Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Ultrasonic vocalizations (USVs) in mice differ depending on age, sex, condition, and genetic background. Using two ultrasound emitters broadcasting simultaneously in different locations, this two-choice test can evaluate murine recognition and preference responses to different characteristics of USVs.

Abstract

Mice emit ultrasonic vocalizations (USVs) during a variety of conditions, such as pup isolation and adult social interactions. These USVs differ with age, sex, condition, and genetic background of the emitting animal. Although many studies have characterized these differences, whether receiver mice can discriminate among objectively different USVs and show preferences for particular sound traits remains to be elucidated. To determine whether mice can discriminate between different characteristics of USVs, a playback experiment was developed recently, in which preference responses of mice to two different USVs could be evaluated in the form of a place preference.

First, USVs from mice were recorded. Then, the recorded USVs were edited, trimmed accordingly, and exported as stereophonic sound files. Next, the USV amplitudes generated by the two ultrasound emitters used in the experiment were adjusted to the same sound pressure level. Nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitters were used to play the USVs back. Finally, to investigate the preference of subject mice to selected USVs, pairs of two differing USV signals were played back simultaneously in a two-choice test box. By repeatedly entering a defined zone near an ultrasound emitter and searching the wire mesh in front of the emitter, the mouse reveals its preference for one sound over another. This model allows comparing the attractiveness of the various features of mouse USVs, in various contexts.

Introduction

العديد من الحيوانات تستخدم الالفاظ للاتصالات ضمن النوع. في العضلة الماوس المصحف، نوع واحد من المهم الإشارة البلاغ الالفاظ بالموجات فوق الصوتية (USVs)، والتي لها ترددات أعلى من 20 كيلو هرتز. تعتبر USVs المنبعثة من الفئران مكون من الاعتراف الاجتماعي في بين الذكور والإناث 1-4، الإناث والإناث 1 و 5 و الذكور الذكور 1، 6 التفاعلات. وتنبعث USVs أيضا الجراء عندما يتم عزل أنها من والدتهم، مما يزيد من سلوكها-استرجاع الجرو، وبالتالي الجرو البقاء على قيد الحياة (7). على الرغم من أن العديد من التقارير وتحليلها وتصنيفها USVs الماوس 8، 9، والاستجابات السلوكية والآليات العصبية للحيوان تلقي تم توثيقها أقل 10، 11. وهذا الأخير هو ضروري لتوضيح الأهمية البيولوجية للخصائص مختلفة من USVs. للكشف عن هذه الآليات، وتجربة التشغيل هو وسيلة فعالة. وقد كشفت دراسات حديثة أن النساء التشغيلتنجذب الفئران لUSVs 12، وأنهم يفضلون USVs من الذكور تختلف عن آبائهم 13 و 14.

يشرح هذا المقال اختبار التشغيل المستخدمة لتقييم تفضيل USV في الفئران. وقد وضعت مربع اختبار الاختيار اثنين في اثنين من USVs مختلفة يمكن تشغيلها في وقت واحد في اثنين من مقصورات من الضميمة الاختبار، كما هو مبين في الشكل 1. وهذا النوع من مربع اختبار يمنع تلوث الصوت من خلال تقسيم منطقة الاختبار في ثلاث دوائر فرعية ، وذلك باستخدام الجدران الرصاص. توجد بواعث الموجات فوق الصوتية خارج كل غرفة. في الجدار الفاصل بين الغرف وبواعث الموجات فوق الصوتية ثقوب مغطاة سلكية. الفئران يمكن ان تتحرك بحرية في ثلاث غرف، وتظهر "البحث في شبكة" السلوك، كما لو أن الرد على USVs تشغيله عن طريق لبواعث الموجات فوق الصوتية. في هذا الاختبار، والفئران البقاء لفترات مدة مختلفة قريبة من واحد باعث الصوت أو أخرى. ويمكن تسجيل هذه المعلمات للحصول على measu حساسة إعادة تفضيل الصوت.

للعب USVs الوراء، nanocrystalline السيليكون الحرارية الصوتية بواعث (أي، "NC-سي باعث") كانت تستخدم في الدراسات السابقة 15-17. وتتكون هذه الأجهزة من سخان الكهربائي الأغشية الرقيقة، وطبقة السيليكون النانوية التي يسهل اختراقها، ورقاقة السيليكون واحدة البلورية. يتم تحويل ملف الصوت الرقمية إلى إشارة تناظرية ثم مرت القطب سخان. جهاز يحول الإشارات الحرارية التي تعتمد على الجهد مما أدى إلى ضغط الصوت كبير مع تشويه منخفضة. هذا الجهاز هي فريدة من نوعها في ذلك، على عكس المولدات الصوت المشتركة التي تعتمد على الاهتزازات الميكانيكية، فإنه يمكن إعادة إنتاج الصوت دون الحاجة إلى وجود الحجاب الحاجز. باعث يسلك مستوى ضغط الصوت مستقرا عند ترددات 20-160 كيلو هرتز (الشكل 2)، ويمكن أن تتكاثر USVs الفئران المسجلة رقميا بشكل دقيق جدا من حيث المدة، والتردد، ومستوى الصوت ضغط 15 و 18 و 19.

ve_content "> في تجربة تمثيلية هو مبين في الشكل (3)، وسمح C57BL / 6 (B6) إناث أن تختار بين BALB / ج (BALB) USVs الذكور والضوضاء الخلفية. وبالإضافة إلى ذلك، ويبين الشكل 4 اختيار الإناث B6 وBALB بين قراءات USV في وقت واحد من BALB وB6 الذكور، كما ورد في دراسة سابقة 14. خصائص USVs الذكور تختلف بين B6 وBALB سلالات 20. وكما يتضح من هذه النتائج، وجاذبية USVs يمكن تقييم لهذا البروتوكول، حيث يتم تسجيل الأصوات من شخص حي، تحليل سمعيا، ولعب إلى أشخاص آخرين.

Protocol

وقد وافق جميع الإجراءات من قبل لجنة الأخلاقيات من جامعة أزابو. أجريت جميع التجارب في غرفة عازلة للصوت.

1. إعداد الحيوانية

  1. الذكور للتسجيل
    1. الحصول على الفئران الذكور الناضجة جنسيا من ذوي الخبرة في التزاوج.
  2. الموضوعات الإناث
    1. الحصول على إناث الفئران البكر التي تم إيواء مع 2-5 تتزاحم في قفص (عادة 8-12 أسابيع من العمر).
    2. الحصول على مسحات مهبلية يوميا لتحديد مرحلة من دورة وداقية قبل الاختبار، وفقا لماكلين 21. ينبغي توخي الحذر للحد من التحفيز عن طريق المهبل لتجنب حمل كاذب.
    3. وصمة عار تلطخ مع بالغيمزا، وتحديد المرحلة من دورة وداقية على أساس وجود أو عدم وجود الكريات البيض، الخلايا الظهارية متقرن، والخلايا الظهارية الأنوية، وفقا لنيلسون 22.

2. الأجهزة (الشكل 1)

_content "> figure-protocol-1345
الشكل 1. تخطيطي لاختبار مربع وجهازين الاختيار. يمكن أن الفئران الوصول إلى غرف ألف وباء من خلال بوابات صغيرة تقع بينها وبين المنطقة المحايدة. يتم وضع مربع اختيار اثنين واثنين من بواعث الموجات فوق الصوتية على أرضية غرفة عازلة للصوت. علق الميكروفون داخل غرفة عازلة للصوت. اختصار: PC، كمبيوتر شخصي الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. للتسجيل
    1. توصيل مكثف ميكروفون بالموجات فوق الصوتية إلى جهاز الكمبيوتر باستخدام محول USB A / D.
    2. تعيين مستوى الربح من المحول A / D إلى "7".
    3. البيانات الصوتية قياسية في شكل ملفات 16 بت مع معدل أخذ العينات من 400 كيلو هرتز باستخدام برامج التقاط الصوت.
  2. للتشغيل
    1. توصيل D / A المحول إلى جهاز الكمبيوتر باستخدامواجهة USB.
    2. ربط اثنين من مكبرات الصوت إلى D / A تحويل من خلال المخفف. (يقدم الجهاز الأخير لمنع الحمل الزائد).
    3. توصيل باعث الموجات فوق الصوتية لكل مكبر للصوت.

3. USV تسجيل

  1. ضع الماوس الذكور في الصغيرة (17 × 10 × 11 سم) أو متوسطة الحجم (21 × 14 × 13 سم) قفص مع وجود ثقب 6 سم القطر في جدار وحفرة مغطاة 0.5 سم سلكية. عند استخدام قفص المتوسطة الحجم، وبناء قسم في المركز من القفص للحد من المنطقة.
  2. لا تستخدم الفراش في القفص لتجنب الضوضاء سرقة يمكن أن يلوث التسجيلات.
  3. وضع الميكروفون بجانب شبكة.
  4. بدء الرصد النطق بالموجات فوق الصوتية مع الإعداد تسجيل هو موضح في الخطوة 2.1.
  5. ضع الماوس أنثى ناضجة جنسيا في أي تلية الوداق أو هجوع الودق في قفص مع الماوس الذكور.
  6. USVs سجل ل3-5 دقيقة.

4. Tطبقا لتقديرات صندوق

  1. بناء مربع اختبار باستخدام لوحة الاكريليك (الشكل 1).
    ملاحظة: مربع اختبار (35 × 20، و× 20 سم ارتفاع) وينقسم في ثلاث مقصورات: منطقة محايدة (15 × 20 سم)، وغرف ألف وباء (20 × 10 سم، ولكل منهما). غرف A و B لكل واحد حفرة قطرها 4 سم التي يتم تغطيتها مع شبكة سلكية 0.5CM. توجد ثقوب وشبكات في نهاية كل الغرف A و B. جعل بوابات (5 × 5 سم لكل منهما) بين المنطقة المحايدة وغرف A و B.
  2. لمنع تسرب الصوت عزل كل باعث الموجات فوق الصوتية، باستثناء الجانب التي تواجه شبكة، وذلك باستخدام لوحات المطاط، وختم لهم إلى مربع حول محيط كل شبكة.
  3. الأختام مكان الصدارة على جانبي الجدار الفاصل بين الغرف A و B لعزل الصوت.

5. إعداد لتشغيل الصوت

  1. إنشاء تشغيل تأثيرات صوتية
    1. القبض على شريحة 20 ثانية من USV من الملف المسجل الرقمي باستخدام برامج تحرير الصوت.
    2. اختيار والتقاط الخلفية لاايسي (0.35 ثانية) من ملف شريحة ثانية USV 20. إنشاء خلفية ملف الضوضاء و 20 ثانية بتكرار الجزء الضوضاء.
    3. لتشغيل اثنين من ملفات الصوت في وقت واحد، تصديرها كملف صوت ستيريو واحد، مع ملف واحد ل"الأذن اليسار" وملف آخر ل"الأذن اليمنى."
    4. تصفية ملفات الصوت باستخدام بمثابة مرشح تمريرة عالية مع قطع من 40 كيلو هرتز.
    5. الحد من الضوضاء باستخدام أداة للحد من الضوضاء في مجال البرمجيات مرحلة ما بعد المعالجة. اختيار والتقاط جزء من الملف الذي لا يحتوي على USVs كما التشكيل الجانبي الحد من الضوضاء، وتشغيل والحد من الضوضاء مع مستوى 40.
  2. معايرة تشغيل تأثيرات صوتية
    1. تأكد من أن المسافة بين بواعث الموجات فوق الصوتية والميكروفون هو 10 سم.
    2. لمعايرة مستويات ضغط الصوت من بواعث الموجات فوق الصوتية، نفذ مراقبة بالموجات فوق الصوتية باستخدام التكوين هو موضح في الخطوة 2.1. قياس مستوى ضغط الصوت من الميكروفون في ديسيبل (ديسيبل).
    3. باليودنانوغرام المخفف ومكبرات الصوت، وضبط حجم USVs الناتجة عن بواعث الموجات فوق الصوتية لنفس مستوى ضغط الصوت كما USVs الذكور المسجلة في الخطوة 3.
    4. عند استخدام اثنين من بواعث الموجات فوق الصوتية وملف صوتي يتألف من USVs والضوضاء الخلفية، تأكد من أن بواعث الموجات فوق الصوتية اثنين يحمل نفس مستوى ضغط الصوت باستخدام الصوت المعايرة (على سبيل المثال، لهجة نقية 75 كيلو هرتز) قبل إجراء الاختبار السلوكي.
    5. عندما استنساخ ملف الصوت يتكون من اثنين من تيارات USVs، وضبط اثنين من إنشاء مستويات ضغط الصوت إلى المستوى نفسه، قبل إجراء الاختبار.

6. اختبار اثنين الاختيار

  1. وضع بواعث الموجات فوق الصوتية وراء تنسجم من مربع اختبار.
  2. إغلاق أبواب الغرف A و B مع لوحة اكريليك، وروض موضوع الإناث إلى المنطقة المحايدة لمدة 30 دقيقة. تغطية مربع مع مجلس الاكريليك لتجنب أن الفأر يمكن الهروب.
  3. بدء تسجيل الفيديو باستخدام CCD كاميرا محمولة فوق مربع. الكاميرا (لا يظهر في الشكل رقم 1) تغطي مساحة جميع المقصورات الثلاث.
  4. إزالة البوابة وغطاء مقوى والسماح للإناث لاستكشاف بحرية مربع اختبار، بما في ذلك مناطق الصوت.
  5. مرة واحدة وقد حققت الأنثى على حد سواء تنسجم، وعادت إلى المنطقة المحايدة، بدء اللعب ملف صوت 20 ثانية مرارا وتكرارا لمدة 5 أو 10 دقيقة.
  6. إجراء الرصد السلوكي لمدة 5 أو 10 دقيقة.
  7. للحد من العظة الشمية غير مرغوب فيها المودعة من موضوع السابق، وتنظيف الأقفاص اختبار بين التجارب مع 70٪ من الإيثانول.
  8. تبديل مكان بواعث الموجات فوق الصوتية A و B عشوائيا لتجنب الأصيل جانب تأثير التحيز نحو غرف A أو B.

7. التحليلات الإحصائية

  1. باستخدام السلوكي برنامج الحدث التهديف، تحليل المعلمات التالية: إجمالي عدد الإدخالات في كل غرفة. إجمالي مدة البقاء في كل منطقة وسطى. إجمالي مدة البقاء في كل منطقة سليمة؛ والمدة الإجمالية للبحث في كل شبكة أمام باعث الموجات فوق الصوتية. الشكل 1 يوضح ما هو المقصود ب "المنطقة الوسطى" و "منطقة سليمة."
    ملاحظة: في الحالات التي يبقى الماوس على الخط الفاصل بين المنطقتين (الشكل 1، خط متقطع) تقرر الموقع من قبل اتجاه الرأس. عندما يواجه رئيس الجانب شبكة، وسجل على أنها إقامة في منطقة الصوت.
  2. لكل معلمة السلوكية، مقارنة استجابات لغرف A و B باستخدام اختبار Wilcoxon وقعت رتبة أو تي -tests يقترن مستوى دلالة (0.05).

النتائج

وUSVs سجلت من أحد BALB الذكور (161 المقاطع في 20 ثانية)، وكذلك الضوضاء في الخلفية كانت تستخدم لتشغيل الأصوات في تجربة تمثيلية هو مبين في الشكل (3). في هذه التجربة، واستخدمت 7 الفئران B6 الإناث في 9 أسابيع من العمر . لتحديد أفضل فترة اختبار استجابة الإناث لتشغيل الأصوات،...

Discussion

Here, the results of a representative test showed that female mice can discriminate between artificial male USVs and background noise (Figure 3). The conclusion to be drawn from these results is that the discrimination signal is reflected in the duration of stay in the room and sound zone, and in the duration of searching the mesh in the first 5 min of testing, but not in the second 5 min (Figure 3C, E and F). These data indicate that mice become habituated to the playback sounds, possib...

Disclosures

The authors declare that they have no competing interests.

Acknowledgements

وأيد هذا العمل من خلال منحة في والمعونة من أجل JSPS الزملاء إلى AA. عن طريق المنح في والمعونة للبحوث العلمية في المجالات المبتكرة لJSPS الزملاء (رقم 4501 ورقم 25132712) لTK؛ وبمنحة مشروع بحثي التي تمنحها جامعة أزابو. الشكل 2 وأعيد طبعه من Kihara، T.، هارادا، T.، وKoshida، N. يفر متوافق مع تلفيق وخصائص nanocrystalline السيليكون بواعث الموجات فوق الصوتية التي يسببها حراريا. في: أجهزة الاستشعار والمحركات A: المادية، وحجم 125، إلسفير، ص. 426، (2006)، بإذن من السيفير.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Soundproof chamberMuromachi Kikai
Small cageCLEA JapanCL-0113-1
Middle cageCLEA JapanCL-0103-1
Ultrasound condenser microphonesAvisoft BioacousticsCM16/CMPA
A/D converterAvisoft BioacousticsUltraSoundGate116H
Audio softwareAvisoft BioacousticsRECORDER USGH
Adobe Audition 3.0 / Audio editing softwareAdobe SystemsAdobe Audition 3.0
Nc-Si emitterOriginalnot commercially available but it is planned to be so in near future
D/A converterNational InstrumentsNI USB-6251 BNC
AttenuatorOriginal
AmplifierYamatake
PCWindows 7 professionalIntel® core i7-2600K CPU @ 3.4GHz, 8GB RAM, 64-bit operating system
Event recorder Excel-macro / Event-scoring softwareoriginalProgrammed by Naoto Akagawa & Takeru Yamamoto
CCD Camera
Rubber plates (made of elastomer resin)Tokyo bouonTI-75BK B4Cut them to the proper size http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&ca=6&p=3
Giemsa's azur eosin methylene blue solutionMerck Millipore1.09204.0500

References

  1. Panksepp, J. B., et al. Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice. PLoS One. 2 (4), e351 (2007).
  2. Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T+tf/J mice during three types of social encounters. Genes Brain Behav. 10 (1), 44-56 (2010).
  3. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. The structure and usage of female and male mouse ultrasonic vocalizations reveal only minor differences. PLoS One. 7 (7), e41133 (2012).
  4. Merten, S., Hoier, S., Pfeifle, C., Tautz, D. A role for ultrasonic vocalisation in social communication and divergence of natural populations of the house mouse (Mus musculus domesticus). PLoS One. 9 (5), e97244 (2014).
  5. Amato, F. R., Moles, A. Ultrasonic vocalizations as an index of social memory in female mice. Behav. Neurosci. 115 (4), 834-840 (2001).
  6. Chabout, J., et al. Adult male mice emit context-specific ultrasonic vocalizations that are modulated by prior isolation or group rearing environment. PLoS One. 7 (1), e29401 (2012).
  7. Ehret, G. Infant rodent ultrasounds–a gate to the understanding of sound communication. Behav. Genet. 35 (1), 19-29 (2005).
  8. Holy, T. E., Guo, Z. Ultrasonic songs of male mice. PLoS Biol. 3 (1), e386 (2005).
  9. Portfors, C. V. Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice. J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46 (1), 28-34 (2007).
  10. Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice. J. Acoust. Soc. Am. 136 (6), 3401 (2014).
  11. Neilans, E. G., Holfoth, D. P., Radziwon, K. E., Portfors, C. V., Dent, M. L. Discrimination of ultrasonic vocalizations by CBA/CaJ mice (Mus musculus) is related to spectrotemporal dissimilarity of vocalizations. PLoS One. 9 (1), e85405 (2014).
  12. Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. Female mice respond to male ultrasonic ‘songs’ with approach behaviour. Biol. Lett. 5 (5), 589-592 (2009).
  13. Musolf, K., Hoffmann, F., Penn, D. J. Ultrasonic courtship vocalizations in wild house mice, Mus musculus musculus. Anim. Behav. 79 (3), 757-764 (2010).
  14. Asaba, A., et al. Developmental social environment imprints female preference for male song in iice. PloS one. 9 (2), e87186 (2014).
  15. Uematsu, A., et al. Maternal approaches to pup ultrasonic vocalizations produced by a nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitter. Brain Res. 1163, 91-99 (2007).
  16. Okabe, S., et al. The effects of social experience and gonadal hormones on retrieving behavior of mice and their responses to pup ultrasonic vocalizations. Zoolog. Sci. 27 (10), 790-795 (2010).
  17. Okabe, S., et al. Pup odor and ultrasonic vocalizations synergistically stimulate maternal attention in mice. Behav. Neurosci. 127 (3), 432-438 (2013).
  18. Shinoda, H., Nakajima, T., Ueno, K., Koshida, N. Thermally induced ultrasonic emission from porous silicon. Nature. 400 (6747), 853-855 (1999).
  19. Kihara, T., Harada, T., Koshida, N. Wafer-compatible fabrication and characteristics of nanocrystalline silicon thermally induced ultrasound emitters. Sensor. Actuat. A-Phys. 125 (2), 422-428 (2006).
  20. Kikusui, T., et al. Cross fostering experiments suggest that mice songs are innate. PloS One. 6 (3), e17721 (2011).
  21. McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification. J. Vis. Exp. (67), e4389 (2012).
  22. Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology. Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).
  23. Tomihara, K., et al. Effect of ER-beta gene disruption on estrogenic regulation of anxiety in female mice. Physiol. Behav. 96 (2), 300-306 (2009).
  24. Zheng, Q. Y., Johnson, K. R. Hearing loss associated with the modifier of deaf waddler (mdfw) locus corresponds with age-related hearing loss in 12 inbred strains of mice. Hear. Res. 154 (1-2), 45-53 (2001).
  25. Haga, S., et al. The male mouse pheromone ESP1 enhances female sexual receptive behaviour through a specific vomeronasal receptor. Nature. 466 (7302), 118-122 (2010).
  26. Grimsley, J. M., Monaghan, J. J., Wenstrup, J. J. Development of social vocalizations in mice. PLoS One. 6 (3), e17460 (2011).
  27. Sugimoto, H., et al. A role for strain differences in waveforms of ultrasonic vocalizations during male-female interaction. PLoS ONE. 6 (7), (2011).
  28. Hanson, J. L., Hurley, L. M. Female presence and estrous state influence mouse ultrasonic courtship vocalizations. PLoS One. 7 (7), e40782 (2012).
  29. Wang, H., Liang, S., Burgdorf, J., Wess, J., Yeomans, J. Ultrasonic vocalizations induced by sex and amphetamine in M2, M4, M5 muscarinic and D2 dopamine receptor knockout mice. PLoS One. 3 (4), (2008).
  30. Moles, A., Kieffer, B. L., D'Amato, F. R. Deficit in attachment behavior in mice lacking the mu-opioid receptor gene. Science. 304 (5679), 1983-1986 (2004).
  31. Hiramoto, T., et al. Tbx1: identification of a 22q11.2 gene as a risk factor for autism spectrum disorder in a mouse. Hum. Mol. Genet. 20 (24), 4775-4785 (2011).
  32. Ey, E., et al. Absence of deficits in social behaviors and ultrasonic vocalizations in later generations of mice lacking neuroligin4. Genes Brain Behav. , (2012).
  33. Roy, S., Watkins, N., Heck, D. Comprehensive analysis of ultrasonic vocalizations in a mouse model of fragile X syndrome reveals limited, call type specific deficits. PLoS One. 7 (9), e44816 (2012).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

103 BALB C57BL 6

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved