تقطير ترانسوريثرال الداخلي في الماوس الذكور البالغين

Summary

تقطير transurethral هو إجراء صعبة ولا يوصف كذلك في الأدب. والهدف من هذه المخطوطة لوصف تقنية لإدخال قسطرة لتسليم إينترافيسيكال من السوائل المحتوية على المواد النشطة في المثانة و/أو البروستاتا في الفئران الذكور البالغين ترانسوريثرال.

Abstract

تقطير ترانسوريثرال يمكن استخدامها لتقديم حلول مختلفة مع المكونات النشطة (مثل المخدرات والمواد الكيميائية، البكتيريا والفيروسات) محلياً في المثانة البولية الحث على نماذج حيوانية من أمراض المثانة أو تقييم فعالية العلاجات إينترافيسيكال. هي الناجمين عن معظم القوارض نماذج لأمراض المسالك البولية (لوط) أقل في الفئران الإناث نظراً للتخفيف من تقطير إينترافيسيكال من المواد عن طريق الاحليل الإناث. ومع ذلك، نظراً للاختلافات التشريحية بين الإناث والذكور طرفية المستعملين المحليين، تقطير transurethral في ماوس ذكور قد اعتبر إجراء صعبة للغاية، وأنه لا قد وصف سابقا. في هذه المخطوطة، نحن نقدم وصفاً مفصلاً لكيفية إعداد أنابيب البولي إيثيلين (PE) للإدراج لاحقاً في مجرى البول بالماوس الذكور. وباﻹضافة إلى ذلك، ونحن نناقش أنواع مثالية من أنابيب PE لاستخدامها تبعاً للموقع المطلوب للتلقيح. وعلاوة على ذلك، يصف لنا نقطة بنقطة كيفية إعداد حيوان لتقطير transurethral ناجحة تجنب الإصابة بمجرى البول، وضمان تقديم الحل إلى الموقع المطلوب. بدء تشغيل الإجراء بواسطة سحب القلفة وحشفه لفضح افتتاح ماتيوس الاحليل. وبعد ذلك، يتم اغتنامها حشفة بالملقط حادة غير سحق لاستقرار القضيب وأنابيب PE. أولاً إدراج الأنبوب PE meatus الاحليل موازية لجسم الحيوان، ثم يتم ضبط الزاوية عن إمالة القسطرة للمناورة على تتبع الانحناء الطبيعي لمجرى البول. هذه التقنية يمكن أن تستخدم لنماذج مورين المستحث لأمراض المثانة و/أو تقييم فعالية العلاجات إينترافيسيكال في الفئران الذكور.

Introduction

أن النهج تقطير ترانسوريثرال قد استخدمت في الدراسات السابقة كإحدى الطرق لإنشاء نماذج القوارض من المثانة الأمراض^1،2،،من³⁴ ويمكن استخدامها لتقييم فعالية العلاجات تم تسليمها محلياً في الفئران. على الرغم من أن لا يمكن تلخيص نماذج حيوانية تماما الأمراض البشرية، تحديد الآليات الكامنة في الدراسات الحيوانية توفر فهم أفضل لاضطرابات طرفية البشرية مثل متلازمة الألم التهاب المثانة الخلالي/المثانة العصبية التهاب المثانة والتهاب المثانة المناعة الذاتية، والتهاب في البروستات⁵.

تقطير transurethral الإجراء يقوم على ماوس ذكور البالغين تحديا من الناحية التقنية أكثر من تقطير إينترافيسيكال في إطار ماوس الإناث البالغين⁶. تشريح المنحنى الطبيعي لمجرى البول الذكور جنبا إلى جنب مع قطرها صغير تجعل من الصعب من الناحية الفنية لإنجاز transurethral إدخال قسطرة. ولذلك، تعليمات مفصلة لتحريض transurethral الماوس المسالك البولية العدوى⁶ والطرفيات التهاب^7،،من^{89،10،11 , 12 , 13 , 14 ,} وقد أوجزت ¹⁵ عن طريق قسطرة المثانة-إدراج سابقا للفئران الإناث فقط. هذه المخطوطة يهدف إلى تقديم وصف خطوة بخطوة للتقنية لتقطير ترانسوريثرال المواد في الفئران الذكور بما في ذلك مقاطع الفيديو، والصور والرسوم التوضيحية. تقطير transurethral الإجراءات ماوس ذكور البالغين يمكن أن يؤديها مع متغير إينوكولاتيس مماثلة لما سبق الموصوفة في الماوس الإناث⁷ واندمجت مع تقنيات إضافية مثل تسجيلات electromyogram الردود فيسسيروموتور (VMR)¹⁶.

Protocol

كافة الإجراءات مع الحيوانات، بما في ذلك في الأسلوب ومدة التخدير، فضلا عن الرعاية بعد العملية الجراحية، ونوقشت مع طبيب بيطري ووافق "المؤسسية رعاية الحيوانات" واستخدام اللجنة (إياكوك) في المؤسسات التابعة لها. في هذه المخطوطة، أجريت جميع الإجراءات مع 8 إلى 15 عاماً الأسبوع C57BL/6 ذكور الفئران والبروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية الرعاية الحيوانية وافقت عليها إياكوك في جامعة كولورادو.

1. "إعداد أنابيب"

ملاحظة: لغرس العدوى، إبرة ملحقة بأنابيب البولي إيثيلين (PE) ( الشكل 1A) أو مقياس صغيرة (< ز 24) يمكن أن تكون أنجيوكاثيتير (المستخدمة الشكل 1). يتطلب استخدام أنجيوكاثيتير إعداد لا خلاف التعقيم مع 70% إيثانول (EtOH). العدوى هو المادة التي تغرس/حقن/تودع في المسالك البولية. يمكن أن يكون هذا حل الذي يحتوي على البكتريا أو الفيروسات أو مادة كيميائية. هذا هو إعداد قبل الموعد المحدد وكل بروتوكول البحث. على سبيل المثال، إذا كانت الدراسة تهدف إلى تقييم آثار العدوى كولاي في المسالك البولية السفلي، سوف تحتاج الباحث لإعداد العدوى التي تحتوي على البكتيريا، والتي يمكن أن يكون تلقيح/تغرس في المسالك البولية السفلي.

1. إعداد الإبرة تعلق على أنابيب PE بسيطة ويتكون مما يلي: اختر حجم أنابيب PE استناداً إلى الجهاز المستهدف وسن الحيوان. لحيوان الذين تقل أعمارهم عن 12 أسبوعا، استخدام أنابيب PE-10 (خارج القطر 0.024 بوصة وقطر داخلي 0.011 بوصة). أنابيب PE-10 يقترح أن تكون قابلة للتطبيق على (1) البذور الأولية للعدوى في البروستاتا الأمامي (AP) والحويصلات (SV)، أو (2) البذور الأولية للعدوى في المثانة حيوان أصغر سنا من العمر لمدة 12 أسبوعا. PE أنابيب قطرها أكبر لتصل إلى حجم 50 PE (خارج القطر حتى بوصة 0.038 وداخل القطر حتى بوصة 0.023) يمكن أن تستخدم لبذر الرئيسي للعدوى في المثانة الحيوانات الأكبر سنا-
2. قص حوالي 2.5 بوصة من أنابيب PE.
حدد
3. إبرة التي تناسب القطر PE المحدد لاستخدامها. إبرة ز 27 يمكن أن تندرج في التجويف أنابيب PE-10، ويناسب إبرة ز 22 التجويف أنابيب PE-50-
   1. تحضير الإبرة قبل الإدراج في الأنبوب PE بفرك حافة حادة من الإبرة على حجر نفط متاحة تجارياً ( الشكل 1A -ب) جعلها مملة، أو استخدام حادة متاحة تجارياً إبرة-
4. إدخال إبرة مملة ( الشكل 1) في تجويف الأنبوب PE. تجنب الضرر إلى التجويف أو دخول تجويف كاذبة بكفالة بقايا الإبرة في وسط التجويف. ( الشكل 1 -E). إذا تلف أنابيب PE أثناء إدراج إبرة مملة، قطع نهاية التالفة وإعادة تشغيل العملية.
5. وضع أنابيب PE المرفقة بإبرة في 70% EtOH للتعقيم حتى استعماله لهذا الإجراء. تدفق 70% EtOH من خلال الأنبوب إبرة-PE لتعقيم التجويف وضمان وجود لا تسرب من الأنبوب PE من الضرر خلال عملية غرز الإبرة. إذا كان هناك تسرب، تجاهل الأنبوب إبرة-PE.
   ملاحظة: غيض الأنبوب PE يجب أن تكون سلسة قبل القسطرة. لتجنب حدوث مشاكل مع إدخال الأنبوب PE في مجرى البول، ينصح بقص طرف الأنبوب PE مباشرة قبل قسطرة ( الشكل 1F). الحد الأدنى المقترح لطول الأنبوب PE 1.5 بوصة، التي تشمل الجزء المحيط بالإبرة.

2. إجراء قسطرة

1. قبل التعريفي للتخدير، إفراغ المثانة بالماوس- تطبيق ضغط لطيف
   1. وتدليك للبطن السفلي من الماوس. هذه المناورات عادة ما تؤدي إلى إبطال عفوية. مثانة كامل قد تؤدي إلى إضعاف أو التسرب فورا أي العدوى عميق.
      ملاحظة: خيار إضافي لضمان مثانة فارغة في ماوس حرمان حيوان الماء لمدة ساعة واحدة على الأقل قبل بدء الإجراء تقطير ترانسوريثرال. الحرمان من المياه يجب أن يلقي موافقة المؤسسة كجزء من بروتوكول الحيوان.
2. استخدام جهاز تخدير مع تدفق isoflurane (2 في المائة) للحث على التخدير.
   1. بمجرد تخديره من الحيوان، وضعه على بطانية دافئة تدفئة وتغطية ذلك مع لوحة زرقاء مع انفها داخل نوسيكوني للمحافظة على التخدير المستمر-
   2. التأكد من أن الحيوان تحت التخدير عن طريق فحص المعاكسة دواسة (تو رشة).
3. مرة المعاكسة دواسة غائب، المضي قدما بسحب القلفة.
   1. الصحافة منطقة العانة مع كل من الإبهام والسبابة من جهة ( 2A الأرقام و 2 باء)، وسحب القضيب الغدد باستخدام الإبهام والسبابة (من ناحية أخرى الشكل 2). عندما يتم إنجاز ذلك بشكل صحيح، القلفة وحشفه القضيب، والقضيب الجسم تظل مكشوفة. ( الشكل 2D والشكل 2 واو). يجب عدم استخدام الملقط لسحب القضيب الغدد كهذا سيؤدي إلى الأضرار بالانسجة.
4. تليين طرف القسطرة وحشفه مع زيوت التشحيم الجراحية المعقمة قبل إدخال القسطرة. وهذا سيسهل إدراج الأنبوب PE.
   ملاحظة: يوصي بمربعات مغلفة على حدة من مواد التشحيم الجراحية، بدلاً من أنبوب كبير واحد، لكل استخدام للحفاظ على ظروف معقمة.
5. اضغط برفق غيض القضيب استخدام الملقط مملة والضغط بلطف حشفة تسبب ماتيوس الاحليل لفتح-
6. عقد المحاقن مع أنابيب PE المرفقة بإبرة أو PE الأنابيب نفسها وإدراج الأنبوب PE من خلال ماتيوس الاحليل.
   ملاحظة: يوصي بقبضة ترايبود من المحاقن مع أنابيب PE المرفقة بإبرة أو PE أنابيب نفسها باستخدام الإبهام، والفهرس، والأصابع الوسطى للاستقرار-
   ملاحظة: ينبغي أن منحنى مسار القسطرة بسبب الانحناء الطبيعي لمجرى البول محاطة حشفة القضيب والجسم القضيب في الماوس الذكور البالغين كما هو موضح في الشكل 3 ألف و الشكل 3B. أنابيب PE كاثيتيريزيد قد يجتمع المقاومة خلال قسطرة، لذلك، من المستحسن لضبط الزاوية عن إمالة الأنابيب أعلى أو أسفل مقدما المساعدة الأنبوب PE إلحاقا بالجهاز الهدف. إذا لزم الأمر، يمكن تدويرها الأنبوب PE قليلاً لمساعدته على المناورة من خلال المنعطفات الحادة المختلفة من مجرى البول. عندما يكون هناك الكثير جداً من المقاومة، ينبغي أن سيتم سحب الأنبوب وثم المضي قدما مرة أخرى مع الضغط الأدنى. سحب PE-الأنابيب الخروج تماما واستخدام تزييت أكثر قد تكون مفيدة.
7. أداء تقطير العدوى عندما وصلت PE-الأنابيب الجهاز المطلوب عن طريق دفع المكبس الإبرة لغرس وحدة التخزين المطلوبة للعدوى (5-200 ميليلتر الحجم المقترح). يتم إدراج
   1. تقطير العدوى في المثانة البولية، والنهوض بأنابيب PE حتى حوالي 0.75 بوصة من أنابيب PE ( الشكل 3A).
      ملاحظة: لتقطير العدوى في وكالة اسوشييتد برس و SV، عموما، الوتجتمع أنابيب ه إدراج المقاومة بمجرد أن تصل إلى نقطة الافتتاح في البروستاتا الأمامي. عن طريق ضبط الزاوية عن إمالة الأنابيب صعودا أو هبوطاً، أنابيب PE سوف إحراز المزيد من التقدم حتى حوالي 1 بوصة من أنابيب PE تم إدراجها ( الشكل 3B).

3. في فيفو التصوير "أقل المسالك البولية" والكلى

ملاحظة: غرض التصوير في فيفو في هذه المخطوطة: (1) لتأكيد التعريب المكانية للعدوى؛ و (2) لتقييم حدوث ارتداد للعدوى الكلي. يمكن استخدامها لهذا الغرض، أما ماوس تخديره أو euthanized.

1. لتصور المسالك البولية السفلي الماوس الذكور البالغين، أداء أدنى خط الوسط البطن البطن للكشف المثانة والبروستاتا والحويصلات.
   1. جداً الجلد في خط الوسط من عظم العانة لمجرد أدناه العملية الرهابه باستخدام مقص.
   2. رفع الجلد قبالة النسيج تحت الجلد-
   3. تحديد ينيا avascular ألبا الواقعة في خط الوسط، وجدا هذا إدخال التجويف الصفاقى حيث توجد جميع الأجهزة-
   4. تأكيد التعريب المكانية بالتصور من الصبغة الزرقاء أو وكيل تتبع مناسب آخر.

النتائج

تقطير transurethral صبغة زرقاء عن طريق أنابيب PE 50 أسفرت تقطير الصبغة إلى المثانة البولية (الشكل 4 أ)، وعن طريق أنابيب PE 10 في التلوين SV ووكالة اسوشييتد برس (الشكل 4)، على التوالي. لتقييم ما إذا كان تقطير transurethral المؤداة يؤدي ارتداد فورية للعدوى إلى ا?...

Discussion

هذه المخطوطة يصف بالتفصيل طريقة لتقطير transurethral في الماوس الذكور البالغين. يمكن الوصول إلى منطقة البذر الابتدائي التفاضلية باستخدام أنابيب PE من أقطار مختلفة. ويوصي PE-50 للتوصل بنجاح إلى التجويف المثانة، بينما يبلغ قطرها أكبر PE-10 يستخدم للوصول إلى وكالة اسوشييتد برس و SV (الشكل 3 أ

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10	BD Medical	63019-004
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50	BD Medical	63019-048
BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath	BD Medical	311411
Ethanol (EtOH)	Fisher Scientific	BP2818500
BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch	Becton Dickson	205155
BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch	Becton Dickson	305129
Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS22
Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS27
6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone	Norton	40204034
Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac	Surgilube	281020543
Isoflurane	Fluriso	13985-528-60
SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System	Kent Scientific	SS-01
Dissecting Forceps, Curved	vwr	82027-392
BD 1 ml Syringe	BD Medical	309626
India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer	Alfa Aesar	J61007
8~12 weeks old male C57B/6 Mice	Jackson Lab	#000664