הליך ההתקנה-transurethral עכבר זכר בוגר

Summary

החדרה-transurethral תהליך מאתגר, לא טוב תואר בספרות. מטרתו של כתב יד זה הוא לתיאור טכניקה עבור החדרת צנתר למסירה intravesical של נוזלים עם חומרים פעילים אל תוך שלפוחית השתן ו/או הערמונית בעכברים זכרים בוגרים של-transurethral.

Abstract

החדרה-transurethral יכול לשמש כדי לספק פתרונות שונים עם חומרים פעילים (למשל, תרופות, כימיקלים, בקטריה, וירוסים) באופן מקומי לתוך שלפוחית השתן זירוז מודלים חייתיים של פתולוגיות בשלפוחית השתן או להעריך יעילות הטיפולים intravesical. ביותר מכרסמים מודלים של פתולוגיות בדרכי השתן (LUT) התחתון הם המושרה בעכברים הנשי בשל הקלות של intravesical החדרה של החומרים באמצעות לשופכה הנשית. עם זאת, בשל ההבדלים אנטומיים בין LUT נשי, החדרה-transurethral ב עכבר זכר שסברו שהוא הליך מאוד מאתגר, זה לא תוארה בעבר. כתב יד זה, אנו מספקים תיאור מפורט של איך להכין צינורות פוליאתילן (PE) עבור הכניסה הבאים לתוך השופכה של עכבר זכר. בנוסף, נדון בסוגי צינורות PE כדי לשמש בהתאם האתר הרצוי של חיסון אידיאלי. יתר על כן, אנו מתארים נקודת בנקודה כיצד להכין חיה על החדרה-transurethral מוצלח למנוע פציעה של השופכה ולהבטיח המסירה של הפתרון למיקום הרצוי. ההליך מופעל על ידי מפסק את העורלה, העטרה לחשוף את הפתיחה של meatus השופכה. בשלב הבא, העטרה הם אחז על ידי מלקחיים בוטה שאינו מוחצת לייצב את הפין, לאורך צינור PE. צינורות PE הוכנס לראשונה meatus השופכה מקבילה לגוף בעלי חיים, אז הזווית שלו מכוונן בהטיית הקטטר לתמרן אותו ללכת בעקבות את עקמומיות טבעית של השופכה. טכניקה זו יכולה לשמש המושרה מאתר מודלים של פתולוגיות בשלפוחית השתן ו/או להעריך את האפקטיביות של טיפולים intravesical בעכברים זכרים.

Introduction

הגישה החדרה-transurethral שימשה במחקרים קודמים באחת השיטות ליצירת מודלים מכרסם של שלפוחית השתן פתולוגיות^1,2,3,4 והוא יכול לשמש כדי להעריך יעילות הטיפולים באופן מקומי ונמסרו בעכברים. למרות בבעלי חיים לא יכול לסכם באופן מלא פתולוגיות אנושי, זיהוי של המנגנונים שבבסיס במחקרים שנעשו בבעלי חיים מספקת הבנה טובה יותר של הפרעות LUT אנושיים כגון תסמונת כאב דלקת שלפוחית השתן interstitial/שלפוחית השתן, neurogenic דלקת שלפוחית השתן, דלקת שלפוחית השתן אוטואימוניות ו דלקת הערמונית⁵.

ההליך החדרה-transurethral לבצע על העכבר זכר בוגר הוא מאתגר יותר מבחינה טכנית מאשר intravesical החדרה העכבר נקבה בוגרת⁶. באופן טבעי מעוקל האנטומיה של השופכה הגברית יחד עם קוטר קטן שלה להקשות טכנית לבצע החדרת קטטר-transurethral. לכן, מפורטות הוראות אינדוקציה-transurethral של זיהום בדרכי השתן העכבר⁶ ו LUT דלקת^{7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15} באמצעות קטטר מוכנס לשלפוחית השתן היו בעבר המתוארים עבור עכברים נקבה בלבד. כתב יד זה שואפת לספק תיאור צעד אחר צעד של הטכניקה-transurethral החדרה של חומרים בעכברים זכרים, לרבות קטעי וידאו, תמונות, איורים. החדרה-transurethral הליכים עכבר זכר בוגר יכול להתבצע עם משתנה inoculates דומה לזה בעבר תיאר את העכבר נקבה⁷ , התמזגה עם טכניקות נוספות כגון electromyogram הקלטות של תגובות visceromotor (VMR)¹⁶.

Protocol

כל ההליכים עם בעלי חיים, כולל את השיטה ואת משך ההרדמה, כמו גם טיפול לאחר הניתוח, היו שנדונו עם וטרינר ואושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC)- מוסד קשורות. כתב יד זה, כל הפרוצדורות בוצעו עם 8 בת שבוע 15 C57BL/6 לעכברים זכרים, הפרוטוקול מנחים את טיפול בבעלי חיים שאושרו על-ידי IACUC ב מאוניברסיטת קולורדו.

1. הכנה של אבובים

הערה: להחדיר את inoculum, מחט המצורפת לאורך צינור פוליאתילן (PE) ( איור 1 א') או לאמוד קטן (< 24 G) angiocatheter יכול להיות בשימוש ( איור 1 ג'י). השימוש angiocatheter דורש ללא הכנה חוץ עיקור עם 70% אתנול (EtOH). Inoculum הוא חומר זה הוא החדירו/מוזרק/והופקדו בדרכי השתן. זה יכול להיות פתרון המכיל חיידקים, וירוסים או חומר כימי. זה מוכן מראש ועל פי פרוטוקול המחקר. לדוגמה, אם המחקר נועד להעריך את ההשפעות של e. coli חדירתו בדרכי השתן התחתונה, החוקר יהיה עליך להכין את inoculum המכיל חיידקים, אשר יכול להיות מחוסן/החדירו בדרכי השתן התחתונה.

1. הכנה של המחט המחוברים לצנרת PE היא פשוטה והיא מורכבת הבאות: לבחור את הגודל של צינורות PE מבוסס על האיבר היעד והתקופה של חיה. לשימוש חיים צעיר יותר 12 שבועות, צינורות PE-10 (מחוץ בקוטר הוא 0.024 ס מ והוא בתוך קוטר 0.011 סנטימטרים). צינורות PE-10 הוא הציע להיות ישימים עבור (1) זריעה העיקרי של inoculum anterior הערמונית (AP), vesicles הזרע (SV), או (2) זריעה העיקרי של inoculum בשלפוחית השתן של חיים צעיר יותר בגיל 12 שבועות. PE צינורות בקוטר גדול של עד מידה 50 PE (מחוץ בקוטר עד ס מ 0.038 ובתוך בקוטר עד 0.023 ס מ) יכול לשמש זריעה העיקרי של inoculum בשלפוחית השתן של בעלי החיים ישנים יותר.
2. לחתוך כ 2.5 סנטימטרים של צינורות PE.
3. בחר מחט שיתאים לקוטר PE שנבחר לשמש. מחט 27 G יכול להתאים לתוך לומן של צינורות PE-10 ולאחר מחט 22 גרם מתאים לומן של צינורות PE-50-
   1. להכין המחט לפני הכניסה לתוך לאורך צינור PE על ידי שפשוף על חדות קצה המחט על אבן שמן זמינים מסחרית ( איור 1A -B) שזה משעמם, או להשתמש סיגריה זמינים מסחרית המחט.
4. להציג את המחט משעמם ( איור 1C) לתוך לומן צינורות PE. למנוע נזק לומן או כניסתו לומן שווא על-ידי הבטחת השרידים מחט במרכזה של לומן. ( איור 1D -E). אם לאורך צינור PE פגום במהלך החדרת המחט משעמם, לחתוך הסוף פגום ולהפעיל מחדש את התהליך.
5. למקם את צינורות PE צמוד-מחט ב- 70% של EtOH עבור עיקור עד השימוש עבור ההליך. סומק 70% EtOH דרך הצנרת מחט-PE לחטא לומן, כדי להבטיח שם זה אין זליגות לאורך צינור PE של נזק במהלך התהליך של הכנסת המחט. אם יש דליפה, מושלך לאורך צינור מחט-PE-
   הערה: קצה לאורך צינור PE צריכה להיות חלקה לפני צנתור. כדי למנוע בעיות עם מציגה את צינורות PE לתוך השופכה, מומלץ לחתוך את קצה צינורות PE מייד לפני צנתור ( איור 1F). אורך מינימלי המוצע לאורך צינור PE הוא 1.5 אינץ ', אשר כוללת את החלק המקיפים את המחט.

2. הליך צנתור

1. לפני אינדוקציה של הרדמה, לרוקן את השלפוחית של העכבר.
   1. להפעיל לחץ עדין ועיסוי אל הבטן התחתונה של העכבר. תמרונים אלה בדרך כלל להוביל הרקה ספונטנית. שלפוחית שתן מלאה עלולה לגרום לדילול או דליפה מיידית כל מושתל inoculum.
      הערה: אפשרות נוספת כדי להבטיח שלפוחית ריקה ב עכבר הוא לשלול את החיה של מים במשך לפחות שעה לפני תחילת ההליך החדרה-transurethral. מניעת מים צריך יאושרו על-ידי המוסד במסגרת פרוטוקול בעלי חיים-
2. להשתמש מכונת הרדמה עם זרימה איזופלוריין (2%) כדי לגרום הרדמה.
   1. ברגע החיה. הוא מורדם, הנח אותו על שמיכה חמה חימום ומכסים אותו עם כרית כחול עם האף שלה בתוך nosecone לשם קיום מתמשך הרדמה.
   2. מאשרים כי החיה הוא בהרדמה על-ידי בדיקת את רפלקס פדלים (הבוהן צביטה).
3. פעם רפלקס פדלים נעדר, המשך על ידי מפסק ערלה.
   1. העיתונות באזור הערווה עם האגודל והן האצבע המורה. של יד אחת ( דמויות 2A ו- 2B), יצא אל הפין בלוטות באמצעות באגודל ובאצבע של (יד אחרים איור 2C). כאשר מטרה זו מושגת כראוי, עורלה, הפין העטרה וגוף הפין נותרים חשופים. ( איור 2D ו- 2F איור). אל תשתמש מלקחיים כדי להוציא את הפין בלוטות כפי זה יגרום נזק לרקמות.
4. לשמן את קצה הקטטר, העטרה עם חומר סיכה כירורגי סטרילי לפני החדרת הקטטר. זה יקל על החדרת צינורות PE.
   הערה: ריבועים ארוזים בנפרד של חומר סיכה כירורגי, במקום שפופרת גדולה אחת, מומלץ עבור כל שימוש לשמור על תנאים סטריליים.
5. בעדינות להחזיק את קצה הפין באמצעות מלקחיים משעמם וללחוץ בעדינות את העטרה לגרום את meatus השופכה לפתוח.
6. להחזיק את המזרק עם מחט-attached PE-אבובים או PE צינורות עצמה ולהוסיף את צינורות PE באמצעות השופכה meatus.
   הערה: אחיזה חצובה של המזרק עם מחט-attached PE-הצנרת או על PE צינורות עצמה באמצעות האגודל, אינדקס, באצבעות מומלצת יציבות.
   הערה: הנתיב של צנתור צריך להיות מעוקל בגלל שכדור הטבעי של השופכה מוקף הפין העטרה וגוף הפין העכבר זכרים בוגרים, כפי שמוצג באיור 3A ו- 3B איור. לאורך צינור PE catheterized. אולי אתקל בהתנגדות במהלך צנתור, לכן, מומלץ לכוון את הזווית בהטיית הצנרת למעלה או למטה כדי לעזור מראש את צינורות PE בנוסף לאיבר המטרה. במידת הצורך, צינורות PE ניתן לסובב מעט לעזור לו לתמרן דרך פניות חדות שונים של השופכה. כאשר יש בהתנגדות רבה מדי, הצנרת צריך לשוחרר בחזרה, ואז להתקדם שוב עם לחץ מינימלי. משיכת PE-אבובים בחוץ לגמרי, באמצעות שימון נוסף עשוי להיות מועיל.
7. לבצע החדרה של inoculum ברגע PE-אבובים הגיעה האיבר הרצוי על-ידי לחיצה על הבוכנה המחט להחדיר האחסון הרצוי של inoculum (5-200 µL אמצעי האחסון הוא הציע).
   1. עבור החדרה של inoculum אל שלפוחית השתן, לקדם את צינורות PE עד כ- 0.75 ס מ של צינורות PE מוכנס ( איור 3 א).
      הערה: עבור החדרה של inoculum AP, SV, בדרך כלל, the מוכנס אבובים פוגש את ההתנגדות ברגע שהוא מגיע לנקודה של פתיחת לתוך הערמונית הקדמי. על-ידי התאמת הזווית בהטיית הצנרת למעלה או למטה, צינורות PE להתקדם עוד עד כ 1 אינץ ' של צינורות PE היה מוכנס ( איור 3B).

3. אין ויוו הדמיה של מערכת השתן התחתונה, הכליות

הערה: מטרת ויוו הדמיה בכתב היד: (1) כדי לאשר לוקליזציה המרחבי של inoculum; ו- (2) כדי להעריך את השכיחות של ריפלוקס של inoculum הכליות. למטרה זו, ניתן להשתמש גם בעכבר מרדימים או לאללה.

1. להמחיש בדרכי השתן התחתונה עכבר זכר בוגר, לבצע פתיחת בטן קו האמצע בבטן התחתונה כדי לחשוף את שלפוחית השתן, ערמונית, שלפוחית הזרע.
   1. תחתכי את העור של האמצע של עצם הערווה עד מתחת הסרעפת באמצעות מספריים.
   2. העלה את כל העור הרקמה התת עורית.
   3. לזהות את avascular linea alba ממוקם האמצע, תחתכי את זה כדי להזין את החור בצפק שבו כל האיברים נמצאים.
   4. לאשר את ההתאמה המרחבית ויזואליזציה של צבע כחול או סוכן מתאים מעקב אחר.

תוצאות

החדרה-transurethral של צבע כחול דרך צינורות PE 50 גרם החדרה של לצבוע לתוך על שלפוחית השתן (איור 4A), ועל דרך צינורות PE 10 ב הצביעה של SV ו- AP (איור 4B), בהתאמה. להעריך החדרה-transurethral שבוצעו גורם של ריפלוקס מיידית של inoculum לכליות או לא, הכליות ואת שופכן נצפו ולא...

Discussion

כתב יד זה מתאר בפירוט שיטה של החדרה-transurethral עכבר זכר בוגר. דיפרנציאלית אזור זריעה הראשי ניתן להגיע באמצעות צינורות PE של קטרים שונים. PE-50 מומלץ להגיע בהצלחה לומן שלפוחית השתן, בעוד קוטר גדול יותר ש-PE-10 משמש כדי להגיע AP של SV (איור 3 א-ב). בנוסף, הבחירה של גודל של צינורות PE ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10	BD Medical	63019-004
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50	BD Medical	63019-048
BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath	BD Medical	311411
Ethanol (EtOH)	Fisher Scientific	BP2818500
BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch	Becton Dickson	205155
BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch	Becton Dickson	305129
Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS22
Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle	Instech	LS27
6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone	Norton	40204034
Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac	Surgilube	281020543
Isoflurane	Fluriso	13985-528-60
SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System	Kent Scientific	SS-01
Dissecting Forceps, Curved	vwr	82027-392
BD 1 ml Syringe	BD Medical	309626
India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer	Alfa Aesar	J61007
8~12 weeks old male C57B/6 Mice	Jackson Lab	#000664