JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

هنا نقدم بروتوكول للكشف عن التعبير ميكرورنا في الفئران الغشاء البريتوني باستخدام الكمي في الوقت الحقيقي عكس النسخ البلمرة سلسلة من ردود الفعل. هذه الطريقة مناسبة لدراسة الملف الشخصي التعبير ميكرورنا في الغشاء البريتوني الفئران في العديد من الحالات المرضية.

Abstract

ميكرورناس (ميرناس) هي رنا غير نكودينغ الصغيرة التي تنظم رسول رسول التعبير بعد ترانسكريبتيونالي. وقد تم التحقيق في الملف الشخصي التعبير ميرنا في مختلف الأجهزة والأنسجة في الفئران. ومع ذلك، لم يتم تأسيس أساليب موحدة لتنقية ميرناس والكشف عن التعبير في الغشاء البريتوني الفئران راسخة. قمنا بتطوير طريقة فعالة وموثوق بها لتنقية وتحديد ميرناس باستخدام الكمي في الوقت الحقيقي عكس النسخ البلمرة سلسلة من ردود الفعل (كرت-ير) في الفئران الغشاء البريتوني. يتكون هذا البروتوكول من أربع خطوات: 1) تنقية عينة الغشاء البريتوني. 2) تنقية رنا الكلي بما في ذلك ميرنا من عينة الغشاء البريتوني. 3) النسخ العكسي من ميرنا لإنتاج [كدنا]؛ و 4) كرت-ير للكشف عن التعبير ميرنا. باستخدام هذا البروتوكول، قررنا بنجاح أن التعبير عن ستة ميرناس (ميرنا-142-3p، ميرنا-21-5p، ميرنا-221-3p، ميرنا -223-3p، ميرنا -327، و ميرنا -34a-5P) زيادةبشكل ملحوظ في الغشاء البريتوني من الفئران نموذج التليف البريتوني مقارنة مع تلك الموجودة في مجموعات السيطرة. هذا البروتوكول يمكن استخدامها لدراسة الملف الشخصي للتعبير ميرنا في الغشاء البريتوني من الفئران في العديد من الحالات المرضية.

Introduction

ميكرورناس (ميرناس) قصيرة، رناس غير الشفرة التي بعد ترانسكريبتيونالي تنظيم رنا رسول (مرنا) التعبير 1 . التغيرات في التعبير عن ميرناس تنظيم التعبير عن العديد من مرناس التي تلعب الأدوار المحورية في مختلف الظروف المرضية، بما في ذلك السرطان، والتهاب، واضطرابات التمثيل الغذائي، والتليف 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 ، 8 . لذلك، ميرناس لها إمكانات المؤشرات الحيوية الرواية والأهداف العلاجية 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 ، 7 ، 8 . وقد تم تحديد الملف الشخصي التعبير ميرنا في مختلف الفئرانوالأعضاء والأنسجة، بما في ذلك الكبد والقلب والرئة والكلى 9 . ومع ذلك، لم يتم تأسيس أساليب موحدة لتنقية وكشف عن ميرناس في الغشاء البريتوني الفئران راسخة.

الهدف العام من هذا البروتوكول هو لتنقية بنجاح وكشف ميرناس في الغشاء البريتوني الفئران. أولا، تم تجانس عينة الغشاء البريتوني باستخدام الخالط الزجاج، تليها التعرض لنظام التمزق الحيوي البوليمر في عمود تدور ميكروسنتريفوج 10 . بعد ذلك، تم تنقية مجموع الحمض النووي الريبي بما في ذلك ميرنا من عينة الغشاء البريتوني باستخدام عمود تدور غشاء السيليكا القائمة على 10 . ثم، تم تصنيعه [كدنا] من الحمض النووي الريبي مجموع المنقى باستخدام ترانسكريبتاس العكسي، بولي (A) البلمرة، و أوليغو دت التمهيدي 11 . وأخيرا، تم تحديد التعبير عن ميرنا بواسطة كرت-ير باستخدام صبغ مقحم 11 . والأساس المنطقي لهذا البروتوكول هو بأسيد على الدراسات السابقة التي أظهرت تنقية كبيرة والكشف عن ميرنا في الأنسجة عن طريق عملية بسيطة 8 ، 10 ، 11 . وقد أفيد بأن استخدام نظام تمزيق بيوليمر الحيوية في عمود تدور ميكروسنتريفوج والعمودي تدور الغشاء السيليكا الغشاء يمكن تنقية عالية الجودة الحمض النووي الريبي مجموع من الأنسجة 10 . وقد تم الإبلاغ عن طريقة توليف [كدنا] من تنقية الحمض النووي الريبي مجموع باستخدام ترانسكريبتاسيس العكسي، بولي (A) البلمرة، و أوليغو دت التمهيدي، وطريقة الكشف عن التعبير ميرنا بواسطة كرت-ير باستخدام صبغ مقحم في هذا البروتوكول لإظهار دقة عالية و حساسية 11 . وبالإضافة إلى ذلك، وهذا هو عملية بسيطة، مما يوفر الوقت ويمنع الخطأ التقني. لذلك، هذا البروتوكول مفيد في الدراسات التي تتطلب الكشف دقيقة للغاية وحساسة من ميرنا في الفئران الغشاء البريتوني في مجموعة واسعة من الحالات المرضية.

Protocol

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية الحيوانية من قبل لجنة الأخلاقيات الحيوانية من جامعة جيتشي الطبية وأجري وفقا وفقا لرعاية واستخدام المبادئ التوجيهية الحيوانات التجريبية من دليل جامعة جيتشي الطبية للحيوانات المختبر.

1. البريتوني جمع العينات

  1. جمع العناصر التالية: 50 مل أنبوب الطرد المركزي مع القطن منقوع في إيسوفلوران، ورقة الفلين، طبق بتري مع الفوسفات مخزنة المالحة (بس)، مقص الجراحية، وملقط.
  2. الموت ببطء الفئران مع جرعة زائدة من إيسوفلوران، ثم رش الجلد في البطن من الفئران مع الايثانول 70٪، وجبل الفئران على ورقة الفلين على ظهرها.
  3. جعل شق طولي في الجلد في البطن، والعضلات، والغشاء البريتوني باستخدام مقص وملقط.
  4. التقاط الغشاء البريتوني باستخدام ملقط، وجعل الشقوق الأفقية على الجزء العلوي على طول العظم الضلع السفلي تحت الحجاب الحاجز وعلى لأور، جانب، عن، ال التعريف، جانبي، اقليم، الاستعمال، ال التعريف، جراحية، سسيسورس. المقبل، وجعل الشقوق الطولية الجانبية لإزالة الغشاء البريتوني من الجسم باستخدام مقص جراحي. ثم، وغسله مع برنامج تلفزيوني في طبق بتري.
  5. قطع وتقليم 20 ملغ (3-5 ملم 2 ) من عينات الغشاء البريتوني، وهو حجم مناسب للخطوات التالية، وذلك باستخدام مقص جراحي وملقط.

2. تنقية رنا الكلي من عينات الغشاء البريتوني

ملاحظة: هنا، يتم تجانس عينات الغشاء البريتوني وزنها 20 ملغ باستخدام الخالط الزجاج ونظام تمزيق بيوليمر الحيوية في العمود تدور ميكروسنتريفوج. ثم، يتم عزل الحمض النووي الريبي مجموع من عينة الغشاء البريتوني باستخدام عمود تدور الغشاء السيليكا الغشاء.

  1. جمع العناصر التالية: 1.5 أو 2.0 مل أنابيب ميكروسنتريفوج، الإيثانول بنسبة 100٪، الكلوروفورم، الخالط الزجاج، والجليد، ونظام تمزيق البوليمر الحيوي في عمود تدور ميكروسنتريفوج 10 عمود الغزل على أساس السيليكا غشاء 10 ، الفينول / كوانيدين القائم على تحلل كاشف، غسل العازلة بما في ذلك غوانيدين والإيثانول (غسل العازلة 1)، وغسل العازلة بما في ذلك الإيثانول (غسل العازلة 2).
  2. وضع 20 ملغ عينة الغشاء البريتوني في الخالط الزجاج وإضافة 700 ميكرولتر من الكاشف تحلل القائم على الفينول / غوانيدين.
  3. تجانس عينة الغشاء البريتوني عن طريق الضغط ببطء على مدقة على العينة مع التواء. كرر هذه العملية عدة عشرات من المرات على الجليد حتى عينة الغشاء البريتوني قد حلت تماما في كاشف تحلل القائم على الفينول / غوانيدين.
  4. لمزيد من التجانس، نقل المحللة المتجانس إلى نظام تمزيق البوليمر الحيوي في عمود تدور ميكروسنتريفوج في أنبوب جمع 2.0 مل. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 14،000 x ج لمدة 3 دقائق في 4 درجات مئوية.
  5. نقل المحللة المتجانس إلى أنبوب ميكروسنتريفوج جديد.
  6. إضافة 140 ميكرولتر من الكلوروفورم إلى المحللة المتجانسة وغطاء الحوضe بشكل آمن. ثم، مزيج أنبوب عن طريق انقلاب لمدة 15 ثانية.
  7. احتضان العينات لمدة 2-3 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم، أجهزة الطرد المركزي لهم في 12000 x ج لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية.
  8. نقل طاف (عادة 300 ميكرولتر) إلى أنبوب ميكروسنتريفوج جديد دون إزعاج راسب، وإضافة 1.5X حجمه (عادة 450 ميكرولتر) من الايثانول بنسبة 100٪. ثم، مزج العينة بواسطة فورتيكسينغ لمدة 5 ثوان.
  9. ماصة تصل إلى 700 ميكرولتر من العينة في عمود تدور الغشاء السيليكا الغشاء وضعت في أنبوب جمع 2.0 مل. أغلق غطاء العمود. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 15000 x ج لمدة 15 ثانية. بعد الطرد المركزي، وتجاهل تدفق من خلال في أنبوب جمع.
  10. إضافة 700 ميكرولتر من غسل العازلة 1 إلى عمود تدور الغشاء السيليكا الغشاء لغسل بعنف العينة. أغلق غطاء العمود. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 15000 x ج لمدة 15 ثانية. بعد الطرد المركزي، وتجاهل تدفق من خلال في أنبوب جمع.
  11. إضافة 500 ميكرولتر من غسل العازلة 2 إلى السيليكا-ممبرن القائم على عمود تدور لإزالة أي أثر للملح. أغلق غطاء العمود. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 15000 x ج لمدة 15 ثانية. بعد الطرد المركزي، وتجاهل تدفق من خلال في أنبوب جمع.
  12. كرر 2.11.
  13. أجهزة الطرد المركزي العمودية تدور على غشاء السيليكا الغشاء مرة أخرى في 15،000 x ج لمدة 1 دقيقة. بعد الطرد المركزي، وتجاهل تدفق من خلال في أنبوب جمع.
  14. وضع عمود تدور الغشاء السيليكا الغشاء في أنبوب جمع 1.5 مل جديد. ثم، ونقل 25 ميكرولتر من ريبونوكلياز خالية من المياه في العمود. أغلق غطاء العمود. ترك العينة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. ثم، أجهزة الطرد المركزي في 15000 x ج لمدة 1 دقيقة.
  15. نقل 25 ميكرولتر شطافة تحتوي على مجموع الحمض النووي الريبي إلى أنبوب ميكروسنتريفوج جديد. ثم، تخزينه في -80 درجة مئوية قبل الاستخدام.

3. النسخ العكسي من الحمض النووي الريبي مجموع

ملاحظة: مرجع والالتزام الحد الأدنى من المعلومات لنشر الكمي في الوقت الحقيقي ير التجربة(ميق) تشجع ممارسة أفضل وتساعد في الحصول على نتائج موثوقة لا لبس فيها 12 .
ملاحظة: هنا، ما مجموعه 1.0 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي معزولة هو عكس مكتوبة باستخدام ترانسكريبتاسيس العكسي، بولي (A) البلمرة، و أوليغو دت التمهيدي.

  1. جمع العناصر التالية: 1.5 مل أنابيب ميكروسنتريفوج. أنابيب الشريط ثمانية جيدا. ريبونوكلياز المياه مجانا. جليد؛ مجموعة النسخ العكسي (انظر جدول المواد) 11 .
  2. إعداد حل مزيج الرئيسي الذي يحتوي على 2.0 ميكرولتر من مزيج حمض النووي 10X، 2.0 ميكرولتر من مزيج ترانسكريبتاس العكسي (من عدة)، و 4.0 ميكرولتر من العازلة مرحبا 5X المواصفات لما مجموعه 8.0 ميكرولتر لكل أنبوب.
  3. الاستغناء 8.0 ميكرولتر من حل مزيج الرئيسي (من عدة) في كل أنبوب.
  4. قياس كمية من الحمض النووي الريبي مجموع باستخدام مقياس الطيف الضوئي. إضافة 1.0 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي مجموع معزولة تنقيته من عينة الغشاء البريتوني إلى كل أنبوب.
    ملاحظة: كرت-ير يمكن أن يؤديها وسينغ رنا الكلي كقالب دون النسخ العكسي لمراقبة الجودة من الحمض النووي الريبي مجموع المنقى. إذا ملوث أي دنا، ويلاحظ منتجات التضخيم غير متوقعة من قبل كرت-ير.
  5. إضافة ريبونوكلياز خالية من المياه إلى كل أنبوب إلى ما مجموعه 20 ميكرولتر. ثم، تخلط جيدا عن طريق بيبتينغ وأجهزة الطرد المركزي لمدة 15 ثانية.
  6. احتضان العينات لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية. احتضان فورا لمدة 5 دقائق في 95 درجة مئوية.
    ملاحظة: يمكن تنفيذ هذه الخطوة في سيكلر الحرارية.
  7. نقل [كدنا إلى أنبوب ميكروسنتريفوج جديد وتمييع عشر مرات (1:10) مع المياه خالية من ريبونوكلياز.
  8. تخزين كدنا المخفف على الجليد مؤقتا، وعند -80 درجة مئوية على المدى الطويل قبل الاستخدام.

4. كرت-ير من ميرنا

ملاحظة: يتم تنفيذ كرت-ير من ميرنا باستخدام صبغ مقحم. هنا، الاشعال ل رنا، U6 النووية الصغيرة 2 (RNU6-2)، ميرنا-142-3p، ميرنا -21-5p، ميرنا-221-3p، ميرنا -223-3p، ميرنا -327، و ميرنا -34a-5P استخدمت.

  1. جمع العناصر التالية: 1.5 مل أنابيب ميكروسنتريفوج، 96-جيدا لوحة رد الفعل ل كرت-ير، فيلم لاصق لوحة 96-جيدا رد فعل، الاشعال ميرنا محددة، الأخضر ير يستند صبغ كيت (انظر الجدول المواد) 11 ، و في الوقت الحقيقي ير أداة.
  2. إعداد مزيج الرئيسي يحتوي على 12.5 ميكرولتر من 2X ير مزيج الرئيسي، 2.5 ميكرولتر من 5 ميكرومتر كل التمهيدي ميرنا الذائبة في المياه نوكليس خالية، و 1.25 ميكرولتر من التمهيدي العالمي 10X لكل بئر.
  3. الاستغناء 22.5 ميكرولتر من مزيج الرئيسي في كل بئر من لوحة 96 جيدا.
  4. إضافة 2.5 ميكرولتر من قالب [كدنا] لكل بئر.
  5. ختم لوحة مع فيلم لاصق لوحة 96-رد فعل جيدا. ثم، أجهزة الطرد المركزي لوحة في 1000 x ج لمدة 30 ثانية.
  6. تشغيل برنامج الدراجات ير مع الوقت الحقيقي ير أداة والبرمجيات على النحو التالي.
    1. تعيين لوحة في الوقت الحقيقي ير أداة. في الوقت الحقيقي البرمجيات ير، وتحديد الخصائص التجريبية (المدخلات التجريبيةاختر "96- ويلز " للنوع التجريبي للأداة، واختر "2 - طريقة ΔΔCT " لطريقة الكميات، واختر "الكواشف الخضراء سيبر" للكاشف لاكتشاف التسلسل المستهدف، واختر "سرعة المنحدر القياسية" أداة المدى).
    2. ثم، تعيين أسماء للعينات وميرناس المستهدفة في كل بئر. يتم اختبار العينات دائما في نسخة مكررة أو ثلاثية للحصول على بيانات كافية للتحقق من صحة النتائج. حدد عينة مرجعية والسيطرة الذاتية. حدد "لا شيء" للصبغة لاستخدام كمرجع السلبي.
    3. إدخال حجم رد فعل من "20 ميكرولتر" وظروف الدراجات ير التالية في الوقت الحقيقي البرمجيات ير وفقا للتعليمات: بريانكوباشيون عند 95 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، ثم 40 دورات من تمسخ في 94 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ، الصلب في 55 درجة مئوية لمدة 30 ثانية، والإرشاد في 70 درجة مئوية لمدة 30 ثانية.
  7. تحليل بيانات كرت-ير شالغناء البرنامج من أداة ير في الوقت الحقيقي. تأكد من أن العتبة وخط الأساس التي يتم تحديدها تلقائيا بواسطة البرامج مناسبة في كل بئر.
  8. تحقق من دورة الحد من ميرناس الهدف في كل عينة. ودورة العتبة هي التقاطع بين منحنى التضخيم وخط العتبة. ثم، تطبيع مستوى التعبير من ميرناس الهدف ضد RNU6-2 باعتبارها السيطرة الذاتية، وحساب مستوى التعبير النسبي من ميرناس الهدف باستخدام طريقة 2 - ΔΔCT 13 .
    ملاحظة: تجدر الإشارة إلى أنه ينبغي التحقق من استقرار مستوى التعبير من ميرنا التحكم الذاتية. في هذه التجربة، تم تأكيد RNU6-2 على مستوى عال ومتغير نسبيا عبر كل مجموعة.

النتائج

وتستند النتائج المعروضة هنا على دراستنا ذكرت سابقا 8 . نحن التحقيق في الملف الشخصي التعبير ميرنا في التليف البريتوني. التليف البريتوني هو أحد المضاعفات الرئيسية في غسيل الكلى البريتوني. ويتميز فقدان الخلايا أحادية الطبقة الظهارية وترا...

Discussion

باستخدام بروتوكول المقدمة في هذه المخطوطة، ميرناس في الفئران الغشاء البريتوني تم تنقيته بنجاح وكشف باستخدام كرت-ير. موثوقية تحليل البيانات كرت-ير يعتمد على نوعية ميرناس المنقى. لذلك، قد يتم فحص نقاء ميرناس قبل كرت-ير بنسبة الامتصاصية في 260 نانومتر إلى أن في 280 نانومت?...

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ أنه لا يوجد لديهم أي تضارب في المصالح.

Acknowledgements

نود أن نشكر مياكو شيجيتا لدعمها الفني الممتاز. وقد حظي هذا العمل بدعم جزئي من جسبس كاكينهي (رقم المنحة 25461252).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
QIA shredderQiagen79654biopolymer-shredding system in a micro centrifuge spin-column
miRNeasy Mini kitQiagen217004silica-membrane based spin column
QIAzol Lysis ReagentQiagen79306phenol/guanidine-based lysis reagent
Buffer RLTQiagen79216wash buffer 1
Buffer RWTQiagen1067933wash buffer 2
miScript II RT kit Qiagen218161includes 10× Nucleics Mix containing deoxynucleotides, ribonucleotide triphosphates, and oligo-dT primers; miScript Reverse Transcriptase Mix containing poly(A) polymerase and reverse transcriptase and; miScript HiSpec buffer
miScript SYBR Green PCR kitQiagen218073includes QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix and miScript Universal Primer
RNU6-2 primer  QiagenMS00033740not disclosed
miRNA-142-3p primerQiagenMS000314515'-UGUAGUGUUUCC
UACUUUAUGGA-3'  
miRNA-21-5p primerQiagenMS000090795'-UAGCUUAUCAG
ACUGAUGUUGA-3'
miRNA-221-3p primerQiagenMS000038575'-AGCUACAUUGU
CUGCUGGGUUUC-3'
miRNA-223-3p primerQiagenMS000333205'-UGUCAGUUUG
UCAAAUACCCC-3'
miRNA-34a-5p primerQiagenMS000033185'-UGGCAGUGUCU
UAGCUGGUUGU-3'
miRNA-327 primerQiagenMS000008055'-CCUUGAGGGG
CAUGAGGGU-3'
MicroAmp Optical 96 well reaction plate for qRT-PCRThermo Fisher Scientific431681396-well reaction plate
MicroAmp Optical Adhesive Film Thermo Fisher Scientific4311971adhesive film for 96-well reaction plate
QuantStudio 12K Flex Flex Real-Time PCR systemThermo Fisher Scientific4472380real-time PCR instrument
QuantStudio 12K Flex Software version 1.2.1.Thermo Fisher Scientific4472380real-time PCR instrument software
methylglyoxalSigma-AldrichM0252
MidpericTerumonot assign peritoneal dialysis fluid
Sprague–Dawley ratsSLCnot assign 

References

  1. Krol, J., Loedige, I., Filipowicz, W. The widespread regulation of microRNA biogenesis, function and decay. Nat Rev Genet. 11 (9), 597-610 (2010).
  2. Beermann, J., Piccoli, M. T., Viereck, J., Thum, T. Non-coding RNAs in Development and Disease: Background, Mechanisms, and Therapeutic Approaches. Physiol Rev. 96 (4), 1297-1325 (2016).
  3. Saikumar, J., Ramachandran, K., Vaidya, V. S. Noninvasive micromarkers. Clin Chem. 60 (9), 1158-1173 (2014).
  4. Yang, G., Yang, L., Wang, W., Wang, J., Xu, Z. Discovery and validation of extracellular/circulating microRNAs during idiopathic pulmonary fibrosis disease progression. Gene. 562 (1), 138-144 (2015).
  5. Zhang, T., et al. Circulating miR-126 is a potential biomarker to predict the onset of type 2 diabetes mellitus in susceptible individuals. Biochem Biophys Res Commun. , (2015).
  6. Zhong, X., et al. miR-21 is a key therapeutic target for renal injury in a mouse model of type 2 diabetes. Diabetologia. 56 (3), 663-674 (2013).
  7. Wang, J., et al. Downregulation of urinary cell-free microRNA-214 as a diagnostic and prognostic biomarker in bladder cancer. J Surg Oncol. , (2015).
  8. Morishita, Y., et al. MicroRNA expression profiling in peritoneal fibrosis. Transl Res. 169, 47-66 (2016).
  9. Minami, K., et al. miRNA expression atlas in male rat. Sci Data. 1, 140005 (2014).
  10. Morse, S. M., Shaw, G., Larner, S. F. Concurrent mRNA and protein extraction from the same experimental sample using a commercially available column-based RNA preparation kit. Biotechniques. 40 (1), 54-58 (2006).
  11. Mestdagh, P., et al. Evaluation of quantitative miRNA expression platforms in the microRNA quality control (miRQC) study. Nat Methods. 11 (8), 809-815 (2014).
  12. Bustin, S. A., et al. The MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative real-time PCR experiments. Clin Chem. 55 (4), 611-622 (2009).
  13. Schmittgen, T. D., Livak, K. J. Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method. Nat Protoc. 3 (6), 1101-1108 (2008).
  14. Krediet, R. T., Lindholm, B., Rippe, B. Pathophysiology of peritoneal membrane failure. Perit Dial Int. 20, S22-S42 (2000).
  15. Devuyst, O., Margetts, P. J., Topley, N. The pathophysiology of the peritoneal membrane. J Am Soc Nephrol. 21 (7), 1077-1085 (2010).
  16. Hirahara, I., Ishibashi, Y., Kaname, S., Kusano, E., Fujita, T. Methylglyoxal induces peritoneal thickening by mesenchymal-like mesothelial cells in rats. Nephrol Dial Transplant. 24 (2), 437-447 (2009).
  17. Dallas, P. B., et al. Gene expression levels assessed by oligonucleotide microarray analysis and quantitative real-time RT-PCR -- how well do they correlate?. BMC Genomics. 6, 59 (2005).
  18. Rockett, J. C., Hellmann, G. M. Confirming microarray data--is it really necessary?. Genomics. 83 (4), 541-549 (2004).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

124

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved