV &#x3068; ZEBOV VP35 &#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5DEE;&#x7570;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;, &#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5DEE;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x4F4E;&#x8010;&#x6027;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; VP35 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x3068;&#x76F8;&#x307E;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x76F8;&#x4F3C;&#x6027;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E; VP35 &#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; &#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; VP35 &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6027;&#x72B6;

Ebolaviruses&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xCD9C;&#xD608;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;. &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD2B9;&#xC9D5; filoviruses &#xAC00;&#xC6B4;&#xB370; &#xB808; &#xC2A4; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (REBOV) REBOV nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958;&#xC5D0; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;&#xB294; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xAC8C; nonpathogenic&#xC740; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xAC00;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC804; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; REBOV &#xB35C; &#xC790;&#xC774;&#xB974; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (ZEBOV) &#xB610;&#xB294; Marburg &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;. Virally &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xB41C; VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; REBOV&#xC640; &#xB2E4;&#xB978; filoviruses&#xC5D0;&#xC11C; VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xD574;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; REBOV VP35 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (IID) &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;, &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC0F; virological &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD2B9;&#xC9D5;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB450; &#xC885;&#xC871; &#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xCC28;&#xC774; &#xC5F4; &#xBCC0;&#xD654; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xBA85;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xC190;&#xC2E4; REBOV VP35 IID&#xC5D0; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574;. &#xC774; &#xBC1C;&#xACAC;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58;, REBOV VP35 IID 1.71 A &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870; &#xADF8;&#xAC83; 0.64 A, &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC31;&#xBCF8; r.m.s.d.&#xC640; ZEBOV VP35 IID&#xC758; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9C1;&#xCEE4; VP35 IID&#xC758; &#xB450; &#xD558;&#xC704; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774;&#xB294; &#xCD94;&#xAC00; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC2A4;&#xC640;&#xD551; REBOV&#xC640; ZEBOV, &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xADFC;&#xCC98; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xB9C1;&#xCEE4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC624;&#xCC28;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD588;&#xB2E4;. ZEBOV VP35 IID &#xAD6C;&#xC870;&#xCCB4;&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD574;&#xACB0;&#xB41C; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC790;&#xC720;&#xB86D;&#xACE0; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD3FC;, &#xD568;&#xAED8; REBOV VP35 IID&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; vp35&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xD654;. REBOV &#xBC0F; ZEBOV VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0AC;&#xC774; &#xAD00;&#xCC30; &#xAE30;&#xB2A5; &#xCC28;&#xC774; pathogenicity, &#xAD00;&#xCC30; &#xB41C; &#xCC28;&#xC774; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB4E4;&#xC740; &#xC8FC;&#xC694; &#xACB0;&#xC815; &#xB420; &#xAC83;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC21C;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;, &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xACFC; &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB0AE;&#xC740; &#xB0B4;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; vp35&#xC758; &#xC0DD;&#xC874; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB808; &#xC2A4; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; VP35 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;.

Ebolaviruses son agentes causales de la fiebre hemorr&aacute;gica mortal en humanos y primates no humanos. Entre los filovirus caracterizado hasta el momento, el virus de Ebola Reston (REBOV) es el &uacute;nico virus del Ebola que es no pat&oacute;geno para el ser humano a pesar del hecho de que REBOV puede causar enfermedad letal en primates no humanos. Estudios previos sugieren tambi&eacute;n que REBOV es menos efectivo para inhibir el anfitri&oacute;n inmunorespuestas innata que el virus de Ebola Zaire (ZEBOV) o virus de Marburgo. Codificada viralmente VP35 prote&iacute;na es fundamental para la inmunosupresi&oacute;n, pero actualmente se carece de una comprensi&oacute;n de las contribuciones relativas de las prote&iacute;nas VP35 de REBOV y otros filovirus. Con el fin de abordar esta cuesti&oacute;n, caracterizamos el REBOV VP35 interfer&oacute;n dominio inhibitorio (IID) usando estructurales, bioqu&iacute;micas y estudios virol&oacute;gicos. Estos estudios revelan diferencias en la Uni&oacute;n de RNA bicatenario e inhibici&oacute;n de interfer&oacute;n entre las dos especies. Estas diferencias observadas son probablemente debido a la mayor estabilidad y p&eacute;rdida de flexibilidad en REBOV VP35 IID, como demostrado por an&aacute;lisis de estabilidad de cambio t&eacute;rmico. De acuerdo con este hallazgo, la estructura cristalina de 1.71-A de REBOV VP35 IID revela que es muy similar a la de ZEBOV VP35 IID, con un total r.m.s.d. de la columna vertebral de 0,64 A, pero contiene un elemento helicoidal adicional en el vinculador entre los dos subdominios de VP35 IID. Mutaciones cerca el enlazador, incluyendo intercambio de secuencias entre REBOV y ZEBOV, revelan que la secuencia de vinculador ha limitado la tolerancia para la variabilidad. Junto con las formas previamente resueltos ligando libre y doble-trenzado-RNA-limite de estructuras ZEBOV VP35 IID, nuestros estudios actuales en REBOV VP35 IID refuerzan la importancia de VP35 en la inmunosupresi&oacute;n. Las diferencias funcionales entre las prote&iacute;nas REBOV y ZEBOV VP35 pueden contribuir a las diferencias observadas en la patogenicidad, pero estos son poco probable que sea el determinante principal. Sin embargo, el alto nivel de semejanza en la estructura y la baja tolerancia a la variabilidad de la secuencia, juntada con los m&uacute;ltiples roles cr&iacute;ticos interpretados por las prote&iacute;nas de VP35 del virus Ebola, destacar la viabilidad de VP35 como un blanco potencial para el desarrollo terap&eacute;utico.

Caracterizaci&oacute;n estructural y funcional de dominio inhibitorio de Ebola Reston virus VP35 interfer&oacute;n.

Ebolavirus (EBOV) VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x53CC;&#x94FE; RNA &#xFF08;dsRNA&#xFF09;&#x3001; &#x6291;&#x5236;&#x5BBF;&#x4E3B; &alpha;/&beta; &#x5E72;&#x6270;&#x7D20; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&alpha;/&beta;) &#x751F;&#x4EA7;&#xFF0C;&#x5E76;&#x662F;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;VP35 C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x57DF; (IID) &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x7814;&#x7A76;&#x786E;&#x5B9A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E2D;&#x592E;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7684;&#x53E3;&#x888B;&#xFF0C;dsRNA &#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x548C;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5176;&#x4ED6;&#x5B88;&#x6052;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E0E;&#x4E2D;&#x592E;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7FA4;&#x96C6;&#x63A5;&#x58E4;&#x3002;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x4E2D;&#x592E;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x4E0D;&#x9700; dsRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6216;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;minigenome &#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x590D;&#x53D8;&#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x67E5;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x662F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684; RNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5185;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; VP35-&#x6838;&#x86CB;&#x767D; (NP) &#x4E92;&#x52A8;&#xFF0C;&#x7531; coimmunoprecipitate &#x4E0E; NP &#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x66FF;&#x4EE3;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4E0D;&#x80FD;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x4E00;&#x70B9;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x57FA;&#x672C;&#x4FEE;&#x8865;&#x6B8B;&#x7559;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E; NP &#x4EA4;&#x4E92;&#x590D;&#x5236;&#x590D;&#x6742;&#x5730;&#x5C42;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;Coimmunoprecipitation &#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E; VP35 IID &#x8DB3;&#x4EE5;&#x4E0E; NP &#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x8BE5; dsRNA &#x53EF;&#x8C03;&#x8282; NP VP35 IID &#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5C31;&#x4F1A;&#x4E2D;&#x65AD; VP35 &#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x8F85;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E0E; NP &#x6216;&#x75C5;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x7684;&#x6C28;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x96C6;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x7A81;&#x51FA;&#x5B88;&#x6052;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269; EBOV VP35 C &#x7EC8;&#x7AEF; IID &#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9A8C;&#x8BC1; VP35 IID &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Ebolavirus VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5185;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x5176;&#x75C5;&#x6BD2;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x8F85;&#x9176;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

The ebolavirus (EBOV) VP35 protein binds to double-stranded RNA (dsRNA), inhibits host alpha/beta interferon (IFN-Î±/Î²) production, and is an essential component of the viral polymerase complex. Structural studies of the VP35 C-terminal IFN inhibitory domain (IID) identified specific structural features, including a central basic patch and a hydrophobic pocket, that are important for dsRNA binding and IFN inhibition. Several other conserved basic residues bordering the central basic patch and a separate cluster of basic residues, called the first basic patch, were also identified. Functional analysis of alanine substitution mutants indicates that basic residues outside the central basic patch are not required for dsRNA binding or for IFN inhibition. However, minigenome assays, which assess viral RNA polymerase complex function, identified these other basic residues to be critical for viral RNA synthesis. Of these, a subset located within the first basic patch is important for VP35-nucleoprotein (NP) interaction, as evidenced by the inability of alanine substitution mutants to coimmunoprecipitate with NP. Therefore, first basic patch residues are likely critical for replication complex formation through interactions with NP. Coimmunoprecipitation studies further demonstrate that the VP35 IID is sufficient to interact with NP and that dsRNA can modulate VP35 IID interactions with NP. Other basic residue mutations that disrupt the VP35 polymerase cofactor function do not affect interaction with NP or with the amino terminus of the viral polymerase. Collectively, these results highlight the importance of conserved basic residues from the EBOV VP35 C-terminal IID and validate the VP35 IID as a potential therapeutic target.

Basic residues within the ebolavirus VP35 protein are required for its viral polymerase cofactor function.

L&#39;Ebola (EBOV) VP35 prot&eacute;ine se lie &agrave; l&#39;ARN double brin (dsRNA), inhibe la production d&#39;interf&eacute;ron (IFN-&alpha;/&beta;) h&ocirc;te alpha/b&ecirc;ta et est une composante essentielle de la polym&eacute;rase virale complexe. Des &eacute;tudes structurales du domaine C-terminal de VP35 IFN inhibitrice (IID) identifi&eacute; les caract&eacute;ristiques structurelles sp&eacute;cifiques, y compris un patch de base central et une poche hydrophobe, qui sont importants pour la liaison de l&#39;ARNdb et inhibition de l&#39;IFN. Plusieurs autres r&eacute;sidus basiques conserv&eacute;es qui bordent le patch de base central et un groupe distinct des r&eacute;sidus basiques, appel&eacute; le premier patch de base, ont &eacute;galement &eacute;t&eacute; identifi&eacute;s. Analyse fonctionnelle de mutants de substitution alanine indique que les r&eacute;sidus basiques en dehors de la correction de base centrale ne sont pas n&eacute;cessaires pour la liaison de dsRNA ou d&#39;inhibition de l&#39;IFN. Cependant, les essais de minigenome, qui &eacute;valuent la fonction complexe ARN polym&eacute;rase virale, identifi&eacute; ces autres r&eacute;sidus basiques pour &ecirc;tre critique pour la synth&egrave;se de l&#39;ARN virale. Parmi eux, un sous-ensemble situ&eacute; &agrave; l&#39;int&eacute;rieur le premier patch de base est important pour l&#39;interaction VP35-nucl&eacute;oprot&eacute;ine (NP), comme le prouve l&#39;incapacit&eacute; des mutants de substitution alanine &agrave; coimmunoprecipitate NP. Premiers r&eacute;sidus de patch de base sont donc probables critique pour la formation de complexes de r&eacute;plication gr&acirc;ce &agrave; des interactions avec NP. Co-immunopr&eacute;cipitation &eacute;tudes d&eacute;montrent que VP35 IID est suffisante pour interagir avec NP et qui dsRNA peut moduler les interactions VP35 IID avec NP. D&#39;autres mutations fondamentales de r&eacute;sidus qui perturbent la fonction de cofacteur VP35 polym&eacute;rase n&#39;affectent pas l&#39;interaction avec NP ou avec l&#39;extr&eacute;mit&eacute; amin&eacute;e de la polym&eacute;rase virale. Collectivement, ces r&eacute;sultats soulignent l&#39;importance des r&eacute;sidus de base conserv&eacute;es de IID EBOV VP35 C-terminal et valider l&#39;IID VP35 comme une cible th&eacute;rapeutique potentielle.

R&eacute;sidus basiques au sein de l&#39;Ebola VP35 prot&eacute;ines sont n&eacute;cessaires pour sa fonction de cofacteur de la polym&eacute;rase virale.

Das Ebolavirus (EBOV)-VP35-Protein bindet an doppelstr&auml;ngige RNA (sequenzspezifischen), hemmt Host-Alpha/Beta-Interferon (IFN-&alpha;/&beta;)-Produktion und ist ein wesentlicher Bestandteil der viralen Polymerase Komplex. Strukturelle Studien der VP35 C-terminalen IFN hemmenden Dom&auml;ne (IID) identifiziert die strukturelle Besonderheiten, darunter eine zentrale grundlegende Patch und eine hydrophobe Tasche, die wichtig f&uuml;r die sequenzspezifischen Bindung und IFN-Hemmung. Mehrere andere konservierten grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde an der Grenze der zentralen grundlegende Patch und einem separaten Cluster grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde, genannt die erste grundlegende Patch wurden auch identifiziert. Funktionsanalyse von Alanin Ersetzung Mutanten gibt, dass grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde au&szlig;erhalb der zentralen grundlegende Patch nicht f&uuml;r sequenzspezifischen Bindung oder IFN Hemmung erforderlich sind. Allerdings identifiziert Minigenome Proben, die virale RNA-Polymerase komplexe Funktion bewerten zu k&ouml;nnen, diese andere grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde f&uuml;r virale RNA Synthese von entscheidender Bedeutung zu sein. Von diesen ist eine Untergruppe innerhalb der ersten grundlegenden Patch wichtig f&uuml;r VP35-Nukleoprotein (NP)-Interaktion, gemessen an der Unf&auml;higkeit der Alanin Ersetzung Mutanten Coimmunoprecipitate mit NP. Daher sind die ersten grundlegenden Patch R&uuml;ckst&auml;nde wahrscheinlich entscheidend f&uuml;r Replikation Komplexbildung durch Interaktionen mit NP. Coimmunoprecipitation Studien weiter zeigen, dass die VP35-IID ausreichend ist, um die Interaktion mit NP und die sequenzspezifischen VP35 IID Interaktionen mit NP modulieren kann. Andere grundlegende R&uuml;ckstand-Mutationen, die die VP35-Polymerase-Cofaktor-Funktion st&ouml;ren haben keinen Einfluss auf die Interaktion mit NP oder das amino-Terminus der viralen Polymerase. Zusammen diese Ergebnisse unterstreichen die Bedeutung der konservierten grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde aus der EBOV VP35 C-terminalen IID und &uuml;berpr&uuml;fen die VP35-IID als m&ouml;gliche therapeutische Ziel.

Grundlegende R&uuml;ckst&auml;nde innerhalb der Ebolavirus VP35 Protein sind f&uuml;r ihre virale Polymerase-Cofaktor-Funktion erforderlich.

Le proteine VP35 ebolavirus (EBOV) si lega al RNA double-stranded (dsRNA), inibisce la produzione di interferone (IFN-&alpha;/&beta;) alfa/beta host ed sono una componente essenziale della polimerasi virale complessa. Studi strutturali del dominio C-terminale VP35 IFN inibitorio (IID) individuate caratteristiche strutturali specifiche, tra cui una patch base centrale e una tasca idrofobica, che sono importanti per l&#39;associazione di dsRNA e inibizione di IFN. Diversi altri residui conservati base confinante con la patch base centrale e un cluster distinto dei residui di base, chiamato la prima patch base, inoltre sono stati identificati. Analisi funzionale dei mutanti di sostituzione dell&#39;alanina indicano che residui di base fuori la patch base centrale non sono richiesti per l&#39;associazione di dsRNA o per l&#39;inibizione dell&#39;IFN. Tuttavia, dosaggi di minigenome, che valutano la funzione complessa virali RNA polimerasi, identificato questi altri residui fondamentali per essere critico per la sintesi di RNA virale. Di questi, un sottoinsieme che si trova all&#39;interno della prima patch base &egrave; importante per l&#39;interazione VP35-nucleoproteina (NP), come dimostra l&#39;incapacit&agrave; di mutanti di sostituzione dell&#39;alanina a coimmunoprecipitate con NP. Pertanto, prime patch base residui sono probabili critico per la formazione dei complessi replica attraverso interazioni con NP. Coimmunoprecipitation studi dimostrano che l&#39;IID VP35 &egrave; sufficiente per interagire con NP e quello dsRNA pu&ograve; modulare le interazioni VP35 IID con NP. Altre mutazioni a base di residui che interrompono la funzione di cofattore della polimerasi VP35 non interessano interazione con NP o con il terminus amminico della polimerasi virale. Collettivamente, questi risultati sottolineano l&#39;importanza dei residui conservati di base da IID EBOV VP35 C-terminale e convalidare l&#39;IID VP35 come un potenziale bersaglio terapeutico.

Residui di base all&#39;interno di ebolavirus proteine VP35 sono necessari per la sua funzione di cofattore della polimerasi virale.

Ebolavirus (EBOV) VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x4E8C;&#x672C;&#x9396; RNA (dsRNA) &#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;/&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF; &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3; &#xFF08;IFN-&alpha;/&beta;) &#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3066;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;VP35 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x306E; IFN &#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (IID) &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7814;&#x7A76; dsRNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057; IFN &#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x56FD;&#x5883;&#x3092;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B;&#x4E2D;&#x592E;&#x57FA;&#x672C;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x5916;&#x304C; dsRNA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x307E;&#x305F;&#x306F; IFN &#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; RNA &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3001;minigenome &#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; RNA &#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6B8B;&#x6E23;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x5185;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E; VP35 &#x86CB;&#x767D; (NP) &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001;NP &#x3092; coimmunoprecipitate &#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x7F6E;&#x63DB;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7121;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30D1;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x6B8B;&#x57FA;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059; NP &#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x8907;&#x88FD;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3068;&#x3063;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x3002;Coimmunoprecipitation &#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x3089;&#x306B; VP35 IID &#x306F; NP &#x304C;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x305D;&#x306E; dsRNA NP &#x3068; VP35 IID &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;VP35 &#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x88DC;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x4ED6;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x6B8B;&#x57FA;&#x5909;&#x7570; NP &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x7DCF;&#x79F0;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F; EBOV VP35 &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF; IID &#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066; VP35 IID &#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B; ebolavirus VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x5185;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ebolavirus (EBOV) VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; RNA (dsRNA) &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC54C;&#xD30C;/&#xBCA0;&#xD0C0; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN-&alpha;/&beta;) &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. VP35 C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; IFN &#xAE08;&#xC9C0; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (IID)&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD2B9;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5;, &#xC911;&#xC559; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xB4F1; &#xC18C;&#xC218; &#xD3EC;&#xCF13; dsRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; IFN &#xC800;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E4;&#xB978; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xC911;&#xC559; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xBC0F; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xB77C;&#xB294; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCC4;&#xB3C4; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xACBD;&#xACC4; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xB300;&#xCCB4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xC911;&#xC559; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xBC16;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; dsRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB610;&#xB294; IFN &#xC5B5;&#xC81C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, minigenome &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xD6A8;&#xC18C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB4E4; &#xC911;, &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xB0B4;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; coimmunoprecipitate NP&#xC640; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; &#xB300;&#xCCB4; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xBB34; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D; VP35-nucleoprotein (NP) &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD328;&#xCE58; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xD655;&#xB960;&#xC774; NP&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCF5;&#xC81C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C;. Coimmunoprecipitation &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCD94;&#xAC00; VP35 IID NP&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; dsRNA NP VP35 IID &#xC0C1;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. VP35 &#xD6A8;&#xC18C; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xB9D0;&#xB2E8; &#xB610;&#xB294; NP&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0E8; &#xB2E4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; EBOV VP35 C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; IID&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; VP35 IID&#xC758; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;.

Ebolavirus VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB0B4;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD6A8;&#xC18C; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;.

La prote&iacute;na de VP35 ebolavirus (EBOV) se une al ARN bicatenario (dsRNA), inhibe la producci&oacute;n de interfer&oacute;n (IFN-&alpha;/&beta;) anfitri&oacute;n Alfa/beta y es un componente esencial de la polimerasa viral complejo. Estudios estructurales del dominio inhibitorios IFN VP35 c-terminal (IID) identifican espec&iacute;ficas caracter&iacute;sticas estructurales, incluyendo una revisi&oacute;n b&aacute;sica central y un bolsillo hidrof&oacute;bico, que son importantes para el enlace de dsRNA e inhibici&oacute;n de IFN. Varios otros residuos conservados b&aacute;sicas bordeando el parche b&aacute;sico central y un grupo separado de residuos b&aacute;sicos, llamado el primer parche b&aacute;sico, tambi&eacute;n fueron identificadas. An&aacute;lisis funcional de mutantes de sustituci&oacute;n de alanina indica que residuos b&aacute;sicos fuera el parche b&aacute;sico central no son requeridos para el enlace de dsRNA o para la inhibici&oacute;n de IFN. Sin embargo, ensayos de minigenome, que evaluaci&oacute;n la funci&oacute;n compleja de la polimerasa del RNA viral, &eacute;stos identificaron otros residuos b&aacute;sicos para ser cr&iacute;tico para la s&iacute;ntesis de ARN viral. De &eacute;stos, un subconjunto ubicado en el primer parche b&aacute;sico es importante para la interacci&oacute;n VP35-nucleoprote&iacute;na (NP), como lo demuestra la incapacidad de mutantes de sustituci&oacute;n de alanina coimmunoprecipitate con NP. Por lo tanto, est&aacute;n probable que la primeros residuos parche b&aacute;sico fundamental para la formaci&oacute;n de complejos de replicaci&oacute;n a trav&eacute;s de interacciones con NP. Coimmunoprecipitation estudios demuestran que el IID VP35 es suficiente para interactuar con NP y eso dsARN puede modular interacciones VP35 IID con NP. Otras mutaciones de residuos b&aacute;sicos que alteran la funci&oacute;n de cofactor de polimerasa VP35 no afectan la interacci&oacute;n con NP o con el t&eacute;rmino amino de la polimerasa viral. En conjunto, estos resultados destacan la importancia de residuos conservados b&aacute;sicas del EBOV VP35 c-terminal IID y validar el IID VP35 como una potencial diana terap&eacute;utica.

Residuos b&aacute;sicos dentro de la ebolavirus VP35 prote&iacute;na son necesarios para su funci&oacute;n de cofactor de la polimerasa viral.

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (EBOV) &#x304C;&#x6563;&#x767A;&#x7684;&#x767A;&#x751F;&#x4E2D;&#x306B;&#x91CD;&#x5EA6;&#x306E;&#x51FA;&#x8840;&#x71B1;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x30D5;&#x30A3;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x79D1;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x627F;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E; EBOV VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306F;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x62EE;&#x6297;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; RNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x898F;&#x5236;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5BFE;&#x7B56;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30B6;&#x30A4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x3001;&#x30EC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; EBOV VP35 &#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x6291;&#x5236;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; (IID) &#x30D5;&#x30EA;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B6;&#x30A4;&#x30FC;&#x30EB; EBOV VP35 IID &#x306E; dsRNA &#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x8A0E;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B; EBOV VP35 IID &#x5185;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; RNA &#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x6700;&#x65B0;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x8981;&#x7D04;&#x3068;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9; VP35 &#x6CBB;&#x7642;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8A71;&#x3057;&#x5408;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ebolavirus VP35 &#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6BD2;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBOV)&#xB294; &#xC0B0;&#xBC1C;&#xC801; &#xC778; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2DC; &#xC2EC;&#xAC01;&#xD55C; &#xCD9C;&#xD608;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; filoviridae &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131;&#xC6D0; &#xBC0F; &#xC5C6;&#xC74C; &#xC2B9;&#xC778; &#xB41C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; EBOV VP35 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C; antagonizing &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC758;&#xD574; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xACE0; &#xB300;&#xCC45;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB824;&#xBA74;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0; &#xC790;&#xC774;&#xB974; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xB808; &#xC2A4; EBOV VP35 &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; (IID) &#xC790;&#xC720; &#xC591;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC790;&#xC774;&#xB974; EBOV VP35 IID&#xC758; Dsrna&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; virological &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC791;&#xC5C5; EBOV VP35 IID &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xC758; &#xC601;&#xC5ED; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; RNA &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB3C5;&#xC131;&#xC744; &#xAE30;&#xC5EC; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC694;&#xC57D; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; VP35 &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xC758; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xB17C;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ebolavirus VP35 &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ebola virus (EBOV) &egrave; un membro della famiglia filoviridae che provoca la febbre emorragica grave durante focolai sporadici e non trattamenti approvati sono attualmente disponibili. La proteina multifunzionale EBOV VP35 facilita l&#39;evasione immune da inimicarsi antivirali signaling pathways ed &egrave; importante per la sintesi di RNA virale. Al fine di chiarire i meccanismi di regolamentazione e di sviluppare contromisure, recentemente abbiamo risolto le strutture della Zaire e Reston EBOV VP35 interferone inibitorio dominio (IID) in forma libera e di Zaire EBOV VP35 IID associato a dsRNA. Insieme con studi biochimici, biologici e virologica sulle cellule, il nostro lavoro strutturale ha rivelato che le regioni distinte all&#39;interno di EBOV VP35 IID contribuiscono alla virulenza attraverso evasione immune ospite e la sintesi di RNA virale. Qui riassumiamo i nostri recenti studi strutturali e funzionali e discutere le potenzialit&agrave; del multifunzionale Ebola VP35 come un obiettivo terapeutico.

ebolavirus VP35 &egrave; un fattore di virulenza multifunzionale.

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;EBOV&#xFF09; &#x662F;&#x96F6;&#x661F;&#x7684;&#x66B4;&#x53D1;&#xFF0C;&#x671F;&#x95F4;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x51FA;&#x8840;&#x6027;&#x53D1;&#x70ED;&#x7684; filoviridae &#x5BB6;&#x5EAD;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x53EF;&#x6CA1;&#x6709;&#x8BA4;&#x53EF;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x591A;&#x529F;&#x80FD; EBOV VP35 &#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x62EE;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x6F84;&#x6E05;&#x89C4;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5236;&#x5B9A;&#x5BF9;&#x7B56;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x89E3;&#x51B3;&#x4E86;&#x624E;&#x4F0A;&#x5C14;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x8D56;&#x65AF;&#x987F; EBOV VP35 &#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x57DF; (IID) &#x81EA;&#x7531;&#x5F62;&#x5F0F;&#x548C;&#x624E;&#x4F0A;&#x5C14; EBOV VP35 IID &#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; dsRNA&#x3002;&#x4E0E;&#x751F;&#x5316;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x3001; &#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x533A;&#x57DF;&#x5185; EBOV VP35 IID &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E00;&#x4E0B;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9776;&#x70B9;&#x7684;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; VP35&#x3002;

Ebolavirus VP35 &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;

Ebola virus (EBOV) is a member of the filoviridae family that causes severe hemorrhagic fever during sporadic outbreaks, and no approved treatments are currently available. The multifunctional EBOV VP35 protein facilitates immune evasion by antagonizing antiviral signaling pathways and is important for viral RNA synthesis. In order to elucidate regulatory mechanisms and to develop countermeasures, we recently solved the structures of the Zaire and Reston EBOV VP35 interferon inhibitory domain (IID) in the free form and of the Zaire EBOV VP35 IID bound to dsRNA. Together with biochemical, cell biological, and virological studies, our structural work revealed that distinct regions within EBOV VP35 IID contribute to virulence through host immune evasion and viral RNA synthesis. Here we summarize our recent structural and functional studies and discuss the potential of multifunctional Ebola VP35 as a therapeutic target.

Ebolavirus VP35 is a multifunctional virulence factor.

Le virus Ebola (EBOV) est un membre de la famille des filoviridae qui provoque une fi&egrave;vre h&eacute;morragique s&eacute;v&egrave;re au cours des flamb&eacute;es sporadiques, et aucun traitement homologu&eacute; n&#39;est actuellement disponibles. La prot&eacute;ine multifonctionnelle de EBOV VP35 facilite l&#39;&eacute;vasion immunitaire de contrarier les voies de signalisation antivirales et est importante pour la synth&egrave;se de l&#39;ARN virale. Afin d&#39;&eacute;lucider les m&eacute;canismes de r&eacute;gulation et de d&eacute;velopper des contre-mesures, nous avons r&eacute;solu r&eacute;cemment les structures du Za&iuml;re et Reston EBOV VP35 interf&eacute;ron inhibitrice domaine (IID) sous la forme libre et du Za&iuml;re EBOV VP35 IID li&eacute; &agrave; l&#39;ARNdb. Ensemble avec les &eacute;tudes biochimiques, de cellules biologiques et virologiques, nos travaux structurel ont r&eacute;v&eacute;l&eacute; que les r&eacute;gions distinctes au sein de l&#39;IID VP35 EBOV contribuent &agrave; la virulence par h&ocirc;te &eacute;vasion immunitaire et de la synth&egrave;se de l&#39;ARN virale. Nous r&eacute;sumons ici nos r&eacute;centes &eacute;tudes structurales et fonctionnelles et discuter du potentiel de multifonctionnel Ebola VP35 comme une cible th&eacute;rapeutique.

Ebolavirus VP35 est un facteur de virulence multifonctionnel.

Ebola-Virus (EBOV) ist ein Mitglied der Familie der Filoviridae, die schwere h&auml;morrhagisches Fieber w&auml;hrend Sporadische Ausbr&uuml;che verursacht, und keine zugelassenen Therapien sind derzeit verf&uuml;gbar. Das multifunktionale EBOV VP35-Protein erleichtert immun ausweichen von davon antivirale Signalwege und ist wichtig f&uuml;r die virale RNA-Synthese. Um die Regulierungsmechanismen zu erhellen und Gegenma&szlig;nahmen zu entwickeln, haben wir vor kurzem gel&ouml;st die Strukturen der die Demokratische Republik Kongo und Reston EBOV VP35 Interferon hemmenden Dom&auml;ne (IID) in der freien Form und die Zaire EBOV VP35 IID an sequenzspezifischen gebunden. Zusammen mit biochemische, biologische und virologische Untersuchungen von Zelle, unsere strukturellen Arbeit ergab, dass verschiedene Regionen innerhalb EBOV VP35 IID zur Virulenz durch Host immun ausweichen und virale RNA-Synthese beitragen. Hier fassen wir unsere j&uuml;ngsten strukturellen und funktionellen Studien und das Potenzial der multifunktionalen Ebola VP35 als ein therapeutisches Ziel zu diskutieren.

Ebolavirus VP35 ist eine multifunktionale Virulenzfaktoren.

El virus del &Eacute;bola (EBOV) es un miembro de la familia filoviridae causante de la fiebre hemorr&aacute;gica severa durante brotes espor&aacute;dicos, y no hay tratamientos aprobados est&aacute;n actualmente disponibles. La prote&iacute;na multifuncional EBOV VP35 facilita la evasi&oacute;n inmune por enemistarse con antivirales v&iacute;as de se&ntilde;alizaci&oacute;n y es importante para la s&iacute;ntesis de ARN viral. Para dilucidar los mecanismos de regulaci&oacute;n y desarrollar contramedidas, resolvimos recientemente las estructuras del Zaire y Reston EBOV VP35 interfer&oacute;n inhibitorio dominio (IID) en forma libre y de la EBOV de Zaire VP35 IID obligados a dsARN. Junto con los estudios biol&oacute;gicos y virol&oacute;gicos de Bioqu&iacute;mica, celular, nuestro trabajo estructural revel&oacute; que distintas regiones dentro de EBOV VP35 IID contribuyen a la virulencia a trav&eacute;s de la evasi&oacute;n inmune del anfitri&oacute;n y la s&iacute;ntesis de ARN viral. Aqu&iacute; resumimos nuestros recientes estudios estructurales y funcionales y discutir la posibilidad de m&uacute;ltiples funciones Ebola VP35 como diana terap&eacute;utica.

Ebolavirus VP35 es un factor de virulencia multifuncional.

LFA-1 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x5176;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 &#x914D;&#x4F53;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x548C;&#x4F20;&#x8F93;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x4FE1;&#x5C01;&#x4E0A;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 virions &#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5B66;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x5C06; LFA 1 &#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x79EF;&#x6781;&#x6784;&#x5EFA;&#x5177;&#x6709;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;-1 &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x8BA1;&#x7B97;&#x662F;&#x5426;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x672C;&#x8EAB;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 gp120 &#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x89E6;&#x53D1; LFA 1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x5B8C;&#x5168;&#x9759;&#x6B62;&#x5E7C;&#x7A1A;&#x7684; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; CD4 &#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D8;&#x5F97;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x53D7;&#x5230;&#x7531; LtxA&#xFF0C;&#x4F18;&#x5148;&#x76EE;&#x6807;&#x8868;&#x8FBE;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x79EF;&#x6781;&#x7684; LFA 1 &#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC; leukotoxin &#x6740;&#x5BB3;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x75C5;&#x6BD2; p24 &#x8868;&#x793A; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x4E2D;&#x611F;&#x67D3;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x79D1;&#x76EE;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x66F4;&#x9AD8;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x8868;&#x9762; LFA-1 &#x548C; LtxA &#x6CBB;&#x7597;&#x5BFC;&#x81F4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027; DNA &#x8D1F;&#x62C5;&#x663E;&#x8457;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x9996;&#x6B21;&#x8BC1;&#x660E;&#x4E86;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;-1 &#x6FC0;&#x6D3B; CD4 T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x867D;&#x7136; LFA 1 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x53EF;&#x80FD;&#x52A0;&#x5F3A;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x548C;&#x4F20;&#x8F93;&#xFF0C;&#x5B83;&#x8FD8;&#x4F1A;&#x5448;&#x73B0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x53D7;&#x5230;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x6CBB;&#x7597;&#x6218;&#x7565;&#x6D88;&#x8017;&#x5728;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x8005;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6C34;&#x5E93;&#x5229;&#x7528; LFA 1 &#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;

&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4FE1;&#x5C01; gp120 &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;-1 &#x5BF9; CD4 T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x9488;&#x5BF9; LFA 1 leukotoxin (LtxA) &#x7EC6;&#x80DE;&#x6613;&#x611F;&#x6027;&#x3002;

The cellular adhesion molecule LFA-1 and its ICAM-1 ligand play an important role in promoting HIV-1 infectivity and transmission. These molecules are present on the envelope of HIV-1 virions and are integral components of the HIV virological synapse. However, cellular activation is required to convert LFA-1 to the active conformation that has high affinity binding for ICAM-1. This study evaluates whether such activation can be induced by HIV itself. The data show that HIV-1 gp120 was sufficient to trigger LFA-1 activation in fully quiescent naÃ¯ve CD4 T cells in a CD4-dependent manner, and these CD4 T cells became more susceptible to killing by LtxA, a bacterial leukotoxin that preferentially targets leukocytes expressing high levels of the active LFA-1. Moreover, virus p24-expressing CD4 T cells in the peripheral blood of HIV-infected subjects were found to have higher levels of surface LFA-1, and LtxA treatment led to significant reduction of the viral DNA burden. These results demonstrate for the first time the ability of HIV to directly induce LFA-1 activation on CD4 T cells. Although LFA-1 activation may enhance HIV infectivity and transmission, it also renders the cells more susceptible to an LFA-1-targeting bacterial toxin, which may be harnessed as a novel therapeutic strategy to deplete virus reservoir in HIV-infected individuals.

HIV envelope gp120 activates LFA-1 on CD4 T-lymphocytes and increases cell susceptibility to LFA-1-targeting leukotoxin (LtxA).

La mol&#xE9;cule d&#x26;#39;adh&#xE9;sion cellulaire LFA-1 et son ligand ICAM-1 joue un r&#xF4;le important dans la promotion de VIH-1 infectant et la transmission. Ces mol&#xE9;cules sont pr&#xE9;sentes sur l&#x26;#39;enveloppe du VIH-1 virions et sont des composantes int&#xE9;grales de la synapse virologique du VIH. Cependant, l&#x26;#39;activation cellulaire est n&#xE9;cessaire pour convertir le LFA-1 pour la conformation active qui a une affinit&#xE9; de liaison &#xE9;lev&#xE9;e pour ICAM-1. Cette &#xE9;tude &#xE9;value si une telle activation peut &#xEA;tre induite par le VIH elle-m&#xEA;me. Les donn&#xE9;es montrent que le VIH-1 gp120 &#xE9;tait suffisante pour d&#xE9;clencher l&#x26;#39;activation de LFA-1 dans tout repos CD4 des cellules T na&#xEF;ves d&#x26;#39;une mani&#xE8;re CD4-d&#xE9;pendante, et ces cellules T CD4 est devenue plus sensible &#xE0; la destruction par LtxA, une leucotoxine bact&#xE9;rienne qui cible pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement les leucocytes exprimant des niveaux &#xE9;lev&#xE9;s de l&#x26;#39;actif de LFA-1. En outre, le virus de p24 des cellules exprimant CD4 dans le sang p&#xE9;riph&#xE9;rique de sujets infect&#xE9;s par le VIH ont &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9;s &#xE0; des niveaux plus &#xE9;lev&#xE9;s de la surface de LFA-1, et le traitement LtxA conduit &#xE0; une r&#xE9;duction significative de la charge de l&#x26;#39;ADN viral. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent pour la premi&#xE8;re fois la capacit&#xE9; du VIH &#xE0; induire directement l&#x26;#39;activation de LFA-1 sur les lymphocytes T CD4. Bien que LFA-1 activation peut am&#xE9;liorer l&#x26;#39;infectiosit&#xE9; du VIH et la transmission, elle rend &#xE9;galement les cellules plus sensibles &#xE0; une LFA-1-ciblage toxine bact&#xE9;rienne, qui peut &#xEA;tre exploit&#xE9; comme une nouvelle strat&#xE9;gie th&#xE9;rapeutique pour &#xE9;puiser r&#xE9;servoir du virus dans les personnes s&#xE9;ropositives.

Enveloppe gp120 du VIH Active LFA-1 sur les lymphocytes T CD4 et de sensibilit&#xE9; de la cellule augmente &#xE0; LFA-1-ciblage leucotoxine (LtxA)

Das zellulare Adh&auml;sion Molek&uuml;l LFA-1 und ihrer Liganden ICAM-1 Rolle eine wichtige bei der F&ouml;rderung der HIV-1-Infektiosit&auml;t und &Uuml;bertragung. Diese Molek&uuml;le sind auf dem Umschlag von HIV-1-Virionen und sind integrale Bestandteile der der virologischen HIV-Synapse. Zellul&auml;re Aktivierung ist jedoch erforderlich, LFA-1 in der aktiven Konformation zu konvertieren, die hohe Affinit&auml;t Bindung f&uuml;r ICAM-1 hat. Diese Studie wertet aus, ob solche Aktivierung durch HIV selbst verursacht werden kann. Die Daten zeigen, dass HIV-1 gp120 ausreichend war, um die LFA-1 Aktivierung in voll Ruhezustand naiven CD4-T-Zellen CD4-abh&auml;ngigen Weise ausl&ouml;sen und diese CD4-T-Zellen anf&auml;lliger f&uuml;r T&ouml;tung durch LtxA, eine bakterielle Leukotoxin, das vorzugsweise Leukozyten zum Ausdruck bringen hohe Niveaus der aktiven LFA-1 Ziel. Dar&uuml;ber hinaus wurden Virus p24-auszudr&uuml;cken CD4 T-Zellen im peripheren Blut der HIV-infizierten Personen gefunden, die h&ouml;heren Ebenen Fl&auml;che LFA-1 und LtxA Behandlung f&uuml;hrte zu erheblichen Reduktion der die virale DNA-Belastung. Diese Ergebnisse zeigen zum ersten Mal die F&auml;higkeit des HIV, LFA-1 Aktivierung auf CD4 T-Zellen direkt zu induzieren. Obwohl LFA-1 Aktivierung HIV Infektiosit&auml;t und &Uuml;bertragung verbessern kann, macht es auch die Zellen anf&auml;lliger f&uuml;r ein LFA-1-targeting bakterielle Toxine, die als neuartige therapeutische Strategie zu Virus-Reservoir bei HIV-infizierten Personen zum Abbau genutzt werden kann.

HIV Umschlag gp120 LFA-1 auf CD4 T-Lymphozyten aktiviert und erh&ouml;ht die Zelle Anf&auml;lligkeit f&uuml;r LFA-1-targeting Leukotoxin (LtxA).

La molecola di adesione cellulare LFA-1 e suo ligando ICAM-1 gioca un ruolo importante nel promuovere la trasmissione e l&#39;infettivit&agrave; di HIV-1. Queste molecole sono presenti sulla busta di virioni di HIV-1 e sono parti integranti della sinapsi virologica dell&#39;HIV. Tuttavia, &egrave; necessaria per convertire LFA-1 per la conformazione attiva che ha legame ad alta affinit&agrave; per ICAM-1 attivazione cellulare. Questo studio valuta se tale attivazione pu&ograve; essere indotta da HIV stessa. I dati mostrano che HIV-1 gp120 &egrave; stato sufficiente a far scattare l&#39;attivazione LFA-1 in cellule T CD4 na&iuml;ve completamente quiescente in modo CD4-dipendente, e queste cellule T CD4 &egrave; diventato pi&ugrave; suscettibili all&#39;uccisione di LtxA, un leukotoxin batterica che preferenzialmente gli obiettivi dei leucociti che esprimono alti livelli di LFA-1 attiva. Inoltre, virus p24-esprimere cellule T CD4 nel sangue periferico di soggetti HIV-positivi sono state trovate per avere livelli elevati di superficie LFA-1 e LtxA trattamento ha portato a una significativa riduzione dell&#39;onere del DNA virale. Questi risultati dimostrano per la prima volta la capacit&agrave; dell&#39;HIV di direttamente indurre attivazione LFA-1 sulle cellule T CD4. Sebbene attivazione LFA-1 pu&ograve; migliorare la trasmissione e infettivit&agrave; HIV, inoltre rende le cellule pi&ugrave; suscettibili ad una tossina batterica LFA-1-targeting, che pu&ograve; essere sfruttata come una romanzo strategia terapeutica per esaurire il serbatoio del virus in individui HIV-infettati.

HIV gp120 busta attiva LFA-1 sui linfociti T CD4 e aumenta la suscettibilit&agrave; delle cellule al targeting LFA-1 leukotoxin (LtxA).

&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x5206;&#x5B50;LFA-1&#x3068;ICAM-1&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306F;HIV-1&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x9001;&#x4FE1;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x30D3;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3057;&#x3001;HIV&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;ICAM-1&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;LFA-1&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;HIV&#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;HIV-1&#x306E;gp120&#x304C;CD4&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x9759;&#x6B62;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;CD4 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;LFA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;CD4 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B3;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;LtxA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6BBA;&#x5BB3;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x304F;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;LFA-1&#x306E;&#x9AD8;&#x767A;&#x73FE;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x8005;&#x306E;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;p24&#x306E;&#x767A;&#x73FE;CD4 T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;DNA&#x306E;&#x8CA0;&#x62C5;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x524A;&#x6E1B;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x9AD8;&#x3044;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x304C;LFA-1&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;LtxA&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;CD4 T&#x7D30;&#x80DE;&#x4E0A;&#x306E;LFA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;HIV&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; LFA-1&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x8005;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8CAF;&#x6C34;&#x6C60;&#x3092;&#x67AF;&#x6E07;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x6CBB;&#x7642;&#x6226;&#x7565;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D3B;&#x304B;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;LFA-1&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

HIV&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;gp120&#x306F;LFA-1&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B3;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;LtxA&#xFF09;&#x306B;CD4 T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x306B;LFA-1&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;

&#xC138;&#xD3EC; &#xC811;&#xCC29; &#xBD84;&#xC790; LFA-1&#xACFC;&#xB294; ICAM-1 &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; HIV 1 infectivity&#xC640; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 virions &#xBD09;&#xD22C;&#xC5D0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; virological &#xB0C5;&#xC758; &#xD1B5;&#xD569; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; ICAM-1&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC774; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB098; &#xB780;&#xC744; LFA-1&#xC744; &#xBCC0;&#xD658; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB4F1; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; HIV &#xC790;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; HIV 1 gp120 CD4 &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC644;&#xC804; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; CD4 T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; LFA-1&#xC758; &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC744; &#xC2E4;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xB370;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;&#xC774; CD4 T &#xC138;&#xD3EC; &#xB354; &#xCDE8;&#xC57D; LtxA, &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; LFA-1&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; leukotoxin&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0B4;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xACFC;&#xBAA9;&#xC758; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; p24 &#xD45C;&#xD604; CD4 T &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; LFA-1&#xC758; &#xC0C1;&#xBD80; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; DNA &#xBD80;&#xB2F4;&#xC758; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4; LtxA &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C1;&#xC811; CD4 T &#xC138;&#xD3EC; LFA-1&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; HIV&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. LFA-1 &#xC815;&#xD488; &#xC778;&#xC99D;&#xC5D0;&#xB294; HIV infectivity &#xBC0F; &#xC804;&#xC1A1;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; &#xC140;&#xC740; LFA-1 &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xADE0; &#xB3C5;, HIV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xAC1C;&#xC778;&#xC758; &#xC800;&#xC218;&#xC9C0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xACE0;&#xAC08; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xB7B5;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB8F0; &#xC218;&#xB294; &#xB354; &#xC801;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xBD09;&#xD22C; gp120 LFA-1 CD4 T-&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; LFA-1 &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; leukotoxin (LtxA) &#xBBFC;&#xAC10;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mol&#xE9;cula de adhesi&#xF3;n celular de LFA-1 y su ligando ICAM-1 juegan un papel importante en la promoci&#xF3;n de la infectividad del VIH-1 y la transmisi&#xF3;n. Estas mol&#xE9;culas est&#xE1;n presentes en la envoltura del VIH-1 viriones y son componentes integrales de la sinapsis virol&#xF3;gicas del VIH. Sin embargo, la activaci&#xF3;n celular es necesaria para convertir la LFA-1 a la conformaci&#xF3;n activa que tiene de uni&#xF3;n de alta afinidad para la ICAM-1. Este estudio eval&#xFA;a si dicha activaci&#xF3;n puede ser inducida por el VIH en s&#xED;. Los datos muestran que el VIH-1 gp120 era suficiente para desencadenar la activaci&#xF3;n de LFA-1 en las c&#xE9;lulas CD4 naive totalmente inactivas las c&#xE9;lulas T CD4 de una manera dependiente, y estas c&#xE9;lulas T CD4 lleg&#xF3; a ser m&#xE1;s susceptibles a la muerte por LtxA, una leucotoxina bacteriana que se dirige preferentemente a los leucocitos expresar altos niveles de la sesi&#xF3;n de LFA-1. Adem&#xE1;s, el virus de p24-expresi&#xF3;n de las c&#xE9;lulas T CD4 en la sangre perif&#xE9;rica de sujetos infectados con VIH se encontr&#xF3; que ten&#xED;an niveles m&#xE1;s altos de la superficie de LFA-1, y el tratamiento LtxA condujo a una reducci&#xF3;n significativa de la carga de ADN viral. Estos resultados demuestran por primera vez la capacidad del VIH para inducir directamente la activaci&#xF3;n de LFA-1 en c&#xE9;lulas T CD4. Aunque la activaci&#xF3;n de LFA-1 puede aumentar la infectividad del VIH y la transmisi&#xF3;n, sino que tambi&#xE9;n hace que las c&#xE9;lulas m&#xE1;s susceptibles a una LFA-1-focalizaci&#xF3;n toxina bacteriana, que puede ser utilizada como una nueva estrategia terap&#xE9;utica para agotar dep&#xF3;sito del virus en individuos infectados por VIH.

Kathleen C. Prins

Department of Pathology

New York University Langone School of Medicine

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers