العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Summary

ويصف هذا البلاغ موريني نماذج لأغراض تجريبية ومنهجيات للعزلة وثقافة البلاعم السنخية من البشر.

Abstract

البلاعم السنخية هي الضامة الميؤوس من شفائهم المتباينة، والمقيم في الرئة الأصلية قبل الولادة. البلاعم السنخية فريدة من نوعها في حياتها الطويلة ودورها الهام في تنمية الرئة ووظيفة، فضلا عن ردودها المترجمة بالرئة بالعدوى والالتهابات. وحتى الآن، لا توجد طريقة موحدة لتحديد الهوية والعزلة، والتعامل مع البلاعم السنخية من البشر والفئران موجود. مثل هذا أسلوب ضروري لإجراء دراسات عن هذه الخلايا المناعية الفطرية الهامة في مختلف البيئات التجريبية. الأسلوب الموصوفة هنا، الذي يمكن اعتماده بسهولة بأي مختبر، نهج مبسطة لحصاد البلاعم السنخية من سائل الغسل للفيسيولوجيا أو من أنسجة الرئة والحفاظ عليها في المختبر. لأن السنخية الضامة يحدث أساسا كخلايا ملتصقة في الحويصلات الهوائية، هذا الأسلوب ينصب التركيز على إزاحة لهم قبل الحصاد، وتحديد الهوية. الرئة جهاز فاسكولاريزيد عالية، وتسكن مختلف أنواع الخلايا المنشأ النقوي واللمفاوية، والتفاعل، وتتأثر المكروية الرئة. باستخدام مجموعة علامات السطح الموصوفة هنا، الباحثين يمكن بسهولة وبشكل لا لبس فيه تمييز البلاعم السنخية من الكريات البيضاء الأخرى، وتنقية لهم طلبات المتلقين للمعلومات. الأسلوب الثقافة المتقدمة هنا يدعم كلا الإنسان والفأر البلاعم السنخية للنمو في المختبر ، ومتوافقة مع الدراسات الخلوية والجزيئية.

Introduction

المكروية الرئة نظام إيكولوجي فريد معقدة مع قناة الهواء تفصيلاً والمفرج. ويسافر الهواء المستنشق عن طريق القصبة الهوائية وفروع عديدة من القصبات والقصيبات قبل أن تصل إلى الحويصلات الهوائية، التي يحدث فيها تبادل الغازات الجوية الدم. نظراً للتفاعل المباشر مع الغلاف الجوي، يتطلب السطح التنفسي الحماية من الآثار الضارة المحتملة للجسيمات العالقة في الهواء والملوثات. عدد من الحواجز المادية والكيميائية والمناعية حماية الرئتين. جدير بالذكر أن نشر البالعات في السطح التنفسي يخدم نظام الدفاع السطر الأول هام. البلاعم السنخية (هيئة علماء المسلمين) نوع واحد من البالعات المقيم في الرئة، ويشكلون الغالبية العظمى من تجمع بلعم الرئة. وكما يوحي اسمها، هيئة علماء المسلمين هي أساسا مترجمة إلى التجويف السنخية وتحدث كخلايا لاطئة الذي عينة في الغلاف الجوي المحيط باستمرار والتواصل مع ظهارة السنخية¹. في حالة مستقرة الرئتين، أكثر من 95 في المائة البالعات في الفضاء السنخية هي مقياس الدعم الكلي²، تشكيلها قد تغير بسبب الالتهاب أو العدوى أو التعرض المزمن للملوثات.

هيئة علماء المسلمين المشاركة في مجموعة واسعة من الوظائف التي قد تكون محلية إلى الرئتين و/أو ذات الأهمية الشاملة. على سبيل المثال، هيئة علماء المسلمين تعتبر أساسية في التنمية والأداء الأمثل للرئتين؛ المراقبة المناعية؛ وإزالة الحطام الخلوية والغازية المسببة للأمراض، واستنشاق الجسيمات^3،،من^45،،من⁶⁷. استنفاد المستهدفة من هيئة علماء المسلمين المعروف أن تنال من إزالة فيروسات الجهاز التنفسي والبكتيريا^4،8. وإلى جانب دورها البالعات والمدافعين عن السطر الأول من التوازن الرئوية، معروفة مقياس الدعم الكلي وظيفتها كما عرض مستضد الخلايا في استخلاص تي الخلية⁹من الحصانة، potentiating فعالية اللقاحات داخل الآنف¹⁰ و التأثير على المناعة الذاتية المقيدة-الرئة بعد زرع الرئة^11،12. ارتبط نقص في وظيفة صباحا إلى بروتينوسيس السنخية الرئوية (PAP)، شرط الناتجة عن الطفرات الوراثية، خبيثة أو الإصابة التي يعوق إزالة التوتر السطحي الرئوي^13،14. يجري الآن بحث زرع الكلي كنهج علاجية للعلاج من PAP ^15،16.

مقياس الدعم الكلي المعروف أن تنشأ أثناء امبريوجينيسيس وأن تستمر في الرئتين طوال الحياة دون محلها تعميم الكريات البيضاء^2،17. وعلى الرغم من دوران الساعة غير قابل للكشف في الرئتين التماثل الساكن، أبلغ مستويات متفاوتة من دوران صباحا في بعض الشروط السريرية بما في ذلك الإصابة بفيروس الإنفلونزا⁴، تشعيع ميلوابلاتيفي¹⁸، والتعرض إلى الذيفان في سن ¹⁹، وتبلغ من العمر²⁰. يعتقد أن مقياس الدعم الكلي لتجديد ذاتيا عن طريق انتشار منخفضة الدرجة^17،21، ولكن المطالبة ببعض الدراسات التي أجريت مؤخرا أن وحيدات يمكن أن تؤدي إلى عدد سكان من الرئة داخل الأوعية الضامة^22،23 في إطار الظروف التجريبية، لكن الأداء الوظيفي لهذه الضامة الرئوية المحولة حديثا لم يتم تعريفها في أمراض الرئة. وعلاوة على ذلك، فهم عتبة التحفيز في سياق التنشيط صباحا منطقة يحتمل أن تكون مثيرة لاهتمام، والرئة محاولات للحفاظ على توازن بين الإشارات التحريضية والآلات إيمونوريجولاتوري.

التغييرات الفسيولوجية أو باثولوجي التي تؤدي إلى فقدان التنظيم المناعي مهمة تقييم في ظروف سريرية مختلفة (مثل التهابات الجهاز التنفسي وأمراض التهاب الرئة وأمراض الرئة تليفية). ومع ذلك، تزايد الاعتراف هيئة علماء المسلمين كمؤشرات أو حتى محددات الصحة الرئوية^11،24. حاليا، لا تتوفر أية بروتوكولات موحدة للحصاد، وتميز، و/أو الحفاظ على هيئة علماء المسلمين من البشر ونماذج مورين الإكلينيكية. عدم وجود توافق في الآراء بشأن السلائف صباحا وتعمل، وعدم وجود منهجية مفصلة كان الحاجز الرئيسي في دور (أدوار) أتاح للساعة في الصحة الرئوية وأمراض. ويوفر البروتوكول التالي تحديد نهائي، والعزلة، و في المختبر استراتيجية الثقافة إلى حد كبير تحسين فهم السلوك صباحا، وتيسير الدراسات التشخيصية والعلاجية التي استهدفت صباحا.

Protocol

عليها جميع الأساليب الموصوفة هنا "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (IACUC) والمؤسسية استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) في مستشفى القديس يوسف والمركز الطبي.

1-عزل هيئة علماء المسلمين من السوائل مورين للفيسيولوجيا الغسل (بال)

1. تخدير ماوس C57BL/6 عمرها 8 أسبوع مع الكيتامين (87.5 مغ/كغ من وزن الجسم) وإكسيلازيني (12.5 مغ/كغ من وزن الجسم) كوكتيل عبر حقن داخل. المتابعة عند بلوغ الماوس التخدير الجراحي مع فقدان ردود الفعل واسترخاء العضلات.
2. ضع الماوس على سطح تشريح مع الجانب البطني مواجها لأعلى. تطبيق مرهم البيطرية العيون في العيون منع الجفاف ومسح كامل السطح البطني للماوس مع منصات الإعدادية الكحول العقيمة مشبعة بالكحول 70% لتطهير.
3. جبل الماوس مع كل أربعة أرجل مقيدة.
4. فتح تجويف البطن برفق مع أدوات التشريح الجزئي. ويجب الحرص على فتح مجال قدر ممكن دون الأضرار بأي أجهزة الحشوي أو خلق الأنسجة المتدلية.
5. برفق فتح تجويف الصدر ببطء إينسيسينج القفص الصدري من خلال منصف. ومن الناحية المثالية، يمكن اقتطعت القفص الصدري من الجانب إلى الجانب. ويجب الحرص الشديد ليس تصيب الجنب الرئتين أثناء فتح تجويف الصدر.
6. موقع الأجوف فينا أقل شأنا وجعل شق ينزف الماوس. استخدام منصات القطن ماص لامتصاص الدم.
7. ضخ 10 مل الفوسفات المثلج مخزنة المالحة (PBS) في البطين الأيمن (باستخدام 10 مل المحاقن والإبر ز 25) لمسح خلايا الدم الجائل. استيعاب تدفق الدم مع منصات القطن ماصة. بمجرد perfused تماما، ستظهر متبيض الرئتين وثم مستعدون للغسل.
8. بلطف قص فتح الجلد والعضلات في الرقبة لفضح مجرى الهواء. عناية المكوس العضلات المجاورة، والغضاريف، والأنسجة الدهنية دون إلحاق الضرر بالقصبة الهوائية.
9. إجراء شق صغير (< 2 مم) في القصبة الهوائية الخلفي للحنجرة. ينبغي أن يكون هذا الشق فقط ما يكفي لإدخال قسطرة في حين يزال مربوطا القصبة الهوائية إلى الحنجرة. إدراج قسطرة 22 ز 1 بوصة دون إبرة في القصبة الهوائية إلى الرئتين. تأمين القسطرة مع خياطة مزين حرير (4-0؛ وعدم الامتصاص) مع عقده مربعة.
   ملاحظة: القسطرة يحتاج إلى تهذيب استناداً إلى حجم الماوس. قصيرة أو طويلة للغاية بالقسطرة تميل إلى تسرب أو تمزق مجرى الهواء أثناء الغسل. يجب أن يكون طول القسطرة مثل أنه عندما تم إدخالها بالكامل يبقى نصيحة جيدا داخل القصبة الهوائية ولا تصل إلى الشعب الهوائية الأولية.
10. إرفاق 1 مل حقنه مليئة المثلج بال المخزن المؤقت (Ca^{2 +} و Mg^{2 +} مجاناً برنامج تلفزيوني + 1 ملم حمض الإيثيلين، يدتا) بالقسطرة وغرس المخزن المؤقت ببطء إلى الرئتين. وهذا سوف تضخم الرئتين. الاحتفاظ بحقنه تعلق بالقسطرة لمدة خمس ثوان وثم نضح السوائل الغسل بلطف سحب المكبس. وهذا سوف تنكمش الرئتين. جمع السائل في أنبوب مخروطي 15 مل على الجليد.
11. كرر "الخطوة 1، 10" لتسع مرات أكثر وتجمع السائل الغسل. عدم تجاوز المخزن المؤقت 1 مل كل تدفق، التي قد تتجاوز قدرة الرئة وتؤدي إلى تمزق.
12. Euthanize الماوس مع CO₂ جرعة IACUC الموافقة على البروتوكول.
13. الطرد المركزي السائل 10 مل BAL في 250 g x عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بيليه خلية يحتوي على خلايا بال.
    تنبيه: بيليه قد تكون صغيرة جداً، لذا توخي الحذر عند يسفط المادة طافية.
14. ريسوسبيند خلايا ال 100 ميكروليتر من تدفق/الفرز المخزن المؤقت (برنامج تلفزيوني + + + يدتا 1 مم 2% الحرارة إبطال مصل الدم البقري الجنين (FBS) 25 مم حمض N-2-Hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulphonic (حبيس)).
15. منع الربط جسم غير محدد لمستقبلات Fc بإضافة كتلة Fc الماوس (استنساخ 2.4G2، 10 ميكروغرام/مل) وحضانة لمدة 20 دقيقة على الجليد.
16. أداء جسم تلطيخ جنبا إلى جنب مع الأسفار ناقص واحد (FMO) ووصمة عار واحد يتحكم^11،25. تقييم ال (انظر الجدول للمواد) يليه الخلايا بمحلل خلية خلية واحدة التدفق الخلوي التحليل ببرمجيات التحليل المناسب (انظر الجدول للمواد).
17. عزل هيئة علماء المسلمين بخلية تنشيط fluorescence أرز (انظر الجدول للمواد) مباشرة إلى الماوس 1 مل أنا المتوسطة الثقافة عندما تهدف هيئة علماء المسلمين للثقافة في المختبر أو في فيفو نقل الخلية. وبدلاً من ذلك، (انظر الجدول للمواد) تستكمل فرز هيئة علماء المسلمين في المخزن المؤقت لتحلل 1 مل مع 10 ميكروليتر/مل β-ميركابتوثانول لاستخراج الحمض النووي الريبي.

2-عزل هيئة علماء المسلمين من الماوس الرئة، تعليق خلية واحدة

1. تخدير ماوس C57BL/6 عمرها 8 أسبوع مع الكيتامين (87.5 مغ/كغ من وزن الجسم) وإكسيلازيني (12.5 مغ/كغ من وزن الجسم) كوكتيل عبر حقن داخل. المتابعة عند بلوغ الماوس التخدير الجراحي مع فقدان ردود الفعل واسترخاء العضلات.
2. ضع الماوس على سطح تشريح مع الجانب البطني مواجها لأعلى. تطبيق مرهم البيطرية العيون في العيون منع الجفاف ومسح كامل السطح البطني للماوس مع منصات الكحول العقيمة مشبعة بالكحول 70% لتطهير.
3. جبل الماوس مع كل أربعة أرجل مقيدة.
4. فتح تجويف البطن برفق مع أدوات التشريح الجزئي. ويجب الحرص على فتح مجال قدر ممكن دون الأضرار بأي أجهزة الحشوي أو خلق الأنسجة المتدلية.
5. برفق فتح تجويف الصدر ببطء إينسيسينج القفص الصدري من خلال منصف. ومن الناحية المثالية، يمكن اقتطعت القفص الصدري من الجانب إلى الجانب. ويجب الحرص الشديد ليس تصيب الجنب الرئتين أثناء فتح تجويف الصدر.
6. موقع الأجوف فينا أقل شأنا وجعل شق ينزف الماوس. استخدام منصات القطن ماص لامتصاص الدم.
7. ضخ 10 مل المثلج برنامج تلفزيوني في البطين الأيمن (باستخدام 10 مل المحاقن والإبر ز 25) لمسح خلايا الدم الجائل. بمجرد perfused تماما، ستظهر متبيض الرئتين وجاهزة للحصاد.
8. تشريح خارج الرئتين بقطع القصبة الهوائية والأوعية الدموية والأربطة في أنبوب مخروطي 15 مل مع 5 مل البرد المتوسطة "تعديل النسر" دولبيكو (دميم). الحفاظ عليه على الجليد حتى الخطوة التالية.
9. Euthanize الماوس مع CO₂ جرعة IACUC الموافقة على البروتوكول.
10. نقل الرئتين perfused إلى طبق ثقافة عقيمة وخالية من مولد 60 ملم مع 3 مل دميم. مع مساعدة من تشريح الملقط ندف الخطوط الجوية وغيرها من المواد الصلبة غير الرئة الأنسجة، إذا كانت موجودة. تخطر على أنسجة الرئة مع مشرط إلى < حجم 1 مم.
11. إضافة 300 ميكروغرام/مل "ليبيراسي ليرة تركية" و 5 U/mL الدناز أنا، مزيج من بيبيتينج واحتضانها في 37 درجة مئوية في حاضنة لمدة 25 دقيقة. بلطف المزيج مرة واحدة قبل بيبيتينج بعد 10 دقائق.
12. يمر الرئتين ينتابها 100 ميكرومتر خلية مصفاة مثبتة على أنبوب مخروطي 50 مل. استخدام الجزء الخلفي من المكبس من حقنه 1 مل إلى الهريس حتى كتل الخلية في عامل التصفية. يجب غسل الفلتر مع 20 مل أغسل المخزن المؤقت (برنامج تلفزيوني + 2% الحرارة المعطل FBS + 2 مم يدتا).
13. الطرد المركزي في 500 غرام x عند 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. تجاهل المادة طافية وريسوسبيند بيليه الخلية في المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي 20 مل.
14. كرر الخطوتين 2.12 و 2.13 مرتين، تغيير عامل التصفية والانبوب في كل مرة. مغطس قبل التصفية في المخزن المؤقت للمياه والصرف الصحي لأكثر من خمس دقائق يزيد الغلة صباحا. إعداد تعليق خلية واحدة بإضافة 100 ميكروليتر تدفق/الفرز المخزن المؤقت إلى بيليه الخلية.
15. منع الربط جسم غير محدد لمستقبلات Fc بإضافة كتلة Fc الماوس (استنساخ 2.4G2، 10 ميكروغرام/مل) وحضانة لمدة 20 دقيقة على الجليد.
16. أداء جسم تلطيخ جنبا إلى جنب مع FMO وعناصر تحكم مفردة-وصمة عار^11،25. تقييم الرئة (انظر الجدول للمواد) متبوعاً بالخلايا بمحلل خلية خلية واحدة التدفق الخلوي التحليل بتحليل البرمجيات.
17. AMs الفرز قبل أرز خلية (انظر الجدول للمواد) مباشرة إلى الماوس 1 مل أنا المتوسطة الثقافة عندما تهدف هيئة علماء المسلمين للثقافة في المختبر أو في فيفو نقل الخلية. وبدلاً من ذلك، فرز مقياس الدعم الكلي إلى 1 مل تحلل المخزن المؤقت تستكمل مع 10 مل ميكروليتر/β-ميركابتوثانول لاستخراج الحمض النووي الريبي.

3-عزل هيئة علماء المسلمين من البشر بال السائل

1. ترتيب نقل السائل بال البشرية من العيادة إلى المختبر في 4 درجات مئوية.
2. الطرد المركزي بال السائل (10-50 مل) في 250 g x عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. بيليه خلية يحتوي على خلايا بال¹¹.
3. أغسل بيليه مع 20 مل أغسل المخزن المؤقت (برنامج تلفزيوني + 2% الحرارة المعطل FBS + 2 مم يدتا) وأجهزة الطرد المركزي في 250 g x عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
4. ريسوسبيند خلايا BAL في 100 ميكروليتر من تدفق/الفرز المخزن المؤقت (برنامج تلفزيوني + 2% الحرارة المعطل FBS يدتا 1 مم + 25 مم حبيس).
5. كتلة الربط جسم غير محدد لمستقبلات Fc بإضافة كتلة Fc البشرية (استنساخ Fc1.3070، 25 ميكروغرام/مل) وحضانة لمدة 20 دقيقة على الجليد.
6. أداء جسم تلطيخ جنبا إلى جنب مع FMO وعناصر تحكم مفردة-وصمة عار^11،24. تقييم ال (انظر الجدول للمواد) متبوعاً بالخلايا بمحلل خلية خلية واحدة التدفق الخلوي التحليل بتحليل البرمجيات.
7. AMs الفرز قبل أرز خلية (انظر الجدول للمواد) مباشرة إلى 1 مل ص البشرية الثقافة المتوسطة أو 1 مل تحلل المخزن المؤقت تستكمل مع 10 ميكروليتر/مل β-ميركابتوثانول.

4. في المختبر الثقافة من AMs

1. وبعد فرز الخلايا، الحصاد الخلايا التي سينتريفوجينج في 250 g x عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
2. ريسوسبيند مقياس الدعم الكلي البشرية في 1 مل ص البشرية الثقافة المتوسطة [روزويل بارك التذكاري المعهد المتوسط (ربمي) 1640 تستكمل مع 10% FBS، 20% L-929 الثقافة طافية (كمصدر لمستعمرة بلعم حفز عامل (م-CSF)، 100 يو/مليلتر تركيز النهائي)، بيروفات صوديوم 1 مم، 10 ملم حمض N-2-hydroxyethylpiperazine-N'-2-ethanesulphonic (حبيس)، و 1 x البنسلين/ستربتوميسين (اختياري)]. وبالمثل، ريسوسبيند الماوس مقياس الدعم الكلي في 1 مل الماوس المتوسطة الثقافة صباحا [دميم وتستكمل مع 10% FBS والثقافة L-929 20% بيروفات صوديوم طافية (كمصدر ل M-CSF، 100 يو/مليلتر تركيز النهائي)، 1 مم، 10 مم حبيس 1 x البنسلين/ستربتوميسين (اختياري )].
3. تعداد تريبان الأزرق-باستثناء الخلايا قابلة للتطبيق بعداد خلايا وضبط تركيز خلية قابلة للتطبيق في 1 × 10⁶/mL.
   ملاحظة: من الناحية المثالية، تصل إلى 5 × 10⁵ هيئة علماء المسلمين يمكن أن تكون معزولة عن بال السائل التي تم جمعها من ماوس ذكور C57BL/6 أسبوع 8-10 قديمة. العائد صباحا من هضم الرئة الماوس هو متغير وقد يكون أقل قليلاً من السائل الماوس بال. صباحا العائد من السوائل بال البشرية يعتمد على حجم السائل بال، أن إجمالي حجم المياه المالحة التي تستخدم في الغسل، وحالة المريض السريرية.
4. استناداً إلى الغلة وضرورة التجريبية، بذور الخلايا الموجودة في الشرائح الدائرة أو أطباق الثقافة أو قوارير الثقافة. ومن الناحية المثالية، البذور مقياس الدعم الكلي في 1 × 10⁵/mL مع متوسطة 10 مل في قارورة زراعة الأنسجة T25.
5. احتضان الخلايا في حاضنة هوميديفيد مع 5% CO₂ الغلاف الجوي 37 درجة مئوية.
   ملاحظة: سوف تنمو كخلايا ملتصقة هيئة علماء المسلمين وهي النمو البطيء جداً (مضاعفة الوقت > 7 أيام).
6. في 24 ساعة بعد البذر، ينبغي أن تكون هيئة علماء المسلمين تمسكا وسوف لا يمكن فصل قبل تغيير لطيف للثقافة المتوسطة. إزالة المتوسطة بتطلع من طرف واحد، وتجديد مع الطازجة المتوسطة استعد مسبقاً إلى 37 درجة مئوية.
   ملاحظة: يمكن الآن أن الخلايا تستخدم لتقييم الفيزيولوجيا صباحا أو آثار المنبهات. هيئة علماء المسلمين التي نمت في شرائح الدائرة يمكن أن تكون الملون مريح مع الأجسام المضادة المناسبة، وتعتبر مثالية للتصور مجهرية. لتقييم تدفق سيتوميتريك، يتم حصاد مقياس الدعم الكلي بالحضانة مع الخلية غير الانزيمية الناي بالحل.
7. نضح المتوسطة الثقافة وإضافة حل الناي بما يكفي لتغطية سطح الثقافة (حوالي 2 مل في قارورة T25) واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقائق. إلغاء لا سيكون ضروريا، ولا ينصح كشط الخلايا ميكانيكيا. اضغط برفق الجانبين وإضافة 1-2 مل تدفق/الفرز المخزن المؤقت بلطف "الماصة؛" صعودا ونزولاً فصل معظم الخلايا ملتصقة.
8. لدراسات الحمض النووي الريبي، والخلايا مباشرة على الطبق الثقافة عن طريق إضافة تحلل المخزن المؤقت.

النتائج

نهج سيتوميتريك تدفق لتحديد الماوس AMs يرد في الشكل 1. وهذا يشمل تحليل لمجموعة الحد الأدنى من العلامات السطحية اللازمة في التمييز بين هيئة علماء المسلمين من البالعات الأخرى المقيمة في الرئة أو التسلل إلى الرئة. مطلوب تحليل تفاضلي للتعرف على مقياس الدعم الكل...

Discussion

هيئة علماء المسلمين هي الضامة المقيم في الرئة الحية الطويلة التي ملء الرئتين تبدأ عند الولادة ودائمة على مدى طوال فترة الحياة²⁶. تم الاعتراف بأدوارهن في⁷ وعلم الأمراض الرئوية علم وظائف الأعضاء¹² وقدرتها على التنبؤ بالمناعة الذاتية الرئوية^24<...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Non-enzymatic cell dissociating solution	Millipore-Sigma	C5789
Puralube Vet Ointment	Dechra	620300
22G Catheter	Terumo Medical Products	SR-OX2225CA
4-0 Non-absorbable silk braided suture	Kent Scientific	SUT-15-2
Dulbecco’s phosphate buffered saline	Corning	21-031-CM
Mouse Fc block	BD Biosciences	553142
Lysis buffer (PureLink RNA Kit)	Thermo Fisher Scientific	12183018A
b-Mercaptoethanol	Millipore-Sigma	M6250
FACSAria II cell sorter	BD Biosciences	644832
Ketamine  (Ketathesia)	Henry Schein	56344
Xylazine  (AnaSed)	Akorn	139-236
RPMI 1640	Corning	10-040-CM
DMEM	Corning	10-017-CM
Liberase TL	Millipore-Sigma	5401020001
DNase I	Millipore-Sigma	AMPD1-1KT
100μm cell strainer	Corning	352360
Human Fc block	BD Biosciences	564220
EDTA	Corning	46-034-CI
Countess II Automated Cell Counter	Thermo Fisher Scientific	AMQAX1000
Trypan Blue Solution	Thermo Fisher Scientific	15250061
HEPES	Corning	25-060-CI
Fetal Bovine Serum	Atlanta Biologicals	S11150H
L-929 cell line	American Type Culture Collection	ATCC, CCL-1
Penicillin/Streptomycin	Corning	30-002-CI
Sodium Pyruvate	Corning	25-000-CI
T25 Tissue culture flask	Thermo Fisher Scientific	156367
60 mm culture dish	Millipore-Sigma	CLS3261
15 mL Conical tube	Corning	352097
50 mL Conical tube	Corning	352098
LSRFortessa cell analyzer	BD Biosciences	657669
FlowJo	FlowJo	v10.4	Analysis Software
Anti-CD45 (Mouse)	Biolegend	147709	Clone I3/2.3, FITC conjugated
Anti-CD11b (Mouse)	Biolegend	101228	Clone M1/70, PerCP/Cy5.5 conjugated
Anti-CD11c (Mouse)	BD Biosciences	565452	Clone N418, BV 421 conjugated
Anti-I-Ab (Mouse)	Biolegend	116420	Clone AF6-120.1, PE/Cy7 conjugated
Anti-Siglec-F (Mouse)	BD Biosciences	562757	Clone E50-2440, PE-CF594 conjugated
Anti-Siglec-H (Mouse)	Biolegend	129605	Clone 551, PE conjugated
Anti-F4/80 (Mouse)	Biolegend	123118	Clone BM8, APC/Cy7 conjugated
Anti-Ly-6C (Mouse)	Biolegend	128035	Clone HK1.4, BV605 conjugated
Anti-CD64 (Mouse)	Biolegend	139311	Clone X54-5/7.1, BV711 conjugated
Anti-CD24 (Mouse)	BD Biosciences	563115	Clone M1/69, BV510 conjugated
Anti-CD103 (Mouse)	BD Biosciences	745305	Clone OX-62, BV650 conjugated
Anti-CD317 (Mouse)	Biolegend	127015	Clone 927, APC conjugated
Anti-CXCR1 (Mouse)	Biolegend	149029	Clone SA011F11, BV785 conjugated
Anti-CD45 (Human)	Biolegend	304017	Clone HI30, AF488 conjugated
Anti-CD11b (Human)	Biolegend	101216	Clone M1/70, PE/Cy7 conjugated
Anti-HLA-DR (Human)	Biolegend	307618	Clone L243, APC/Cy7 conjugated
Anti-CD169 (Human)	Biolegend	346008	Clone 7-239, APC conjugated
Anti-CD206 (Human)	Biolegend	321106	Clone 15-2, PE conjugated
Anti-CD163 (Human)	Biolegend	333612	Clone GHI/61, BV421 conjugated