JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Protocol
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

نموذج الفئران لنقص التروية القلبية والدماغية شروط مسبقة هو دراسة آليات أمراض القلب أداة هامة في الجسم الحي. هنا ، نحن تقرير اجب التطبيق سهل في الموقع نموذج للملكية الفكرية القلب باستخدام نظام شنقا الوزن لانسداد الشريان التاجي.

Abstract

دراسات الفئران من الاصابة الحادة هي مجال التحقيق المكثف ، والفئران خروج المغلوب للجينات مختلفة أصبحت متاحة على نحو متزايد 1-38. Cardioprotection شروط مسبقة من قبل الدماغية (IP) لا تزال منطقة من التحقيق المكثف. لمزيد من توضيح الأساس الجزيئي ، واستخدام الماوس خروج المغلوب من الدراسات له أهمية خاصة 7 ، 14 ، 30 ، 39. على الرغم من أن دراسات سابقة أجريت بنجاح بالفعل نقص التروية القلبية وضخه في الفئران ، وهذا النموذج من الناحية التقنية صعبة للغاية. خاصة ، وتحديد البصرية من الشريان التاجي ، والتنسيب للخياطة في جميع أنحاء السفينة وانسداد الشريان التاجي عن طريق ربط قبالة السفينة مع عقدة معتمدة من الصعب من الناحية الفنية. بالإضافة إلى ذلك ، إعادة فتح عقدة لضخه متقطعة من الشريان التاجي خلال الملكية الفكرية دون أن تسبب صدمة جراحية يضيف تحديا إضافيا. وعلاوة على ذلك ، إذا لم يتم ربط عقدة قوية ضخه باستمرار ، وهو ما يكفي غير مقصودة نتيجة لانسداد الشريان التاجي للالمنقوصة تؤثر على النتائج. في الواقع ، وهذا يمكن أن يحدث بسهولة نظرا لحركة القلب النابض.

بناء على المشاكل المحتملة المرتبطة باستخدام نظام معقد انسداد الشريان التاجي ، اعتمدنا نموذجا سبق نشرها من القلب المزمن على أساس نظام الوزن معلقة لفترات متقطعة انسداد الشريان التاجي خلال 39 IP. في الواقع ، ويمكن بالتالي انسداد الشريان التاجي يمكن أن يتحقق دون الاضطرار الى انسداد الشرايين التاجية بواسطة عقدة. وعلاوة على ذلك ، يمكن ضخه للسفينة يتحقق بسهولة من خلال دعم الأوزان المعلقة التي هي في الترجمة عن بعد من أنسجة القلب.

نحن اختبار هذا النظام بشكل منهجي ، بما في ذلك الاختلاف من الأوقات نقص التروية وضخه ، أفواج شروط مسبقة ، ودرجة حرارة الجسم والخلفيات الوراثية 39. بالإضافة إلى احتشاء تلطيخ ، نحن اختبار القلب تروبونين الأول (cTnI) كعلامة من احتشاء عضلة القلب في هذا النموذج. في الواقع ، ومستويات البلازما من cTnI ترتبط مع أحجام احتشاء (R2 = 0.8). وأخيرا ، فإننا يمكن أن تظهر في العديد من الدراسات أن هذه الطريقة تؤدي أحجام احتشاء استنساخه للغاية خلال IP الفئران واحتشاء عضلة القلب 6 ، 8 ، 30 ، 40 ، 41. لذلك ، قد تكون هذه التقنية مفيدة للباحثين الذين يسعون الى المشاركة في الآليات الجزيئية التي cardioprotection IP باستخدام نهج الجينية في الفئران مع حذف الجينات المستهدفة. قد مزيد من الدراسات حول الملكية الفكرية القلب باستخدام الفئران المعدلة وراثيا النظر في هذا الأسلوب.

Protocol

ملاحظات عامة :

يجب أن يتم تنفيذ جميع العمليات تحت المجهر تستقيم تشريح (أوليمبوس ، مع مشاركة SZX10 الساعد Z - المحور مع حامل StandBoom STU2) وباستخدام مخثار الجراحية. التهوية أمر حاسم بالنسبة لهذا الإجراء وبالتالي يجب أن تنفق مبلغا معينا من الوقت على جهاز التنفس الصناعي واختيار الأسلوب الأمثل للتهوية. وينبغي أن درجة الحرارة وضغط الدم والتخدير تكون مستقرة طوال الوقت.

1. التخدير ، ورصد التنبيب

  1. استخدام C57BL / 6 الفئران التي لا تقل عن 10 أسابيع من العمر. حمل الصوديوم باستخدام التخدير بنتوباربيتال بجرعة 70 ملغم / كغم وزن الجسم الحفاظ على الملكية الفكرية مع تخدير ما يقرب من 10 كجم / ملغ / ح بنتوباربيتال الصوديوم. كن حذرا مع زيادة الجرعة لأن هذا قد أقل بكثير من ضغط الدم. إعادة الجرعات من بنتوباربيتال -- حتى بعد ساعة ، يمكن أن تؤدي إلى زيادات حادة في مستويات البلازما. تستند إلى أدلة قوية بشأن isoflurane مجمع أمراض القلب كما نوصي استخدام "خامل" وراسخة في بنتوباربيتال نموذجا لنقص تروية عضلة القلب 46-56.
  2. الفئران مكان على طاولة التحكم في درجة حرارته ساخنة (RT ، Effenberg ، ميونيخ ، ألمانيا) مع التحقيق الذي تجريه ترمومتر المستقيم المرفقة إلى وحدة تحكم ردود فعل الحرارية للحفاظ على درجة حرارة الجسم عند 37 درجة مئوية.
  3. الفئران بعد تحريض التخدير الآمنة في موقف ضعيف ، مع الأطراف العليا والسفلى التي تعلق على الطاولة باستخدام الشريط وتثبيتها الدرز إلى الكعبين. تفعل الشيء نفسه بالنسبة للرئيس باستخدام الأسنان. والزجرية كافية هو أمر هام لنجاح التنبيب وجراحة تسيطر عليها بشكل جيد. قبل الجراحة ، وغطاء الماوس مع الزيوت المعدنية للحد من خطر الحساسية الشعر الماوس.
  4. فضح القصبة الهوائية جراحيا وإجراء التنبيب الرغامي استخدام حقنة عادية bluntpolyethylene (Insyte 22g ، بيكتون ديكنسون ، الولايات المتحدة). سيكون لديك لفظة الإبرة لتكون قادرة على استخدامه بمثابة مرود.
  5. سحب اللسان خارج باستخدام زوج من ملقط ثم ادفع برفق في زاوية 15 درجة في اتجاه الجسم. حتى بعد التعرض للالقصبة الهوائية واستخدام المجهر ، وهذا قد يتطلب بعض التدريب. أن تدرك أن الضرر صغيرة من القصبة الهوائية قد يؤدي إلى عدم القدرة على تهوية الحيوان في جميع أنحاء خياطة. وبالتالي ، إذا واجهت مشاكل التنفس التحقق من القصبة الهوائية للثقوب صغيرة.
  6. تأكيد تصحيح وضع أنبوب عن طريق التصور المباشر للقنية داخل القصبة الهوائية التي سبق تعرضها فوق جؤجؤ.
  7. توصيل أنبوب لجهاز التنفس الصناعي. نوصي تقنية الضغط التهوية التي تسيطر عليها باستخدام هيدروليك 900 C من شركة سيمنز (DRE البيطري ، الولايات المتحدة). وعندئذ تكون التهوية باستخدام الحيوانات الضغط الشهيقي الذروة من 10 تردد ، من 110 ميليبار الأنفاس / دقيقة وتحت ضغط نهاية الزفير الإيجابي 3-5 مع ميليبار FIO 2 = 0.4. قد تحتاج الى بعض التعديلات الإعدادات التي يمكن تحقيقها بسهولة عن طريق التحقق من الرئتين أثناء جراحة الصدر المفتوحة. تأكد من أن لا الرئتين انهارت أو الممتدة. على الرغم من حقيقة أن يتم بناء 900 C هيدروليك والتنفس الصناعي للبشر ، واستخدامه في جهاز التنفس الصناعي الإعداد الضغط تسيطر اعمالا جيدة للتهوية من الفئران.
  8. إجراء تحليل غازات الدم للتأكد من تبادل الغاز الطبيعي (الضغط الجزئي للأوكسجين ، باو 2 من 115 ± 15 مم زئبقي ، والضغط الجزئي لثاني أكسيد الكربون ، وباكو 2 من 38 ± 6 مم زئبق) بعد 4 الى 6 ساعات من الوقت التهوية باستخدام I - STAT النظام (ابوت ، الولايات المتحدة).
  9. رصد معدل ضربات القلب مع تخطيط القلب (مثل هيوليت باكارد ، Böblingen ، ألمانيا). تأكد من أن معدل ضربات القلب لا يقل عن 450. إذا كان الماوس تطور bradicardia التحقق من درجة الحرارة وجرعة مخدر / الاعتقال. Xylacin / Ketamin التخدير يؤدي الى قلب القلب من 250 / دقيقة ، وبالتالي لا يوصى.
  10. تطبيق استبدال السوائل المناسبة. ضخ المياه المالحة طبيعية مع 0.1 ينبغي أن يقوم مل / ساعة عن طريق قسطرة الشرايين أو الأوردة قبل ظهور نقص التروية. أيضا ، يمكن إعطاء بلعة المالحة من 500 ميكرولتر IP قبل الجراحة. Thoractomy يمكن إحداث هبوط في ضغط الدم قد تتطلب وبولي المالحة إضافية. بعد نقص التروية ، قد بمعدل ضخ ما يصل إلى 1 مل / ساعة تكون ضرورية للحفاظ على ضغط الدم الشرياني يعني فوق 60 ملم زئبقي ولضمان ضخه الحرجة الكافية لتلطيخ احتشاء باستخدام TTC.
  11. مكان الشريان السباتي (PE10 ، تلميح OD (مم / ") ، مستدق> 0.024 mm/.011") لتسجيل المستمر لضغط الدم. وسوف تعرض الشريان السباتي عن طريق تشريح حادة في عضلات رغامى. عقب التعرض لمزيد من الحذر وتجنب أي صدمة الأنسجة (خاص للعصب المبهم) ، يتم إدخال القسطرة في الإناء باستخدام اثنين من الغرز وملقاط صغير. نعلق الذراع إلى الهيئة قبل البدء في تشريح الشريان. وسوف يعرض هذا أطول قطعة من الشريان. عقدة نهاية جدا من الجزء القريب من الشريان السباتي. نعلق أكبر المشبك الى نهاية للخياطةالحصول على التوتر. مكان آخر الدرز حول تشريح الشريان والشريان حتى نهاية البعيدة جدا. هنا ، وضع المشبك الصغيرة. استخدام مقص لقطع صغيرة فتحة صغيرة في شريان قطري. عقد فتح مع ملقط غرامة (دومون ، WPI) ودفع القسطرة الحجم المناسب بيديك / ملقط. جعل عقدة مع خياطة بلدكم الثاني وتأمين الشريان. تخفيف المشبك ، ودفع المزيد من القسطرة. تأمين القسطرة مع عقدة عدة والشريط.

2. تقنية انسداد الشريان التاجي

  1. تشريح الجلد وفضح جدار الصدر غادر باستخدام تقنية تشريح حادة.
  2. قطع العضلات الدروع التخصصات والقصر لفضح جدار الصدر مع الكي. عن طريق سحب الصدرية الكبرى ، وقطرات الرئة ، وبالتالي يمكن إدراج ملقط من الوحدة الكهربائية ، وملم 1-3 أعلاه الرئة ، وعبور خط أفقي ينبغي أن مزقت متخثر.
  3. باستخدام مقص اضعافها ، وقطع جدار الصدر. ثم يتم استخدام الدبابيس تعديل السلامة ، حيث يتم إزالة لوحة الصيد وعازمة نهاية حادة ، للحفاظ على فتح القفص الصدري.
  4. لتسهيل وضع النهائي للخياطة ، يتخثر وقطع جدار الصدر على طول الحاجز نحو الجانب الأيسر السفلي من القفص الصدري.
  5. كشف تشريح القلب بيريكارديوم. لتجنب حركات حجابي إزالة وقطع العصب الحجابي.
  6. استخدام عصا صغيرة من القطن مبللة مع ملقط وتحويل القلب إلى الجانب الأيمن. تحديد الشريان التاجي الأيسر (LCA) وتأكد من أن لا تضخم الرئتين جدا. تحسين فتح القفص الصدري لديها عقد تأمين للقلب عند وضع خياطة. ربما إذا كان ضغط الدم منخفض جدا أن يكون معقدا في تحديد الهوية. قد بولي إضافية من المياه المالحة تحسين تحديد LCA. والرابطة هي كناية عن سفينة أحمر عبور القلب أفقيا (على النقيض من عروق العائدين). في بعض الأحيان ، ينظر الى LCA أفضل بدون المجهر. لا تستخدم خفيفة جدا من ذلك بكثير. وهذا يمكن أن يؤدي إلى قطع انعكاسات صنع المستحيل التصور.
  7. حالما يتم التعرف بصريا LCA ، ضع الخيط النايلون 8.0 (Prolene ، Ethicon ، Notiefies ، الولايات المتحدة) في جميع أنحاء الرابطة. لغرض المخصص إطباق متقطعة ، اعتمدنا نموذج مزمن في عضلة القلب باستخدام نظام 42 الوزن شنقا.
  8. الخيط الخيط من خلال قطعة صغيرة من الأنبوب البلاستيك (PE - 10 أنابيب) مع حواف حادة وإرفاق اثنين الأوزان الصغيرة (1G ، مثل استخدام أنابيب إيبندورف مملوء بالماء) إلى كل نهاية. مع الأوزان معلقة بحرية فوق قضيب ، يجب أن يكون على الفور LCA المغطي. بالإضافة إلى ذلك ، عندما يخلص الوزن ، ويتم إنهاء LCA انسداد في آن واحد. ينبغي تأكيد نجاح LCA إطباق قبل تغيير لون الفوري للسفينة من الضوء الأحمر إلى البنفسجي الداكن ، وتغيير اللون من عضلة القلب التي قدمتها السفينة (من الأحمر إلى الأبيض الساطع) ووجود ST - ترتفع في تخطيط القلب. خلال ضخه ، والتغيرات في لون يختفي على الفور. الحفاظ على القلب الرطب مع 37 درجة مئوية ، غارقة المالحة ، قطعة من القطن في جميع أنحاء ماصة (انظر أيضا الشكل 1).
  9. اختارت وقتك وفقا الإسكيمية الفائدة الأساسي الخاص بك. في الواقع ، لإجراء دراسات للآثار أمراض القلب للملكية الفكرية ، سيكون من المثالي لاستخدام الوقت الإسكيمية المرتبطة في أحجام احتشاء ما يقرب من 30 إلى 40 ٪ من AAR. وبالتالي ، سيكون من الممكن لإظهار التغيرات في كلا الاتجاهين ، والأحجام الصغيرة مثل احتشاء القلب أو الملكية الفكرية مع أحجام أكبر من احتشاء مع العلاجية التجريبية أو حذف مورثة محددة. بالإضافة إلى ذلك ، مع حجم الفئران احتشاء أقل من 50 ٪ البقاء على قيد الحياة عادة التجربة ، في حين غالبا ما تكون أحجام احتشاء من 60 إلى 80 ٪ لم ينج والحيوانات تموت قبل وقت ضخه كاملة. باستخدام نموذج لدينا 10 دقيقة من نقص تروية عضلة القلب تليها 2 ساعة من نتيجة ضخه في حجم احتشاء قدره 3.5 ± 1.3 ٪ من AAR. في المقابل ، الوقت الإسكيمية النتائج 60 دقيقة في حجم احتشاء يعني من 42 ± 5.2 ٪ من AAR (ع <0.01) 39. وهكذا ، نستطيع أن نعتبره 60 دقيقة من نقص تروية ومثالية لدراسة التغيرات في كلا الاتجاهين. ومع ذلك ، قد يكون لديك لضبط الوقت الإسكيمية الجين في الفئران ذات أهداف محددة وقطع النمط الظاهري.
  10. اختار الوقت ضخه الحق. الوقت ضخه من الأهمية بمكان لتلطيخ TTC. يتم تقليل صبغ اللون ليعجل الطوب الأحمر اللون بواسطة dehydrogenases في وجود انزيم NADH المشترك. الخلايا تموت تفقد قدرتها على الاحتفاظ NADH ، وبالتالي هي كما هو مبين في المناطق شاحب الحمراء قابلة للحياة عضلة القلب الملون. احتشاء ترسيم حجم TTC التي تم غسلها يتطلب أن NADH خارجا تماما من منطقة نخرية. ومع ذلك ، إذا لم يتم ضخه طويلة بما فيه الكفاية ، قد احتشاء ترسيم الحجم بواسطة تلطيخ TTC يؤدي إلى التقليل من حجم احتشاء الفعلية 43. في أيدينا ، بعد وقت من نقص التروية 60 دقيقة ، وقياس حجم احتشاء زادت من 11.5 ± 4.5 ٪ بعد 30 دقيقة إلى 42.2 ± 5.1 ٪بعد 120 دقيقة. ويمكن الكشف عن أية زيادة في حجم احتشاء مع أوقات أطول ضخه (240 دقيقة) 39. وبالتالي ، فإننا نوصي مدة 2 ساعة ضخه الذي يبدو معقولا أيضا في سياق determination.If انزيم القلب عليك أن تنظر الإسكيمية شروط مسبقة ، ونحن نوصي 4 دورات للملكية الفكرية (5 الإسكيمية دقيقة ، 5 ضخه دقيقة) ، ثم يعقب ذلك الوقت الإسكيمية من 60 دقيقة ووقت ضخه من 2 ساعة. في ظل هذه الظروف ، كان مرتبطا مع انخفاض IP 3.2 أضعاف حجم احتشاء من 42.2 ± 5.1 ٪ إلى 13.3 ± 3.3 ٪ من AAR 39. ومع ذلك ، بسبب نظام الوزن معلقة ، يمكن بسهولة أفواج مختلفة تطبق شروط مسبقة.

3. تحديد المنطقة في خطر (AAR) ، واحتشاء عضلة القلب الحجم

بعد تحريض احتشاء عضلة القلب (مع أو بدون IP) ، هو perfused المنطقة من قبل الرابطة (منطقة معرضة للخطر ، AAR) وحجم احتشاء سيتحدد نفسها باستخدام تقنية تلوين. في وقت لاحق ، وسوف يتم احتساب احتشاء ثم كنسبة مئوية من احتشاء عضلة القلب مقارنة AAR. للقيام بذلك ، يتم استخدام تقنية تلوين الموصوفة سابقا مزدوجة مع كلوريد ايفان الازرق وtriphenyltetrazolium (TTC) 44.

  1. تحديد AAR عن طريق الحقن الوراء صبغة ايفان بنسبة 1 ٪ في الشريان الأورطي الأزرق بينما المغطي في الرابطة. بدلا من ذلك ، إذا كان السباتي القسطرة في مكانها ، واستخدام هذا الطريق للحقن زرقاء ايفانز. سوف ايفانز الأزرق وصمة عار جميع أنسجة عضلة القلب الأزرق ، باستثناء AAR. فمن الأهمية بمكان لهذه الخطوة لتجنب فقاعات الهواء داخل القسطرة ، حيث سيتم حقنها في الدورة الدموية التاجية ومنع تلطيخ ايفان الازرق. قبل تلوين الزرقاء ايفانز قد تحتاج لجمع الدم لقياس انزيم القلب. بالإضافة إلى ذلك ، من المستحسن إزالة الدم عن طريق حقن 5 مل من المياه المالحة عن طريق القسطرة أو الأبهر السباتي.
  2. استئصال القلب ويغسل في المياه المالحة الباردة الجليد 0.9 ٪
  3. تضمين الى agarose 2 ٪. لا تستخدم agarose الساخنة لأن هذا سوف يمنع تلطيخ ناجحة.
  4. بعد 30 دقيقة على +4 درجة مئوية (أو 15 دقيقة -20 درجة مئوية) ، وقطع القلب إلى شرائح من 1 ملم باستخدام مصفوفة القلب أو مشراح. لو كنت مكان القلب في الفريزر تجنب تجميد الجافة والتي سوف تؤدي إلى قلوب غير ملون.
  5. احتضان شرائح مع TTC 1 ٪ عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقيقة باستخدام قبعة زرقاء 15 مل في حمام الماء. هذا سوف يسمح ترسيم المنطقة باعتبارها منطقة احتشاء أبيض ، بينما البقع الحمراء قابلة للحياة الأنسجة.
  6. يحملق شرائح ملطخة fomaldehyde 10 ٪ خلال الليل. بذلك ، هو أفضل يتناقض المنطقة احتشاء تحسين نوعية الصور.
  7. تحديد المنطقة في خطر (AAR) وحجم احتشاء planimetry عبر استخدام صورة البرامج NIH 1.0 45.
  8. حساب احتشاء عضلة القلب في المئة من من المنطقة للخطر.

4. القلب انزيم القياس

بسبب القيود المرتبطة تلطيخ TTC نوصي قراءات إضافية بالنسبة لاحتشاء عضلة القلب شدة عزم القلب تروبونين الأول (cTnI) المستويات في مصل الفئران. وسيتم الحصول على الدم من الوريد البابي ومستويات مصل cTnI تتحدد بعد ذلك مع مقايسة cTnI السريع الكمي (الحياة التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي ، غرب تشيستر ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة).

5. ممثل النتائج :

figure-protocol-13226
الشكل 1 (أ) النموذجي للملكية الفكرية القلب باستخدام نظام شنقا الوزن من انسداد الشريان التاجي. هذه التقنية لا تتطلب عقدة لانسداد الشريان التاجي. (B ، C) الإعداد الجراحية. (D) صورة قلب الفئران مع الشريان التاجي الأيسر (LCA والسهام) بعد انسداد. الهوية البصرية للLCA ضروري لربط شروط مسبقة والدماغية لدى الفئران. يتم وضع الخيط النايلون 8،0 ملم في جميع أنحاء 1-2 LCA تحت الأذن اليسرى. غير مترابطة وخياطة من خلال أنبوب بلاستيكي صغير (*). ويرد نهاية كل غرزة لوزن صغير (1G) ويوضع على قضبان الدرز على كلا الجانبين. (E) تحديد AAR بعد انسداد LCA الوراء وحقن صبغة ايفان الازرق في الشريان الأورطي. ويبقى AAR غير ملوثين بينما بقية عضلة القلب هو اللون الأزرق. بعد حضانة مع الأنسجة AAR TTC ، ومنطقة ملطخة احتشاء أبيض ، أحمر ، بينما قابلة للحياة الملون الأنسجة.

Discussion

هذه الدراسة توضح أسلوب الرواية على أداء الملكية الفكرية في موديلا لأحد الفئران سليمة باستخدام نظام شنقا الوزن وبالتالي تجنب انسداد الشريان التاجي بواسطة عقدة. في الواقع ، فإن هذه الدراسة تبين أحجام استنساخه احتشاء القلب العالية وحماية الملكية الفكرية من قبل ، وبالتالي تقليل التفاوت المقترنة عقدة المستندة إلى النماذج انسداد الشريان التاجي. يمكن للمحققين الذين يعتبرون دراسة cardioprotection الملكية الفكرية في الفئران عن طريق الاستفادة من هذا النموذج.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

وأيدت الدراسات الحالية القومي للقلب والرئة والدم المعهد المنحة R01 - HL0921 ، R01 - R01 - DK083385 وHL098294 Eltzschig لهونج كونج ، و1K08HL102267 - 01 إلى Eckle T. ، ومؤسسة للتعليم التخدير والمنح لبحوث ت. Eckle وهونج كونج Eltzschig ، وجمعية القلب الأميركية منحة للEckle T. Eltzschig وهونج كونج وجمعية الألمانية للبحوث زمالة أبحاث (DFG) لKoeppen م. نشكر شيلي Eltzschig للعمل الفني.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Sodium Pentobarbital (Fatal Plus)Vortech Pharmaceutical Ls, LtdV.P.L. 93724mg/mL in saline
TTCSigma-Aldrich17779 Fluka1.5 % in PBS
Evans BlueSigma-AldrichE212910g in 1 L PBS
Insyte 22 GBD Biosciencesn/a
Suture, silk 4.0Harvard Apparatus517698
Suture, Prolene 8.0Ethicon Inc.M8739reusable
Heart MatrixZivic Instruments# HSMS001
Siemens 900 CDRE Veterinary# 336refurbished
dissecting microscope (SZX10 )Olympus Corporationn/aconsider generous working distance
Heating TableRt, Effenberger, Germanyn/aonly and single provider
Blood pressure deviceCyber Sense, IncBPM02
I STATAbbott Laboratoriesn/a

References

  1. Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Laucher, S., Thompson, L. F., Eltzschig, H. K. A2B adenosine receptor dampens hypoxia-induced vascular leak. Blood. 111, 2024-2035 (2008).
  2. Eckle, T., Fullbier, L., Grenz, A., Eltzschig, H. K. Usefulness of pressure-controlled ventilation at high inspiratory pressures to induce acute lung injury in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, L718-L724 (2008).
  3. Eckle, T., Fullbier, L., Wehrmann, M., Khoury, J., Mittelbronn, M., Ibla, J., Rosenberger, P., Eltzschig, H. K. Identification of ectonucleotidases CD39 and CD73 in innate protection during acute lung injury. J Immunol. 178, 8127-8137 (2007).
  4. Eckle, T., Grenz, A., Laucher, S., Eltzschig, H. K. A2B adenosine receptor signaling attenuates acute lung injury by enhancing alveolar fluid clearance in mice. J Clin Invest. 118, 3301-3315 (2008).
  5. Eckle, T., Koeppen, M., Eltzschig, H. K. Role of extracellular adenosine in acute lung injury. Physiology (Bethesda). 24, 298-306 (2009).
  6. Eckle, T., Kohler, D., Lehmann, R., Kasmi, K. E. l, Eltzschig, H. K. Hypoxia-inducible factor-1 is central to cardioprotection: a new paradigm for ischemic preconditioning. Circulation. 118, 166-175 (2008).
  7. Eckle, T., Kohler, D., Lehmann, R., El Kasmi, K. C., Eltzschig, H. K. Hypoxia-Inducible Factor-1 Is Central to Cardioprotection: A New Paradigm for Ischemic Preconditioning. Circulation. 118, 166-175 (2008).
  8. Eckle, T., Krahn, T., Grenz, A., Kohler, D., Mittelbronn, M., Ledent, C., Jacobson, M. A., Osswald, H., Thompson, L. F., Unertl, K., Eltzschig, H. K. Cardioprotection by ecto-5'-nucleotidase (CD73) and A2B adenosine receptors. Circulation. 115, 1581-1590 (2007).
  9. Eltzschig, H. K. Adenosine: an old drug newly discovered. Anesthesiology. 111, 904-915 (2009).
  10. Eltzschig, H. K., Abdulla, P., Hoffman, E., Hamilton, K. E., Daniels, D., Schonfeld, C., Loffler, M., Reyes, G., Duszenko, M., Karhausen, J. HIF-1-dependent repression of equilibrative nucleoside transporter (ENT) in hypoxia. J. Exp. Med. 202, 1493-1505 (2005).
  11. Eltzschig, H. K., Eckle, T., Mager, A., Kuper, N., Karcher, C., Weissmuller, T., Boengler, K., Schulz, R., Robson, S. C., Colgan, S. P. ATP release from activated neutrophils occurs via connexin 43 and modulates adenosine-dependent endothelial cell function. Circ Res. 99, 1100-1108 (2006).
  12. Eltzschig, H. K., Faigle, M., Knapp, S., Karhausen, J., Ibla, J., Rosenberger, P., Odegard, K. C., Laussen, P. C., Thompson, L. F., Colgan, S. P. Endothelial catabolism of extracellular adenosine during hypoxia: the role of surface adenosine deaminase and CD26. Blood. 108, 1602-1610 (2006).
  13. Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Furuta, G. T., Leonard, M. O., Jacobson, K. A., Enjyoji, K., Robson, S. C., Colgan, S. P. Coordinated adenine nucleotide phosphohydrolysis and nucleoside signaling in posthypoxic endothelium: role of ectonucleotidases and adenosine A2B receptors. J Exp Med. 198, 783-796 (2003).
  14. Eltzschig, H. K., Kohler, D., Eckle, T., Kong, T., Robson, S. C., Colgan, S. P. Central role of Sp1-regulated CD39 in hypoxia/ischemia protection. Blood. 113, 224-232 (2009).
  15. Eltzschig, H. K., Macmanus, C. F., Colgan, S. P. Neutrophils as Sources of Extracellular Nucleotides: Functional Consequences at the Vascular Interface. Trends Cardiovasc Med. 18, 103-107 (2008).
  16. Eltzschig, H. K., Rivera-Nieves, J., Colgan, S. P. Targeting the A2B adenosine receptor during gastrointestinal ischemia and inflammation. Expert Opin Ther Targets. 13, 1267-1277 (2009).
  17. Eltzschig, H. K., Thompson, L. F., Karhausen, J., Cotta, R. J., Ibla, J. C., Robson, S. C., Colgan, S. P. Endogenous adenosine produced during hypoxia attenuates neutrophil accumulation: coordination by extracellular nucleotide metabolism. Blood. 104, 3986-3992 (2004).
  18. Eltzschig, H. K., Weissmuller, T., Mager, A., Eckle, T. Nucleotide metabolism and cell-cell interactions. Methods Mol Biol. 341, 73-87 (2006).
  19. Frick, J. S., MacManus, C. F., Scully, M., Glover, L. E., Eltzschig, H. K., Colgan, S. P. Contribution of adenosine A2B receptors to inflammatory parameters of experimental colitis. J Immunol. 182, 4957-4964 (2009).
  20. Grenz, A., Osswald, H., Eckle, T., Yang, D., Zhang, H., Tran, Z. V., Klingel, K., Ravid, K., Eltzschig, H. K. The Reno-Vascular A2B Adenosine Receptor Protects the Kidney from Ischemia. PLoS Medicine. 5, e137-e137 (2008).
  21. Grenz, A., Zhang, H., Eckle, T., Mittelbronn, M., Wehrmann, M., Kohle, C., Kloor, D., Thompson, L. F., Osswald, H., Eltzschig, H. K. Protective role of ecto-5'-nucleotidase (CD73) in renal ischemia. J Am Soc Nephrol. 18, 833-845 (2007).
  22. Grenz, A., Zhang, H., Hermes, M., Eckle, T., Klingel, K., Huang, D. Y., Muller, C. E., Robson, S. C., Osswald, H., Eltzschig, H. K. Contribution of E-NTPDase1 (CD39) to renal protection from ischemia-reperfusion injury. FASEB. J21, 2863-2873 (2007).
  23. Grenz, A., Zhang, H., Weingart, J., von Wietersheim, S., Eckle, T., Schnermann, J. B., Kohle, C., Kloor, D., Gleiter, C. H., Vallon, V., Eltzschig, H. K., Osswald, H. Lack of effect of extracellular adenosine generation and signalling on renal erythropoietin secretion during hypoxia. Am J Physiol Renal Physiol. , (2007).
  24. Hart, M. L., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Robson, S. C., Eltzschig, H. K. SP1-dependent induction of CD39 facilitates hepatic ischemic preconditioning. J Immunol. 184, 4017-4024 (2010).
  25. Hart, M. L., Henn, M., Kohler, D., Kloor, D., Mittelbronn, M., Gorzolla, I. C., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. Role of extracellular nucleotide phosphohydrolysis in intestinal ischemia-reperfusion injury. FASEB. J22, 2784-2797 (2008).
  26. Hart, M. L., Jacobi, B., Schittenhelm, J., Henn, M., Eltzschig, H. K. Cutting Edge: A2B Adenosine receptor signaling provides potent protection during intestinal ischemia/reperfusion injury. J Immunol. 182, 3965-3968 (2009).
  27. Hart, M. L., Kohler, D., Eckle, T., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. Direct treatment of mouse or human blood with soluble 5'-nucleotidase inhibits platelet aggregation. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28, 1477-1483 (2008).
  28. Hart, M. L., Much, C., Gorzolla, I. C., Schittenhelm, J., Kloor, D., Stahl, G. L., Eltzschig, H. K. Extracellular adenosine production by ecto-5'-nucleotidase protects during murine hepatic ischemic preconditioning. Gastroenterology. 135, 1739-1750 (2008).
  29. Koeppen, M., Eckle, T., Eltzschig, H. K. Selective deletion of the A1 adenosine receptor abolishes heart-rate slowing effects of intravascular adenosine in vivo. PLoS One. 4, e6784-e6784 (2009).
  30. Kohler, D., Eckle, T., Faigle, M., Grenz, A., Mittelbronn, M., Laucher, S., Hart, M. L., Robson, S. C., Muller, C. E., Eltzschig, H. K. CD39/ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 provides myocardial protection during cardiac ischemia/reperfusion injury. Circulation. 116, 1784-1794 (2007).
  31. Kong, T., Westerman, K. A., Faigle, M., Eltzschig, H. K., Colgan, S. P. HIF-dependent induction of adenosine A2B receptor in hypoxia. Faseb J. 20, 2242-2250 (2006).
  32. Loffler, M., Morote-Garcia, J. C., Eltzschig, S. A., Coe, I. R., Eltzschig, H. K. Physiological roles of vascular nucleoside transporters. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 27, 1004-1013 (2007).
  33. Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Kuhlicke, J., Eltzschig, H. K. HIF-1-dependent repression of adenosine kinase attenuates hypoxia-induced vascular leak. Blood. 111, 5571-5580 (2008).
  34. Morote-Garcia, J. C., Rosenberger, P., Nivillac, N. M., Coe, I. R., Eltzschig, H. K. Hypoxia-inducible factor-dependent repression of equilibrative nucleoside transporter 2 attenuates mucosal inflammation during intestinal hypoxia. Gastroenterology. 136, 607-618 (2009).
  35. Reutershan, J., Vollmer, I., Stark, S., Wagner, R., Ngamsri, K. C., Eltzschig, H. K. Adenosine and inflammation: CD39 and CD73 are critical mediators in LPS-induced PMN trafficking into the lungs. FASEB J. 23, 473-482 (2009).
  36. Schingnitz, U., Hartmann, K., Macmanus, C. F., Eckle, T., Zug, S., Colgan, S. P., Eltzschig, H. K. Signaling through the A2B adenosine receptor dampens endotoxin-induced acute lung injury. J Immunol. 184, 5271-5279 (2010).
  37. Synnestvedt, K., Furuta, G. T., Comerford, K. M., Louis, N., Karhausen, J., Eltzschig, H. K., Hansen, K. R., Thompson, L. F., Colgan, S. P. Ecto-5'-nucleotidase (CD73) regulation by hypoxia-inducible factor-1 mediates permeability changes in intestinal epithelia. J Clin Invest. 110, 993-1002 (2002).
  38. Thompson, L. F., Eltzschig, H. K., Ibla, J. C., Van De Wiele, C. J., Resta, R., Morote-Garcia, J. C., Colgan, S. P. Crucial role for ecto-5'-nucleotidase (CD73) in vascular leakage during hypoxia. J. Exp. Med. 200, 1395-1405 (2004).
  39. Eckle, T., Grenz, A., Kohler, D., Redel, A., Falk, M., Rolauffs, B., Osswald, H., Kehl, F. Systematic evaluation of a novel model for cardiac ischemic preconditioning in mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 291, 2533-2540 (2006).
  40. Redel, A., Jazbutyte, V., Smul, T. M., Lange, M., Eckle, T., Eltzschig, H., Roewer, N., Kehl, F. Impact of ischemia and reperfusion times on myocardial infarct size in mice in vivo. Exp Biol Med (Maywood). 233, 84-93 (2008).
  41. Warth, A., Eckle, T., Kohler, D., Faigle, M., Zug, S., Klingel, K., Eltzschig, H. K., Wolburg, H. Upregulation of the water channel aquaporin-4 as a potential cause of postischemic cell swelling in a murine model of myocardial infarction. Cardiology. 107, 402-410 (2007).
  42. Dewald, O., Frangogiannis, N. G., Zoerlein, M. P., Duerr, G. D., Taffet, G., Michael, L. H., Welz, A., Entman, M. L. A murine model of ischemic cardiomyopathy induced by repetitive ischemia and reperfusion. Thorac Cardiovasc Surg. 52, 305-311 (2004).
  43. Ito, W. D., Schaarschmidt, S., Klask, R., Hansen, S., Schafer, H. J., Mathey, D., Bhakdi, S. Infarct size measurement by triphenyltetrazolium chloride staining versus in vivo injection of propidium iodide. J Mol Cell Cardiol. 29, 2169-2175 (1997).
  44. Schwanke, U., Konietzka, I., Duschin, A., Li, X., Schulz, R., &, G. H. eusch No ischemic preconditioning in heterozygous connexin43-deficient mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, 1740-1742 (2002).
  45. Fisher, S. G., Marber, M. S. An in vivo model of ischaemia-reperfusion injury and ischaemic preconditioning in the mouse heart. J Pharmacol Toxicol Methods. 48, 161-169 (2002).
  46. Bickler, P. E., Zhan, X., Fahlman, C. S. Isoflurane preconditions hippocampal neurons against oxygen-glucose deprivation: role of intracellular Ca2+ and mitogen-activated protein kinase signaling. Anesthesiology. 103, 532-539 (2005).
  47. Chiari, P., Piriou, V., Hadour, G., Rodriguez, C., Loufouat, J. Preservation of ischemia and isoflurane-induced preconditioning after brain death in rabbit hearts. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 283, 1769-1774 (2002).
  48. Ebel, D., Mullenheim, J., Sudkamp, H., Bohlen, T., Ferrari, J. Role of tyrosine kinase in desflurane- Induced preconditioning. Anesthesiology. 100, 555-561 (2004).
  49. Hanouz, J. L., Yvon, A., Massetti, M., Lepage, O., Babatasi, G. Mechanisms of desflurane-induced preconditioning in isolated human right atria in vitro. Anesthesiology. 97, 33-41 (2002).
  50. Kersten, J. R., Schmeling, T. J., Pagel, P. S., Gross, G. J., Warltier, D. C. Isoflurane mimics ischemic preconditioning via activation of K(ATP) channels: reduction of myocardial infarct size with an acute memory phase. Anesthesiology. 87, 361-370 (1997).
  51. Mullenheim, J., Ebel, D., Frassdorf, J., Preckel, B., Thamer, V. Isoflurane preconditions myocardium against infarction via release of free radicals. Anesthesiology. 96, 934-940 (2002).
  52. Redel, A., Stumpner, J., Tischer-Zeitz, T., Lange, M., Smul, T. M. Comparison of isoflurane-, sevoflurane-, and desflurane-induced pre- and postconditioning against myocardial infarction in mice in vivo. Exp Biol Med (Maywood). 234, 1186-1191 (2009).
  53. Toller, W. G., Kersten, J. R., Gross, E. R., Pagel, P. S., Warltier, D. C. Isoflurane preconditions myocardium against infarction via activation of inhibitory guanine nucleotide binding proteins. Anesthesiology. 92, 1400-1407 (2000).
  54. Weber, N. C., Toma, O., Awan, S., Frassdorf, J., Preckel, B. Effects of nitrous oxide on the rat heart in vivo: another inhalational anesthetic that preconditions the heart? Anesthesiology. 103, 1174-1182 (2005).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

50 Cardioprotection

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved